多重PCR/反向线点杂交(RLB)检测细菌性脑膜炎病原体的研究

目的建立快速、高通量的多重PCR/反向线点杂交(RLB)的方法检测3种细菌性脑膜炎病原体--肺炎链球菌、流感嗜血杆菌和脑膜炎奈瑟菌。方法针对肺炎链球菌、流感嗜血杆菌和脑膜炎奈瑟菌的特异性基因序列设计引物和相应的特异性探针,优化多重PCR/RLB检测中的引物浓度、dNTP浓度、探针的浓度等的条件。结果多重PCR/RLB检测对肺炎链球菌DNA最低检测极限可达6.2×10-1ng/μl,对流感嗜血杆菌DNA最低检测极限可达8.5×10-8ng/μl,对脑膜炎奈瑟菌DNA最低检测极限可达8.3×10-8ng/μl。结论多重PCR/RLB检测体系能够正确的鉴定3种细菌性脑膜炎病原体,用于临床样本的高通量筛查细菌性脑膜炎病原体,特异性好,灵敏度高。

PCR反向点杂交技术与DNA测序法检测HPV的对比研究

目的通过PCR反向点杂交技术检测人乳头瘤病毒(HPV),并采用DNA测序法对此方法进行验证,比较两种检测方法的一致性,为临床使用PCR反向点杂交技术进行HPV DNA检测提供准确依据。方法采用PCR反向点杂交技术和DNA测序法对喀什地区第一人民医院妇科门诊收集的27例HPV感染患者进行检测,将两种检测方法得到的检测结果进行比对。结果采用PCR反向点杂交技术和DNA测序法得到的检测结果一致,27例样本中阳性检出率100.0%,其中高危型检出率为85.2%,低危型检出率为14.8%,多重型别感染率为25.9%。结论两种HPV检测方法的结果符合率100.0%,PCR-反向点杂交技术检测结果准确度高,可以为临床诊断提供准确可靠的依据。

PCR反向点杂交法检测人乳头瘤病毒分型在确定早期宫颈癌中的价值

目的:研究以PCR反向点杂交法检测人乳头瘤病毒(HPV)分型,对提升宫颈癌(SCC)早期确诊率的价值。方法:以332例门诊疑似宫颈癌患者为研究对象,首先行PCR反向点杂交法确定分泌物中HPV分型,续行液基薄层细胞检测(TCT),将HPV及TCT联合检测结果归入观察组;将TCT检测结果单独归入对照组。以组织病理学诊断为金标准,对比三项检测结果,并明确观察组与对照组灵敏度、特异度及Youden指数。结果:(1)HPV阳性率32.2%(107/332);TCT阳性率30.4%(101/332),其中HPV阳性率68.3%(69/101);组织病理学检测阳性率20.5%(68/332),其中HPV阳性率89.7%(61/68)。(2)观察组灵敏度88.4%,特异度97.0%,Youden指数0.854;对照组灵敏度49.5%,特异度92.2%,Youden指数0.417。观察组显著性更优,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:行PCR反向点杂交法检测HPV分型,有助于提升TCT检测的灵敏度和特异度,对SCC早期诊治具有重要价值。

2615例女性患者人乳头瘤病毒感染基因PCR-反向点杂交分型技术检测的研究

目的:研究女性患者人乳头瘤病毒(HPV)感染基因PCR-反向点杂交分型技术的检测,为临床HPV分型及其治疗提供参考。方法:选取2015年10月—2017年11月间就诊的有性生活史或已婚女性受试者2 615例资料,对资料中采用聚合酶链式反应(PCR)反向点杂交法检测的女性宫颈分泌物中25种HPV分型结果,分析HPV亚型分类感染情况及其分型,探讨PCR-反向点杂交分型技术在宫颈癌早期筛查中的应用价值。结果:2 615例受试女性中HPV亚型检出率为28.60%,在25型HPV分型中高危型HPV 52亚型的感染率为最高(占6.50%),单重感染占20.23%,多重感染占8.37%;不同年龄段患者中>20岁女性的HPV感染率占86.49%,且不同年龄组女性患者中HPV感染率经比较其差异有统计学意义(P<0.05)。结论:临床HPV感染基因的PCR-反向杂交分型技术检测分型,可有效检测高危型及多重型HPV感染,对宫颈鳞状细胞癌的早期诊断与普查具有重要的应用价值。

