PCR反向膜杂交法在CT、UU、NG三种性病筛查中的应用价值

目的:探讨PCR反向膜杂交法在CT、UU、NG三种性病筛查中的应用价值。方法:对1486例疑为泌尿生殖道感染患者分别采用PCR反向膜杂交法及荧光定量PCR(FQ-PCR)检测,并将检测结果与培养结果比较。结果:FQ-PCR检测CT、UU、NG阳性率高于培养法,比较差异有统计学意义(P<0.01);PCR反向膜杂交法与培养法及FQ-PCR检测阳性率比较差异均无统计学意义;PCR反向膜杂交法、FQ-PCR检测敏感性比较差异无统计学意义,但PCR反向膜杂交法检测特异性高于FQ-PCR,比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:PCR反向膜杂交法筛查CT、UU、NG准确,快速,且筛查特异性高于FQ-PCR,值得临床推广适用。

荧光标记杂交双探针PCR融解曲线法在临床的应用评价

目的:对国产荧光标记杂交双探针PCR融解曲线法(FH—PCR—MC)检测乙型肝炎病毒聚合酶酪氨酸-蛋氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸基序(HBVYMDD)变异的试剂进行临床应用评价.方法:慢性乙型肝炎患者外周血浆标本217份,分别采用荧光标记Taqman探针定量PCR法(FT—PCR)和荧光标记杂交双探针PCR融解曲线法(FH—PCR—MC)检测HBVDNA含量和YMDD及其变异;其中78份HBVDNA阳性标本采用基因型特异性多引物对巢式PCR法进行基因分型(A—F),30份标本用PCR产物克隆测序法检测HBVYMDD及其变异.结果:血浆标本HBVDNA阳性率(≥1.0×106copies/L)为75.6%(164/217).YMDD及其变异检出率为67.7%(147/217).其中YMDD44.9%(66/147),YIDD22.5%(33/147).YVDD17.7%(26/147),YIDD/YVDD混合株10.9%(16/147),其他混合株4.0%(6/147);结合HBVDNA含量,HBVYMDD及其变异的检出下限为HBVDNA=5.0×106copies/L,但在106copies/L时检出率较低,仅为36.4%,随着HBVDNA含量增高,检出率显著增高(>80%),且在107copies/L时即有显著增高(χ2=7.177,P<0.01).在基因分型的78份标本中,C基因型占89.8%,B和D基因型分别占8.9%和1.3%,YMDD及其变异总检出率为100%,变异总检出率为59.0%;1份D基因型YMDD及其变异检测为YIDD/YVDD混合变异;B,C两种基因型变异检出率分别为71.4%和55.7%,但二者无统计学差异.以测序法的检测结果为相对标准,则FH—PCR—MC法检测HBVYMDD及其变异的相对敏感性、特异性和符合率分别为96.3%(26/27),100%(3/3)和96.7%(29/30);对于HBVYMDD及其变异的类型,两种方法检测结果一致.结论:FH—PCR—MC法是一种快速、特异的HBVYMDD及其变异检测方法,具有较高的检出率,且能区分YMDD及其变异的类型.

PCR法制备地高辛标记探针斑点杂交检测鳗弧菌

以鳗弧菌（Vibrio anguillarum）toxR基因内366～571bp之间的基因序列为靶序列，采用PCR法制备对鳗弧菌特异性的地高辛标记DNA探针，探针长度为206bp。选取2株鳗弧菌和8株与鳗弧菌亲缘关系非常接近的常见水产动物致病弧菌，通过斑点杂交法对制备的探针进行特异性检测，结果显示该探针对鳗弧菌杂交阳性，而与弧菌属的其它8株细菌均无交叉反应。这表明该地高辛标记探针具有很强的特异性，它能够很好地对鳗弧菌感染进行检测。

PCR+膜杂交法CT/UU/NG三联检测在临床性病筛查中的应用及与实时荧光PCR法的比较研究

目的:探讨PCR+膜杂交法CT/UU/NG三联检测在临床性病筛查中的应用价值。方法:分别采用PCR+膜杂交法和实时荧光PCR法检测CT、UU、NG,并分析比较两种方法的一致性以及相关性。结果:PCR反向膜杂交法和实时荧光PCR法的CT、UU、NG的筛查结果接近(P>0.05),而男女筛查结果差异较大(P<0.05)。结论:PCR反向膜杂交法操作简便,筛查快速、准确,有与实时荧光PCR法相当的检测准确性,具有较高的临床应用价值,值得在临床中推广应用。

