洛阳地区汉族HLA—DRB1^＊04等位基因的PCR—SSO分型

对河南洛阳地区汉族进行了ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊０４等位基因的ＰＣＲ－ＳＳＯ分型，采用第１２届国际组织相容性专题讨论会（１２ｔｈＩＨＷＣ）推荐的引物和序列特异性寡核苷酸探针，可检测１７个ＤＲＢ１＊０４组特异性等位基因（ＤＲＢ１＊０４０１－０４１７）。在１１６份无血缘关系健康人ＤＮＡ标本中有１６份为ＤＲＢ１＊０４，其中１份为纯合，ＤＲＢ１＊０４的基因频率为０．０７１５。ＤＲＢ１＊０４等位基因分布于５个不同的型别，分别是ＤＲＢ１＊０４０１、０４０３、０４０４、０４０５和０４０６。基因频率以ＤＲＢ１＊０４０５最高（０．０２６２），ＤＲＢ１＊０４０６其次（０．０１７４），二者分别构成ＤＲＢ１＊０４基因组的３５．８％和２３．８％。其它３种等位基因的基因频率均较低（０．００８７）。此外对ＤＲＢ１＊０４等位基因在中国南北方汉族、民族（日本，中国）及人种（白种，黄种）中的分布进行了比较与讨论。将为ＨＬＡ与疾病相关性、移植免疫及人类学研究提供有价值的参考数据。

用PCR-SSO方法研究云南西部彝族HLA-DQB1基因的多态性

应用PCR朣SO基因分型技术，对我国云南西部地区3代内无血缘关系的76个彝族健康个体进行了HLA-DQB1位点的基因分型。结果显示，在DQB1的38个等位基因中，观察到13个等位基因。云南西部彝族表现为DQB1*0301（36.18%～36.84%）最常见。其他频率大于5%的等位基因还有DQB1*0502（10.53%～11.18%）、DQB1*0401（9.21%）、DQB1*0302（8.55%～9.21%）、DQB1*0601（7.89%）、DQB1*05031（6.58%）、DQB1*03032（5.92%～6.58%）。和其他13个华人群体DQB1等位基因的频率比较分析表明，总体上，云南西部彝族和其他各华人群体间都存在很大的差异。显示其HLA等位基因频率分布的民族独特性。

应用SSP-PCR/SSO方法进行中国辽宁汉族人HLA-DRB1基因的遗传多态性研究

对１５９名中国辽宁汉族个体的基因组ＤＮＡ进行分析，共检出４２种等位基因，其中以ＤＲＢ１０９０１２（１２．８％）、０７０１（１０．７％）、１５０１（１０．４％）最为常见，其次为ＤＲＢ１１２０１（７９％）、１２０２（７５％）、１１０１（６６％）、０３０１（５．０％）。并发现辽宁汉族人ＤＲＢ１等位基因频率与白种人间存在明显差异，揭示不同人种有其自己的主要等位基因。

PCR-SSP/PCR-SSO两种KIR基因分型方法的比较

目的杀伤细胞免疫蛋白样受体(KIR)基因在自然杀伤细胞活性调节、机体抗感染、移植免疫过程中发挥重要作用。在脐带血移植中,KIR基因分型的效率和准确关系到移植的成败。为了满足临床上对KIR基因分型的要求,对比分析聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)和聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针(PCR-SSO)两种方法,试图建立一个高效便捷检测KIR基因分型的方法学体系。方法从2018年到2019年已外送到第三方检测实验室(北京博富瑞医学检验实验室有限公司)做过KIR基因分型检测的脐带血样本中随机取出12份,分别用PCR-SSP及PCR-SSO商品化试剂盒进行KIR基因分型检测,并通过凝胶电泳分析或MATCH IT!DNA软件分析,获取KIR基因分型结果。结果12例脐带血样本中,PCR-SSO方法学检测的结果与原PCR-SSO方法检测结果完全一致,PCR-SSP方法学检测的结果与原PCR-SSO方法检测结果9例相同,有2例因出现漏孔而无法判读,有1例出现了假阳性带。结论PCR-SSO方法学检测KIR基因效果优于PCR-SSP,但是PCR-SSO方法学也存在当微珠的荧光校准值接近于临界值时,结果出现错判的现象;为保证KIR基因分型的准确度,建议PCR-SSP方法出现漏孔或者PCR-SSO方法荧光校准值接近于临界值时两种方法相互验证。