多重PCR及PCR/反向点杂交法在诊断珠蛋白生成障碍性贫血中的临床应用

目的：探讨多重PCR和PCR/反向点杂交(RDB)在珠蛋白生成障碍性贫血基因诊断中的应用。方法：收集临床疑诊为珠蛋白生成障碍性贫血(地贫)患者45例,应用单管多重PCR法检测α基因常见的3种突变类型；应用PCR/RDB技术检测17种β珠蛋白基因突变。结果：共检出15例阳性,12例为β珠蛋白基因突变,1例为α珠蛋白基因突变,2例患者同时具有α、β珠蛋白基因的突变。所有突变均为杂合性突变。β珠蛋白基因包含6种突变类型,分别为CD41-42(-TCTT)、IVS-2-654(C-T)、TATA box-28(A-G)、βE(G-A)、CD43(G-T)、71-72M。结论：多重PCR用于α地贫和PCR/RDB用于β地贫的临床基因诊断方法简便、效率高。

反向点杂交法和荧光PCR法检测人乳头瘤病毒DNA阳性符合率分析

目的分析反向点杂交法和荧光PCR法检测人乳头瘤病毒DNA阳性符合率。方法将496例宫颈刷标本分别用反向点杂交法与荧光法检测人乳头瘤病毒DNA。结果人乳头瘤病毒DNA阳性率反向点杂交法为28.83%(143/496),荧光PCR法为29.44%(146/496),2种检测方法差异无统计学意义(P>0.05)。反向点杂交法与荧光法检测人乳头瘤病毒DNA有475例标本检测结果一致,其中阳性符合率为46.37%(134/289),阴性符合率为48.51%(341/703),总符合率为95.77%(475/496),两者间的一致性较好(Kappa=0.897)。结论反向点杂交与荧光PCR2种检测方法的检测阳性符合率一致性良好。

双重PCR反向杂交快速检测及鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的 研究以非培养法为基础的快速检测和鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)的方法。方法 将金黄色葡萄球菌mecA基因特异性探针固定在尼龙膜上 ,双重聚合酶链反应 (PCR)同时扩增待检DNA片段 ,在扩增中用bio 11 dUTP标记扩增产物 ,然后与探针膜杂交。结果 5 0株金黄色葡萄球菌sa4 4 2特异性基因片段检测结果为 10 0 %阳性 ,mecA基因结果阳性占 72 %。结论 该方法灵敏度高、特异性强 ,适用于临床快速检测和鉴定MRSA。

PCR荧光法与PCR-反向点杂交法检验人乳头瘤病毒对比分析

目的将PCR荧光法和PCR-反向点杂交法用于人乳头瘤病毒检验中,分析其检验结果。方法2014年4月~2017年4月本院收治的100例宫颈炎或是疑似人乳头瘤病毒感染的患者归入笔者研究目标,对100例患者都进行CR荧光法检验和PCR-反向点杂交法检验,统计2种不同检验方法的阳性检出合计值及两者检验结果的符合总计值。结果 PCR-反向点杂交法检验的人乳头瘤病毒阳性检出合计值与PCR荧光法检验对比,差异有统计学意义(P<0.05),PCR荧光法检验结果和PCR-反向点杂交法检验结果对比,阴性符合总计值、阳性符合总计值、总符合总计值分别是70.00%、93.02%、94.00%。结论 PCR荧光法和PCR-反向点杂交法用于人乳头瘤病毒检验都具有良好效果,且PCR-反向点杂交法检验的阳性检出率更高一些。