PCR反向点杂交技术与DNA测序法检测HPV的对比研究

目的通过PCR反向点杂交技术检测人乳头瘤病毒(HPV),并采用DNA测序法对此方法进行验证,比较两种检测方法的一致性,为临床使用PCR反向点杂交技术进行HPV DNA检测提供准确依据。方法采用PCR反向点杂交技术和DNA测序法对喀什地区第一人民医院妇科门诊收集的27例HPV感染患者进行检测,将两种检测方法得到的检测结果进行比对。结果采用PCR反向点杂交技术和DNA测序法得到的检测结果一致,27例样本中阳性检出率100.0%,其中高危型检出率为85.2%,低危型检出率为14.8%,多重型别感染率为25.9%。结论两种HPV检测方法的结果符合率100.0%,PCR-反向点杂交技术检测结果准确度高,可以为临床诊断提供准确可靠的依据。

PCR法标记探针在核酸杂交中的应用

目的 建立一种简便、高效的核酸探针标记方法。方法 以扩增小鼠生精细胞凋亡相关基因时使用的引物 ,基因重组扩增后阳性克隆质粒DNA为模板 ,采用PCR法标记同位素 [α 3 2 P]dCTP。结果 制成的探针比放射活性大于 1× 10 9cpm/ml,电泳仅见一条条带 ;northernblot杂交显示阳性条带清晰 ,背景噪音低。结论 PCR法标记探针简便、特异。

聚合酶链反应顺序特异性寡聚核苷酸探针反向杂交法在HLA-DRB_1分型中的应用

目的:探讨聚合酶链反应顺序特异性寡聚核苷酸探针(polymerasechainreaction-sequencespe-cificoligonucleotideprobes,PCR-SSOP)反向杂交法应用于人类白细胞抗原(humanleukocyteantigen,HLA)-DRB1配型的可行性。方法:随机选取25例已行聚合酶链反应顺序特异性引物(polymerasechainreac-tion-sequencespecificprimers,PCR-SSP)法HLA-DRB1配型的肾移植受者的血标本,采用PCR-SSOP反向杂交法再次配型,并与PCR-SSP法的结果比较。结果:两法的一致性达92%。2例不一致的患者经再次PCR-SSOP反向杂交法配型后,其中1例与PCR-SSP结果一致,PCR-SSOP反向杂交法的平均操作时间为4小时30分。结论:PCR-SSOP反向杂交法是一种能以中等分辨度进行等位基因分型的方法,操作较简单,结果解读客观,适用于临床肾移植配型。

PCR荧光法与PCR-反向点杂交法检验人乳头瘤病毒对比分析

目的将PCR荧光法和PCR-反向点杂交法用于人乳头瘤病毒检验中,分析其检验结果。方法2014年4月~2017年4月本院收治的100例宫颈炎或是疑似人乳头瘤病毒感染的患者归入笔者研究目标,对100例患者都进行CR荧光法检验和PCR-反向点杂交法检验,统计2种不同检验方法的阳性检出合计值及两者检验结果的符合总计值。结果 PCR-反向点杂交法检验的人乳头瘤病毒阳性检出合计值与PCR荧光法检验对比,差异有统计学意义(P<0.05),PCR荧光法检验结果和PCR-反向点杂交法检验结果对比,阴性符合总计值、阳性符合总计值、总符合总计值分别是70.00%、93.02%、94.00%。结论 PCR荧光法和PCR-反向点杂交法用于人乳头瘤病毒检验都具有良好效果,且PCR-反向点杂交法检验的阳性检出率更高一些。

荧光定量PCR法联合反向点杂交法鉴定分枝杆菌菌种类型的效果

目的探讨荧光定量PCR法联合反向点杂交法用于分枝杆菌菌种鉴定的效果。方法采用荧光定量PCR法和反向点杂交法鉴定抗酸染色阳性疑似肺结核患者的感染菌种类型。结果276份痰液标本中有结核分枝杆菌(MTB)268例,非结核分枝杆菌(NTM)8例,细菌学鉴别结果和荧光定量PCR法完全一致;反向点杂交法鉴定NTM 8例(2.9%)4种,经基因测序验证结果完全一致。结论荧光定量PCR法联合反向点杂交法进行分枝杆菌菌种鉴定可作为NTM实验室早期诊断手段。