HLA DRB基因SSO分型方法的研究

按照第11届国际组织相容性抗原研讨会（IHW）工作会议HLAⅡ类PCR－SSO分型标准和美国国立骨髓供者计划组织（NMDP）对HLADRB基因分型要求，设计合成一对引物，可同时扩增HLA-DRB1＋B3＋B4＋BSDNA片段，长度为256bp，设计合成不同片段大小探针27种，可检出DRB座位上DRB1的39种等位基因，DRB3的3种等位基因，DRB4的1种等位基因和DRB5的3种等位基因。

成都地区儿童消化道疾病及HLA-DQB1多态性分析

目的:对行胃镜检出的慢性胃炎患儿行H.pylori检查,分析其检查阳性和阴性患儿的HLA-DQB1等位基因的遗传多态性。方法:病例对照法研究H.pylori阳性和阴性患儿,采用PCR-SSO杂交方法确定HLA-DQB1等位基因型别,病例对照为健康儿童。结果:胃镜检查242例,有上消化道疾病患儿222例,占91.74%。对86例慢性胃炎者行H.pylori检查,阳性57例,占66.28%;阳性患儿DQB1*0602等位基因阳性率低于阴性患儿(χ2=6.97,P<0.01),阳性健康儿DQB1*03032阳性率低于阴性健康儿(χ2=6.97,P<0.01)。结论:胃镜检查儿童上消化道疾病以慢性胃炎为主,H.pylori感染率超过2/3。DQB1*03032和DQB1*0602可能是抵抗H.pylori感染和相关性胃炎的遗传保护因素。

311份脐血样本HLA基因型无法判读原因探讨

本研究探讨影响脐血样本HLA分型结果的因素。采用序列特异性引物PCR反应(sequence-specific prim-ing,SSP)对311份经过PCR-SSO和PCR-SSP方法仍无法判读HLA型别的脐血进行HLA低分辨重新分型,并对其中7份仍然无法确定HLA型别的脐血样本进行直接测序(sequence-based typing,SBT),分析无法判读的原因。结果显示:311份脐血样本中99.4%样本不能判定是因为当时HLA分型方法本身的限制性所造成的,0.6%样本不能判定的原因怀疑是脐血中存在母血污染所致。结论:HLA基因分型方法中序列特异性寡核苷酸探针杂交法(sequence-specific oligonucleotide probe hybridization,SSO)探针设计不足及PCR-SSP等位基因特异性引物的缺乏是影响HLA分型结果无法判读的主要因素。

新等位基因HLA-A＊ 1127的确认和序列分析

目的识别确认临床样本中一个新的HLA等位基因。方法应用PCR-SSO,PCR-SSP基因分型技术对HLA分型,对可能的HLA新等位基因进行分子克隆和DNA测序,分析与最同源的A*1104的差异。结果该序列与已知的所有HLA-A等位基因序列不一致,与A*1104的差异表现在第3外显子区域中的核苷酸570 G→C,571 T→G导致氨基酸分别由谷氨酸→天冬氨酸,色氨酸→甘氨酸。结论该基因为HLA-A位点的一个新等位基因,已被WHO HLA因子命名委员会于2007年8月正式命名为HLA-A*1127。