荧光定量PCR法联合反向点杂交法鉴定分枝杆菌菌种类型的效果

目的探讨荧光定量PCR法联合反向点杂交法用于分枝杆菌菌种鉴定的效果。方法采用荧光定量PCR法和反向点杂交法鉴定抗酸染色阳性疑似肺结核患者的感染菌种类型。结果276份痰液标本中有结核分枝杆菌(MTB)268例,非结核分枝杆菌(NTM)8例,细菌学鉴别结果和荧光定量PCR法完全一致;反向点杂交法鉴定NTM 8例(2.9%)4种,经基因测序验证结果完全一致。结论荧光定量PCR法联合反向点杂交法进行分枝杆菌菌种鉴定可作为NTM实验室早期诊断手段。

人乳头瘤病毒反向点杂交检测方法的研究

目的 通过检测正常孕妇及胎儿HPV的感染情况 ,探索建立一种简便、有效的HPV检测方法。方法 在以GP5+ / 6+ 为引物的人乳头瘤病毒检测方法的基础上 ,利用生物素标记引物 (bio -GPbt) ,进行GP -PCR ,并用此PCR产物与特异性内寡核苷酸探针 (SIOP)进行反向点杂交 (RDBH) ,从而达到检测HPV感染并对其分型的目的。结果 1 .在对 1 1 9份样品的检测中 ,普通 2 %琼脂糖电泳的阳性率为 30 3 %(36/ 1 1 9) ,而反向点杂交的阳性率为 43 7%(52 / 1 1 9) ,两者之间差别有显著性 (χ2 =4 0 568,0 0 1 <P <0 0 5) ,说明反向点杂交 (RDBH)在HPV的检测中有较高的敏感性 ;2 .在用于检测的 4个HPV探针 (6B、1 1、1 6、1 8)之间 ,未发现非特异性的杂交 ,说明反向点杂交 (RDBH)

PCR荧光法与PCR-反向斑点杂交法检验人乳头瘤病毒比较观察

目的观察比较PCR-反向斑点杂交法(PCR-RDB)与PCR荧光法在HPV(人乳头瘤病毒)中的检验效果。方法选择我院2011年1月至2014年1月收集的女性宫颈脱落细胞样本共251例,分别行PCR-RDB检测和PCR荧光法对HPV进行检测,比较两种方法检测结果。另将两种方法检测8种HPV结果均显示为阳性的患者设为观察组,其余患者设为对照组,病理检测作判定标准,比较组间阳性率。结果 PCR荧光法检测阳性率为36.65%(92/251);PCR荧光法检测阳性率为40.24%(101/251);两种方法检测8种高危HPV一致率为79.68%(200/251),观察组行TCT检测和组织病理活检结果 ,病变率为42.31%(22/52)。对照组病变率为10.77%(14/130)。两者相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PCR-RDB检测和PCR荧光法在HPV检测中具有较好的一致性,采用高危型HPV检测能有效筛查宫颈癌。

PCR反向杂交法在乙肝耐药突变及分型检测中的应用

目的通过PCR 反向点杂交法快速检测临床样品中乙型肝炎病毒的耐药突变情况.方法：PCR 反向点杂交法检测56 例慢性乙肝患者样品,对乙型肝炎患者病毒载量为104-107进行分析.结果：在56 例临床病例中,共检出耐药突变病例55 例,检出率为98.2%.发现3 种基因亚型,其中B 型2 例,占3.5%;C 型52 例,占92.8%;B、C 混合感染1 例,占1.8%;型别未分1 例,占1.8%.结论：PCR 膜芯片杂交技术可检测乙型肝炎病毒基因亚型及耐药突变类型,并具有快速、高通量、敏感的特点,适合各临床医院开展应用.