PCR反向点杂交法检测人乳头瘤病毒分型在确定早期宫颈癌中的价值

目的:研究以PCR反向点杂交法检测人乳头瘤病毒(HPV)分型,对提升宫颈癌(SCC)早期确诊率的价值。方法:以332例门诊疑似宫颈癌患者为研究对象,首先行PCR反向点杂交法确定分泌物中HPV分型,续行液基薄层细胞检测(TCT),将HPV及TCT联合检测结果归入观察组;将TCT检测结果单独归入对照组。以组织病理学诊断为金标准,对比三项检测结果,并明确观察组与对照组灵敏度、特异度及Youden指数。结果:(1)HPV阳性率32.2%(107/332);TCT阳性率30.4%(101/332),其中HPV阳性率68.3%(69/101);组织病理学检测阳性率20.5%(68/332),其中HPV阳性率89.7%(61/68)。(2)观察组灵敏度88.4%,特异度97.0%,Youden指数0.854;对照组灵敏度49.5%,特异度92.2%,Youden指数0.417。观察组显著性更优,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:行PCR反向点杂交法检测HPV分型,有助于提升TCT检测的灵敏度和特异度,对SCC早期诊治具有重要价值。

PCR-微孔板反向杂交法在结核分枝杆菌检测中的应用

目的 评价PCR 微孔板反向杂交法检测临床标本中结核分枝杆菌 (MTB)的应用价值。方法 应用集菌涂片镜检法、培养法、PCR法、PCR 微孔板反向杂交法分别对 5 5份肺结核病患者和 30份非结核呼吸系统病患者痰标本平行检测。结果 涂片法对结核病患者临床标本中MTB检出率为 2 1.82 % ,培养法检出率为2 5 .4 6 % ,PCR法检出率 36 .36 % ,PCR 微孔板反向杂交法检出率 4 7.2 7%。对 30例非结核呼吸系统疾病患者检测MTB ,PCR法出现 2例假阳性 ,其余 3种方法均阴性 ,PCR 微孔板反向杂交法比单纯PCR法灵敏度高、特异性强。结论 PCR 微孔板反向杂交法具有简便、快速、抗污染、灵敏度高、特异性强的优点 ,缺点是存在假阴性 ,应改进标本前处理方法 ,在对结核病的辅助诊断中应与细菌学方法相结合 。

多重实时荧光PCR TaqMan-MGB杂交探针标记法快速鉴定转基因玉米MIR162

为对转基因玉米MIR162的进口实行监测、规范转基因玉米在国内市场中的流通,建立一种转基因玉米MIR162准确快速的检测方法,通过设计转基因玉米MIR162品系特异性序列的引物和探针,摸索和优化多重荧光PCR体系和参数,开发建立多重实时荧光PCR TaqMan-MGB杂交探针标记法快速鉴定转基因玉米MIR162。结果表明,转基因玉米MIR162品系标准品和平行样品中内标基因和品系特异性基因均出现明显扩增曲线,其他转基因玉米品系标准品仅内标基因有扩增曲线,空白对照无扩增曲线,说明该TaqMan-MGB探针对转基因玉米MIR162品系具有扩增特异性。该方法可作为鉴定筛查转基因玉米MIR162品系及其转化体成分的有效方法,用于规范管理转基因产品在市场上的流通。

PCR荧光法与PCR-反向斑点杂交法检验人乳头瘤病毒比较观察

目的观察比较PCR-反向斑点杂交法(PCR-RDB)与PCR荧光法在HPV(人乳头瘤病毒)中的检验效果。方法选择我院2011年1月至2014年1月收集的女性宫颈脱落细胞样本共251例,分别行PCR-RDB检测和PCR荧光法对HPV进行检测,比较两种方法检测结果。另将两种方法检测8种HPV结果均显示为阳性的患者设为观察组,其余患者设为对照组,病理检测作判定标准,比较组间阳性率。结果 PCR荧光法检测阳性率为36.65%(92/251);PCR荧光法检测阳性率为40.24%(101/251);两种方法检测8种高危HPV一致率为79.68%(200/251),观察组行TCT检测和组织病理活检结果 ,病变率为42.31%(22/52)。对照组病变率为10.77%(14/130)。两者相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PCR-RDB检测和PCR荧光法在HPV检测中具有较好的一致性,采用高危型HPV检测能有效筛查宫颈癌。