流式技术在骨髓库标本基因分型中的应用初探

目的探讨流式技术结合SSO方法在骨髓库标本HLA分型中的应用。方法使用序列特异性寡核苷酸探针结合流式技术(Flow-SSO)为中华骨髓库捐献者进行HLA检测,得出各位点的等位基因频率,并使用χ2检验对各位点的基因分布进行Hardy-Weinberg平衡检验。结果970份标本检出HLA-A、B、DRB1位点共61种基因座位,其中,A位点共16种等位基因,66种基因型,未见A34与A36;HLA-B位点共32种等位基因,188种基因型;HLA-DRB1位点共检出13种等位基因,85种基因型。各位点分布均符合Hardy-Weinberg平衡。中华骨髓库实验室以2%的比例对所检标本进行抽检,各结果均达质控要求。结论流式技术结合SSO方法是大批量标本HLA检测中较为理想的方法。

上海地区特发性膜性肾病与HLA单倍型关联的研究

目的 探讨上海人群特发性膜性肾病(IMN)的易感性与人类白细胞抗原(HLA)单倍型之间的关联。方法 用PCR—SSO方法检测上海地区71例正常人和33例IMN患者，行HLA—Ⅱ类基因分型，并同时行单倍型分析。结果 正常对照组以DR9—DQA1*0301、DR4—DQA1*0301、DR12—DQB1*0301、DR9—DQB1*0303为常见单倍型。IMN组以DR2—DQA1*0101单倍型频率最高，呈强连锁不平衡。两组间比较差异有显著性，单倍型频率(Hf)=12．86，P<0．05。结论 上海地区IMN的易感性与特定的HLA-DR2—DQA1*0101单倍型相关联。

新等位基因HLA-B＊4060的认定

应用PCR-SSO基因分型技术发现可能的HLA新等位基因,对PCR产物进行测序及克隆测序,确认与最同源HLA等位基因序列的差异。发现一个样本的HLA-B位点结果异常,其核苷酸序列与已知所有HLA-B位点等位基因序列均不一致,与同源性最高的等位基因B*400102在第三外显子区域有7个碱基的差异。判断该等位基因为HLA-B位点的一个新等位基因,于2005年7月被WHOHLA因子命名委员会正式命名为HLA-B*4060。

内蒙古地区蒙古族儿童过敏性紫癜与HLA-B基因的关联性

目的:探索内蒙地区蒙古族儿童过敏性紫癜(AP)与HLA-B等位基因的关联性,可望找出相关基因,以探寻AP的部分发病机制及其防治前景。方法:采用病例对照研究策略,引入PCR-SSO技术,在蒙古族儿童人群中,选择AP儿童病例组56例和健康儿童对照组66例,进行HLA-B等位基因的型别分析。基因频率比较在单因素四格表χ2检验或Fisher检验的基础上,再做Logistic多元回归分析。结果:病例组HLA-B*15等位基因频率为26.8%,比对照组的10.6%增高(P=0.001);而病例组HLA-B*07和HLA-B*40等位基因频率分别为1.8%和7.1%,分别比对照组的12.1%和16.7%降低(x2分别为9.472和5.086,P分别为0.002和0.024)。结论:HLA-B*15可能是内蒙地区蒙古族儿童AP发病单体型中的一个遗传易感基因;而HLA-B*07和HLA-B*40可能为其两个遗传保护基因。

寡核苷酸DNA Microarray用于HLA DRB1基因分型的研究

对寡核苷酸DNAMicroarray用于HLADRB1基因分型的技术进行研究。常规的酚 /氯仿法提取标准血样基因组DNA ,在DRB1的exon 2区域设计一对引物 ,经PCR扩增基因组相应区段并用Cy5 dCTP进行标记。设计寡核苷酸分型探针 ,将探针固定在APS PDC法制作的DNAMicroarray上 ,用标记的PCR产物与之杂交 ,扫描仪对杂交结果进行扫描 ,Imagene软件对杂交图象进行分析。共检测了 33例标准血样的HLADRB1基因型。检测结果证明研制的DNAMicroarray准确、灵敏。DNAMicroarray技术可以有效地检测DRB1等位基因 ,对比常规的PCR SSP和PCR SSO方法、分型基因芯片方法更为直观 。