应用反向线点杂交技术鉴定临床常见曲霉属和毛霉目真菌

目的应用反向线点杂交技术(reverse line blot hybridization,RLB)快速鉴定临床常见的曲霉属和毛霉目真菌。方法收集我院真菌和真菌病研究中心保存的5种曲霉菌(烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉、土曲霉、构巢曲霉)和7种毛霉目真菌(冻土毛霉菌、总状毛霉菌、卷枝毛霉菌、少根根霉、小孢根霉、微小根毛霉、伞状犁头霉),共计98株菌株。利用真菌通用引物ITS1和ITS4对菌株进行PCR扩增,用12个真菌种特异性探针与扩增后产物进行反向线点杂交。将RLB结果与真菌传统形态学鉴定结果、ITS区DNA测序结果进行比较。结果 RLB可以正确鉴定98株实验菌株,与形态学方法和ITS区测序方法鉴定结果100%一致,种特异性探针之间未见交叉杂交,显示出该方法的高度敏感性和特异性。8株阴性对照菌株(白念珠菌、茄病镰刀菌、尖端赛多孢、马尔尼菲青霉、疣状瓶霉、棒曲霉、日本曲霉以及雅致小克银汉霉),使用RLB方法无法鉴定。通过烟曲霉基因组DNA浓度10倍倍比稀释法验证RLB的敏感性为1.8×10-3 ng/μL。结论 RLB技术为实验室早期快速诊断、鉴定临床常见的曲霉属和毛霉目真菌提供参考。

实时荧光PCR检验在高危HPV检测中的应用价值分析

基于临床比对的方式,评估实时荧光PCR检测法在高危HPV检测中的应用价值。方法 从2021年7月~2022年7月前来本院进行高危HPV检测的受检中选取100例,均接受PCR-反向点杂交检测及实时荧光PCR检测,首先比对两种检测结果与病理检测金标准结果是否接近,之后比较两种检查方法对100例受检者的宫颈慢性炎症、宫颈上皮内瘤病变、宫颈癌三种宫颈相关病变的高危性HPV阳性检出率。结果 ①PCR-反向点杂交法对100例受检者高危HPV检出阳性率达到68.00%,实时荧光PCR检测方法的检出率为83.00%,病理检测金标准结果为90.00%。将PCR-反向点杂交法、实时荧光PCR检测法检测结果与病理检测金标准结果进行分别比对的结果是:PCR-反向点杂交法与病理金标准的卡方检验值为14.587,P值<0.001;实时荧光PCR检测法与病理金标准的卡方检验值为2.098,P>0.05。②PCR-反向点杂交法检出宫颈相关病变高危性HPV阳性率为45.00%,低于实时荧光PCR的67.00%的检出率,P<0.05。结论 实时荧光PCR检测结果与病理检测金标准更加接近,差异不具有统计学差异性,PCR-反向点杂交检测结果与病理金标准差距较大,故实时荧光PCR检测结果更加准确。此外,实时荧光PCR检测在宫颈相关病变高危性HPV阳性方面的检出率更高。

实时荧光PCR检验对高危HPV检测的应用效果及准确度评价

讨论高危HPV检测中实施实时荧光PCR检验的临床效能。方法 入选52例疑似高危HPV感染患者主要于2022年1月-2023年4月接受病情诊疗,而后以其为研究对象开展回顾性试验分析。入选患者均接受PCR-反向点杂交法、HC-Ⅱ法、实时荧光PCR法检测HPV感染情况,以组织病理学检查结果作为诊断金标准,在此基础上判断以上三种检测方法诊断效能。结果 52例疑似高危HPV感染患者组织病理学检查结果显示:50例HPV感染阳性,占比为96.15%;2例HPV感染阴性,占比为3.85%。50例HPV感染阳性患者中宫颈上皮内瘤变Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级各占15例(30%)、13例(26%)、8例(16%),慢性宫颈炎共有13例(26%)。52例疑似高危HPV感染患者PCR-反向点杂交法下诊断敏感性、特异性、准确性依次为69.44%、50%、64%;52例疑似高危HPV感染患者HC-Ⅱ法下有72.22%诊断敏感性、有57.14%的诊断特异性、有68%的诊断准确性;52例疑似高危HPV感染患者实时荧光PCR法下诊断敏感性、特异性、准确性依次为97.22%、92.86%、96%性。PCR-反向点杂交法与HC-Ⅱ法诊断效能指标相互对比无统计学意义,P>0.05;对比PCR-反向点杂交法与HC-Ⅱ法,实时荧光PCR法诊断高危HPV感染效能指标明显较高,P<0.05。结论 高危HPV检测中实施PCR-反向点杂交法、HC-Ⅱ法、实时荧光PCR法下,以实时荧光PCR法诊断敏感性、特异性及准确性最高,可在临床中推广使用该检验方法。