PCR反向杂交法在乙肝耐药突变及分型检测中的应用

目的通过PCR 反向点杂交法快速检测临床样品中乙型肝炎病毒的耐药突变情况.方法：PCR 反向点杂交法检测56 例慢性乙肝患者样品,对乙型肝炎患者病毒载量为104-107进行分析.结果：在56 例临床病例中,共检出耐药突变病例55 例,检出率为98.2%.发现3 种基因亚型,其中B 型2 例,占3.5%;C 型52 例,占92.8%;B、C 混合感染1 例,占1.8%;型别未分1 例,占1.8%.结论：PCR 膜芯片杂交技术可检测乙型肝炎病毒基因亚型及耐药突变类型,并具有快速、高通量、敏感的特点,适合各临床医院开展应用.

反向点杂交法和荧光PCR法检测人乳头瘤病毒DNA阳性符合率分析

目的分析反向点杂交法和荧光PCR法检测人乳头瘤病毒DNA阳性符合率。方法将496例宫颈刷标本分别用反向点杂交法与荧光法检测人乳头瘤病毒DNA。结果人乳头瘤病毒DNA阳性率反向点杂交法为28.83%(143/496),荧光PCR法为29.44%(146/496),2种检测方法差异无统计学意义(P>0.05)。反向点杂交法与荧光法检测人乳头瘤病毒DNA有475例标本检测结果一致,其中阳性符合率为46.37%(134/289),阴性符合率为48.51%(341/703),总符合率为95.77%(475/496),两者间的一致性较好(Kappa=0.897)。结论反向点杂交与荧光PCR2种检测方法的检测阳性符合率一致性良好。

应用反向斑点杂交技术进行脐血HLA-DRB基因分型方法的建立

HLA分子的多态性对于移植有十分重要的意义。常用的HLA基因分型方法中SSOP基因分型方法有较高分辨率 ,但操作过程复杂 ,仅适于大样本的HLA分型。PCR SSP基因分型方法分辨率较低 ,但操作过程简单 ,适于临床要求。有必要建立一种简便、快速、价廉、高分辨率的基因分型方法。本研究取 6 3份已知HLA DRB型的脐血标本 ,经盐酸胍方法提取DNA用于反向斑点杂交 (RDB)基因分型 ,同时采用SSOP和PCR SSP方法进行比较。结果表明 ,所有样本用RDB方法基因分型均获得成功 ,可准确地分辨 6 0个HLA DRB等位基因 ,且结果与用SSOP和PCR SSP方法的结果完全一致。结论提示 ,RDB方法可准确地分辨HLA DRB等位基因 ,分辨率高 ,操作简单 。

膜-反向斑点杂交技术检测肺结核患者肺组织和肺泡灌洗液中的结核杆菌

目的探讨膜-反向斑点杂交技术(RDB)在病理石蜡组织和肺泡灌洗液检测结核杆菌的临床应用价值。方法以97例病理石蜡组织、97例肺泡灌洗液为研究对象,分别以膜-反向斑点杂交、实时荧光PCR(RT-PCR)、抗酸染色三种方法检测结核杆菌,对三种方法进行方法学评价。结果结核组病理石蜡组织、肺泡灌洗液三种方法检测的总阳性率分别为:抗酸染色为32.8%,RT-PCR阳性率为82.8%,RDB阳性率为89.9%,两两比较差异均有统计学意义(均P<0.05),对照组三种方法检测结果均为阴性;三种结核杆菌的检测方法的方法学评价,RDB灵敏度(90.6%)、约登指数(0.91)、符合率(93.9%)、阴性预测值(85.0%)均较好。结论膜-反向斑点杂交技术在病理石蜡组织和肺泡灌洗液结核杆菌的检测上有很高的临床应用价值,值得临床推广应用。

反向斑点杂交法快速检测肺炎支原体

目的:探讨早期、快速检测肺炎支原体的方法。方法:根据肺炎支原体特异的P1基因设计引物,通过聚合酶链反应合成一段特异的162bp长链DNA探针,采用反向斑点杂交法检测生物素标记支原体DNA,并应用于痰标本的检测。结果:所合成的162bpDNA探针具有高度特异性,只和肺炎支原体杂交,与其它细菌、真菌、病毒无交叉反应,该探针最低可检测出1ng的DNA。杂交法和培养法分别检测100份痰标本,两者的阳性率分别为12%和2%。结论:该方法快速、特异,对肺炎支原体的早期诊断具有较高的应用价值。