qPCR-HRM曲线分析技术与普通PCR加直接测序法检测胶质瘤EGFR突变比较

目的:比较实时聚合酶链反应-高分辨率融解(qPCR-HRM)曲线分析技术和普通PCR法加直接测序法检测胶质瘤患者EGFR基因突变类型,探讨适用于临床的EGFR基因突变检测方法,为胶质瘤患者术后放射、化学治疗及预后判断研究提供可靠的依据。方法:用普通PCR加测序法与qPCR-HRM曲线分析技术检测胶质瘤患者EGFR基因突变类型,检测结果比较采用卡方检验。结果:两种方法检测EGFR外显子19基因突变结果比较差异无统计学意义,且qPCR-HRM曲线分析技术比直接测序法更快捷、灵敏。结论:与直接测序法相比,qPCR-HRM曲线分析技术可能更适用于临床检测胶质瘤患者标本EGFR突变性质。

高分辨率熔解曲线分析应用于结直肠肿瘤分子检测现状

高分辨率熔解曲线分析（HRM）是犹他州大学Wittwer实验室与美国Idaho公司联合研制的一种PCR后闭管操作技术：通过高密度荧光数据采集，直接用熔解曲线检测PCR扩增片段中微小序列差别，它是在常规PCR基础上增加一种饱和染料，无需标记探针。具有低成本、高通量、操作简单、不受变异位置影响等优势。

137例上海地区出生新生儿家系G6PD基因突变分析

目的了解上海地区出生的新生儿及其家系葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症基因突变特点,探讨该病的发病机制,提高诊断水平。方法用高分辨率熔解曲线分析(HRM)技术对中国人常见的突变类型G1388A、G1376T、A95G、G392T、G871A、C1311T、C1024T、C406T进行分析鉴定。结果 137例新生儿的家系中258例患者有213例检出突变类型,45例未检出突变类型。单个位点突变184例,G1376T,66例(30.9%);G1388A,64例(30%);A95G,25例(11.7%);C1024T,16例(7.5%);G392T,10例(4.7%);C406T,3例(1.4%)。复合位点突变共29例,G871A+C1311T+IVS11 93T→C,10例(4.7%);G1376T+IVS11 93T→C,7例(3.3%);C1311T+IVS11 93T→C,5例(2.3%);C406T+C1311T,2例(0.9%);G1388A+IVS11 93T→C,2例(0.9%);G1376T+C1311T+IVS11 93T→C,1例(0.5%);A95G+C1311T+IVS11 93T→C,1例(0.5%);C1024T+IVS11 93T→C,1例(0.5%)。结论随着外来人口的流入和通婚的增多,上海地区的G6PD基因突变也在发生变化,基因诊断是对该病分子水平的诊断,有利于杂合子的检测,以便做好产前筛查,同时对研究人口迁徙与遗传病分布之间的关系有一定意义。

猪流行性腹泻病毒疫苗株与野毒株PCR-HRM鉴别检测方法的建立

基于新型的PCR产物分析技术-高分辨率熔解曲线（HRM），大量分析猪流行性腹泻病毒（PEDV）全基因序列的特点，建立鉴别PEDVcV777疫苗株与野毒株的PCR-HRM分析方法。在ORF1保守区域设计区分引物，同时用普通的RT-PCR方法进行对比。检测19份临床样品中，PCR-HRM方法检测均为阳性且鉴定为野毒株，普通RT-PCR之后凝胶电泳分析检测18份阳性，为野毒株。结果表明，PCR-HRM方法具有特异性好，灵敏度高，PCR扩增之后产物无需开盖分析，极大地避免了污染问题，是一种新型的鉴别检测方法。