实时PCR和PCR-RDB法检测人乳头瘤病毒的比对研究

目的：比较实时 PCR 法和 PCR-反向点杂交法（PCR-RDB）检测 HPV 的一致性。方法收集109份女性生殖道样本，利用实时 PCR 法和 PCR-RDB 法分别检测 HPV 感染和基因型分布情况，不一致样本采用 PCR-悬浮芯片杂交法复检。结果83.5％（91／109）的样本两种方法结果一致（kappa＝0.671），18例不一致样本 PCR-悬浮芯片杂交法复检显示7例与实时 PCR相符，11例与 PCR-RDB 相符；高、低病毒载量组间 PCR-RDB 法的检测结果差异无统计学意义（χ2＝1.476，P ＝0.224）。结论实时 PCR 和 PCR-RDB 两法用于 HPV 检测一致性一般；HPV 病毒载量在103～108范围内时 PCR-RDB 法的阳性率较稳定。

Taqman实时荧光定量PCR快速检测白斑综合症病毒的方法研究

目的:建立一种快速、特异、灵敏的实时荧光定量PCR方法用于检测白斑综合病毒DNA,为控制对虾白斑综合症提供科学依据。方法:根据GenBank登录的白斑综合病毒株序列,使用生物学软件进行序列对比,在白斑综合症病毒保守区序列设计引物和Tagman探针并进行筛选。对实时荧光定量PCR反应条件进行优化,提高了该方法的特异性、灵敏度和重现性等,并与标准方法(核酸探针点杂交)进行比对,对现场32份虾样进行了检测。结果:Tagman实时荧光定量PCR与标准方法的特异性符合率为100%,灵敏度超过标准方法的10000～100000倍,检测时间为标准方法的1/24,重现性良好(s=0.1～0.49,CV=0.78%～3.72%),并能准确定量。结论:本研究建立的Taqman实时荧光定量PCR方法用于白斑综合症病毒检测具有特异、灵敏、快速、定量、重现性好等优点。

反向点杂交法和荧光PCR法检测人乳头瘤病毒DNA阳性符合率作用研究

研究人乳头瘤病毒DNA检测中荧光PCR法检测、反向点杂交法的监测效果。方法 选取56例人乳头瘤病毒DNA检测患者入组,通过反向点杂交法、荧光PCR法检测,对比病理检查结果,分析反向点杂交法、荧光PCR法检测的诊断效果。结果 在56例检查患者中,病理确诊人乳头瘤病毒DNA阳性40例,占比71.43%,反向点杂交法灵敏度、准确率、特异性相比于荧光PCR法无较大差距(P>0.05),反向点杂交法阴性预测值、阳性预测值于荧光PCR法阴性预测值、阳性预测值比较,差距不大(P>0.05),反向点杂交法误诊率、漏诊率相比荧光PCR法,无统计学意义(P>0.05)。结论 反向点杂交法和荧光PCR法检测均可应用在人乳头瘤病毒DNA诊断中,具备较高的诊断灵敏度。

HPV分型检测技术的质量管理与控制:基于PCR-RDB平台

聚合酶链反应-反向点杂交法(PCR-RDB)是一种采用PCR体外扩增与DNA反向点杂交相结合的DNA芯片技术,对宫颈癌的早期诊断和治疗具有重要意义。而该平台的质量管理和控制是保证人乳头瘤病毒(HPV)分型检测结果准确可靠的前提。本文通过结合作者PCR实验室工作体会就PCR实验室质量管理与控制等方面进行介绍,从而提高PCR实验室及PCR-RDB平台操作流程的规范化管理和标准化的建设。