HLA新等位基因HLA—A＊2451的认定

目的发现和认定1个HLA新等位基因。方法应用PCR-SSO基因分型技术筛选可能的HLA新等位基因,PCR产物测序和基因克隆DNA测序,通过软件分析基因序列及与最同源HLA等位基因序列的差异。结果检出1样本,其HLA-A位点显示出多种不一致的结果,其中包括与已知所有HLA-A等位基因谱型不一致的新谱型,其HLA-A位点第3外显子序列与所有已知HLA-A等位基因序列不一致。软件分析表明该基因序列与同源性最高等位基因A*2415的差异只是在外显子3区域中的363位碱基发生了G→A1个碱基替代,并导致相应的121密码子由ATG(M)→ATA(I)。结论该等位基因为HLA-A位点的1个新等位基因,已被WHOHLA因子命名委员会正式命名为HLA-A*2451。

西藏珞巴族HLA-DRB1基因多态性

目的:检测西藏珞巴族HLA DRB1等位基因及基因型频率,并将其与18个人群的HLA DRB1频率进行比较,绘制系统发生树。方法:应用聚合酶链反应序列特异性寡核苷酸探针(PCR SSO)技术,对我国西藏南部林芝地区3代内无血缘关系的92个珞巴族健康个体进行了HLA DRB1位点的基因分型。采用不加权配对组算术方法(UPGMA)绘制系统发生树。结果:在92例珞巴族个体的184个等位基因中共检出11种HLA DRB1等位基因,其中HLA DRB1*04(27. 20% ),DRB*12(25. 50% )在珞巴族中最常见,共占珞巴族可检出等位基因的52. 70%;其他频率大于5%的等位基因还有DRB1*14(15. 20% ),DRB1*15(9. 80% )和DRB1*08(8. 20% )。结论:西藏珞巴族HLA DRB1等位基因分布与其他华人群体均存在很大的差异,显示其HLA等位基因频率分布的民族独特性;在遗传距离上珞巴族和藏族最近,这与民族学、历史学和社会学研究结果相一致。

青海土族、撒拉族HLA-DQA1和-DQB1基因多态性探讨

目的 :检测青海土族和撒拉族健康个体HLA DQA1和 DQB1等位基因频率 ,了解和分析这两个民族的HLA DQA1和 DQB1基因多态性。方法 :用PCR SSO方法检测 132名土族和 80名撒拉族健康个体的HLA DQA1和 DQB1的基因多态性 ,并将所得结果与国内其他民族的同类资料进行比较。结果 :土族和撒拉族在HLA DQA1和 DQB1高频率等位基因分布上有共同点 ,也有一定的独特性。这两种民族HLA DQA1 0 10 2和 0 5 0 1以及DQB1 0 2 0 1、 0 30 1、 0 4 0 2和 0 6 0 2基因分布频率上具有显著性差异。结论 :土族和撒拉族与北方诸民族的等位基因频率接近 ,而与其他南方诸民族的差异相对较大。

原发性IgA肾炎与HLA-DQB1等位基因遗传多态性的研究

应用ＰＣＲ／ＳＳＯ方法对５１例经肾穿刺证实ＩｇＡ 肾病患者和９６名健康对照人员进行了ＨＬＡ－ＤＱＢ１等位基因分型。结果显示ＩｇＡＮ 患者组中ＤＱＢ１０３０２基因频率明显高于正常对照组（Ｐｃ ＜ ０．００１，ＲＲ为８．２０）；ＩｇＡＮ患者组中ＤＲ４、ＤＱＢ１０３０２均为阳性的表型频率也明显高于对照组（Ｐ＜ ０．００１，ＲＲ为６．４３），而ＤＲ４阳性、ＤＱＢ１０３０２阴性的表型频率在两组中无差异。推测ＤＱＢ１０３０２等位基因可能与上海汉族ＩｇＡＮ的发病有一定的关联。

