水生动物副溶血弧菌、霍乱弧菌的PCR同步检测方法

副溶血弧菌和霍乱弧菌((non-O1/non-O139型),不仅对水产动物具有广泛和强的致病作用,而且危害人类的健康,是人和水产动物共患病的病原菌。以副溶血弧菌的toxR基因及霍乱弧菌的lolB基因设计2对引物,建立了副溶血弧菌和霍乱弧菌的PCR同步检测方法,相应的扩增目的片段分别为368bp和519bp。在PCR反应体系中副溶血弧菌和霍乱弧菌可扩增出目的基因片段,5株对照菌无任何扩增条带,表明所建立的双重PCR检测方法特异性较强,且所设计的2对引物间无交叉干扰现象;灵敏性试验结果表明,副溶血弧菌的检测最低限1.75×102 cfu/mL,霍乱弧菌的检测最低限1.25×102 cfu/mL,具有较好的灵敏性;人工染菌水产品检测结果显示,人工染菌的8种水产品均为阳性检测结果,而未染菌组均为阴性。本试验建立的双重PCR法特异性强、灵敏性高,可用于副溶血弧菌和霍乱弧菌引起的水产动物疾病的诊断及水产品的安全检测。

同步PCR技术及其在植物核酸分子定量中的应用(英文)

同步PCR是一种集生化、光电和计算机技术于一体的封闭式DNA扩增系统 ,采用荧光染料将扩增与检测过程结合在一起 ,实现了在PCR过程中在线显示PCR反应 ,通过检测荧光强度来绝对定量起始模板的拷贝数。该技术大大简化和加速了核酸分子的定量过程 ,不仅快速、灵敏、准确、重复性好 ,而且很容易计算出待测样品中核酸分子的绝对起始拷贝数。同微阵列等分子生物技术一起 ,同步PCR技术将会在功能基因解析和病害分子诊断等方面发挥重要作用。本综述除了介绍同步PCR技术的原理和应用外 ,还介绍了定量拟南芥Aux IAA基因的转录水平的实验 ,并就同步PCR操作过程中的问题进行了讨论。

虾苗场3种重要病原同步定量PCR检测技术的建立

白斑综合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)、虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei,EHP)和虾虹彩病毒(decapod iridescent virus 1,DIV1)为近年来凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)育苗场内的主要生物性危害因素,其中2种或3种病原共感染的现象也较为常见,快速、准确地检测和鉴别这3种病原是大型苗场生物安保体系构建和无特定病原虾苗生产的迫切需求。基于SYBR Green I染料法,建立了同步扩增3种病原的定量PCR检测技术。结果显示,该同步方法对3种病原的标准曲线相关系数(R 2)均大于0.99,且检测限可低至10 copy·μL^-1,尤其是WSSV,在低至1 copy·μL^-1时仍能保持较好的组内和组间重复性。熔解曲线分析显示,该同步定量PCR技术对对虾样品的扩增产物只在78.4℃、79.7℃、83.5℃处出现3个尖锐峰,分别与3种病原(DIV1、EHP和WSSV)扩增产物的T m值相对应。以上结果表明,建立的同步定量PCR检测技术具有较高的检测灵敏度和良好的病原特异性,可以在50 min内同步完成对3种病原的快速鉴定和组织内病原含量的确定,既可用于对虾育苗场内对这3种病原的监测,也适用于对养殖对虾病原感染与病害发生的风险预测。

数字电视接收中PCR的作用及参数分析

本文分析了MPEG-2标准中PCR字段在数字电视接收中同步解码、展现画面中的作用,并详细讨论了四种关于PCR的测量参数及其相互关系,最后对上述参数实测的结果进行了分析。