河南人群病毒性丙型肝炎与HLA多态性的关联研究

目的了解河南地区病毒性丙型肝炎和HLA多态性的相关性,为丙型病毒性肝炎的预防、治疗以及预后提供理论依据。方法本研究从河南某医院随机抽取110例临床上确诊为病毒性丙型肝炎的患者为研究对象,并以河南省红十字血液中心3 874名健康献血者为对照,采用聚合酶链-序列特异性寡核苷酸链技术(polymerse chain reaction-sequence-specific oligonucleotide,PCR-SSO)对HLA-Ⅰ类(A和B)和Ⅱ类(DRB1)基因进行分型。通过比较分析2组研究对象间HLA等位基因频率分布差异,找出HLA多态性和病毒性丙型肝炎的相关性。结果在低分辨水平上,A*03在健康对照组中更为常见;而A*29、B*51则在慢性HCV感染组中频率更高。这说明在HCV感染时,A*03可能是保护机体的基因,而A*29、B*51与促进感染发生具有一定的相关性。在高分辨水平上,A*03:01在健康对照组中更为常见;而A*29:01、A*33:01、B*07:05、B*13:01、B*27:03、B*44:02、DRB1*08:01、DRB1*14:01则在慢性HCV感染组中频率更高。这说明在HCV感染时,A*03:01可能是保护机体的基因,而A*29:01、A*33:01、B*07:05、B*13:01、B*27:03、B*44:02、DRB1*08:01、DRB1*14:01与感染发生具有一定的相关性。结论我们的研究反映了河南地区人群中病毒性丙型肝炎与HLA多态性的相关性,为丙型病毒性肝炎的预防、治疗以及预后提供理论依据。

人类白细胞抗原-DQB1与儿童十二指肠溃疡和幽门螺杆菌感染的相关性研究

目的探讨人类白细胞抗原(HLA)-DQB1等位基因与儿童十二指肠溃疡(DU)和幽门螺杆菌(H.pylori)感染的遗传关联性。方法采用非同位素标记的聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针(PCR-SSO)杂交的方法,对上海地区汉族健康儿童80例、DU患儿58例的HLA-DQB1等位基因进行分型;并同时检测DU患儿H.pylori感染情况。结果在DU患儿中,HLA-DQB1×05031等位基因频率明显高于正常健康儿童(分别为:6.02%、0.63%,P<0.05,RR=9),而在H.pylori阳性和H.pylori阴性DU组之间差异无显著性。结论HLA-DQB1×05031与DU呈正相关,DU患儿与正常对照组儿童之间存在着遗传学的差异;虽然H.pylori感染是DU的重要致病因素,但HLA-DQB1×05031并不是通过H.pylori感染而影响DU的遗传易感性。

甘肃汉族HLA-DRB1基因多态性与白血病的相关性研究(英文)

为了研究甘肃地区汉族白血病病人易感性与HLADRB1基因多态性的相关性研究并寻找白血病的易感基因,采用PCR和特异性寡合苷酸探针杂交(PCR/SSO)法,对74名西北汉族白血病工人和82名健康对照者的HLADRB1基因分型进行了研究。结果表明:甘肃地区汉族急性髓性白血病病人HLADRB103(χ2=8.125,P=0.004),HLADRB107(χ2=13.526,P=0.000),HLADRB108(χ2=18.855,P=0.000)和HLADRB113(χ2=7.039,P=0.008)明显增多;慢性髓性白血病病人HLADRB107(χ2=5.689,P=0.017),HLADRB111(χ2=7.73,P=0.005),HLADRB112(χ2=4.234,P=0.040),HLADRB113(χ2=38.333,P=0.000)明显增多。急性淋巴细胞白血病病人HLADRB101(χ2=5.294,P=0.021)明显增多。这些数据与对照组比较有差异性。结论:HLADRB103,HLADRB107,HLADRB108,HLADRB113与急性髓性白血病正相关。HLADRB107,HLADRB111,HLADRB112,HLADRB113与慢性髓性白血病的发病正相关。HLADRB101急性淋巴细胞白血病病人的发病有一定联系。可以推测,HLA构象的多态性与白血病发生有相关性。