采用均匀设计法优化PCR复合扩增的实验研究

目的探索均匀设计法在优化PCR复合扩增条件中的应用.方法采用均匀设计方法 ,对影响PCR扩增体系的MgCl2、dNTP、模板DNA和扩增循环次数等因素进行了U6(64)优化.结果获得5个条带清晰的目的 DNA扩增产物,建立了适用于5个Y-SNP位点(M130、M175、M174、M231、M45)的复合扩增反应体系.结论该优化复合扩增体系可用于法医物证学实验研究.

STR基因座荧光标记复合扩增检测及其法医学应用

目的建立荧光标记复合扩增检测4个STR基因座的方法,应用于法医学亲权鉴定与个人识别。方法用6-FAM标记D3S1754引物,HEX标记D4S2366和D12S375引物,TMR标记D1S549引物,PCR复合扩增,310基因分析仪电泳自动收集电泳结果数据,GeneScanAnalysisSoftware3.7NT计算扩增产物片段相对大小,Genotyper誖3.7NT软件进行样本基因型分型。将该方法应用于法医学亲权鉴定与个人识别。结果建立了荧光标记复合扩增检测4个STR基因座基因型的方法,具有良好的稳定性和较好的灵敏度,分型结果准确。结论研究建立的方法操作简便,分型结果稳定可靠,可用于遗传多态性研究和法医学亲权鉴定与个人识别。

吉林地区STR系统6位点复合扩增的频率分布

目的 分析吉林地区汉族人群短串联重复序列（STR）3个双基因座即6个STR位点的遗传多态性分布，获得相应多态位点的群体遗传学数据。方法 采集103份吉林地区汉族无血缘关系的个体血样，提取DNA，经聚合酶链反应（PCR）分3组进行复合扩增（Ⅰ：TPOX＋CSF1PO，Ⅱ：D3S1358＋D13S317，Ⅲ：D5S818＋D19S400），非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）分离后，银染显色分析。统计各等位基因的基因频率，分别计算各基因座的杂合度（H）、个人识别能力（DP）、非父排除率（PE）和多态性信息含量（PIC）。结果 得到6个基因座各等位基因的基因频率，经X^2检验，基因型频率分布符合Hardy-Weinberg平衡，具有较高的杂合度和多态性信息含量。上述6个基因座的杂合度为0．7511～0．8376，个人识别能力为0．8273～0．9247，非父排除率为0．5167～0．6718，多态性信息含量为0．7100～0．8195。结论 此STR3个双基因座具有高度多态性，是较理想的遗传标志，所得到的等位基因频率等数据可为法医学个人识别、亲子鉴定及群体遗传学研究提供依据。

一个新荧光标记复合扩增体系的建立及其法医学应用

目的建立扩增片段小于250bp的STR基因座D11S4951、D7S3062、GATA168F06、D10S1426的荧光标记复合扩增体系并进行法医学实用性研究。方法利用荧光标记引物和传统的复合扩增方法,建立一个新的、使用ABI-310毛细管电泳仪进行荧光标记复合PCR扩增的复合扩增体系,对该体系的灵敏度和准确度、基因座的种属特异性,组织同一性及可重复性进行研究,并使用该系统对西南地区人群进行遗传学特征调查。结果成功建立了由D11S4951、D7S3062、GATA168F06和D10S1426四个STR基因座组成的荧光标记复合扩增体系。本体系条件易于优化,成本低廉,效率较高,法医学应用性好。结论可以应用于个人识别和亲子鉴定,成为中国地区法医物证实践的良好补充。

ABO基因荧光标记复合AS-PCR分型的法医学应用研究

1990～1993年,Yamamoto等[1～3]通过对ABO基因的系列分析研究,发现了各等位基因核苷酸序列差异,为从分子水平进行ABO基因分型打下了基础.以后,国内外学者先后建立了PCR-RFLP、AS-PCR、直接测序等多种ABO基因分型方法.本文根据G.Watanabe等人报道[4],通过AS-PCR方法荧光标记复合扩增ABO基因型,并对其在法医学中的应用加以研究.现报道如下:……

中国南方汉族人群STR位点遗传多态性研究及其在亲子鉴定中的应用

目的 调查中国南方汉族人群的 D8S1179、D2 1S11、D18S5 1、D5 S818、v WA、FGA、D3S135 8、D13S317、D7S82 0等 9个短串联重复 (STR)位点多态性 ,探索 STR基因分析在亲子鉴定案例中的应用价值。方法 应用 PCR复合扩增和四色荧光自动化检测技术对 5 74名南方汉族无关个体的 9个 STR位点作基因分型。结果 获得中国南方汉族人群中 9个 STR位点的等位基因频率 ,其基因型分布符合 Hardy- Weinberg平衡。经统计分析 ,D8S1179、D2 1S11、D18S5 1、D13S317、D7S82 0、D5 S818、v WA和 FGA位点属于高鉴别力、高杂合度、高信息含量的 STR位点 ,D3S135 8属于中高度多态性位点。 9个 STR位点的累积个体识别能力 (DP)、多态信息含量 (PIC)、杂合度 (H)和非父排除率 (PE)均为 0 .9999。在 2 10例亲子鉴定案例中 ,否定亲权的 2 8个案例中均至少有 3个位点不符 ;认定亲权的 182例中 ,亲子关系指数 (RCP)大于 99.73%的有 179例 (98.35 % ,179/ 182 ) ,另外 3例 (1.6 5 % ,3/ 182 ) RCP值为 95 .0 0 %～ 99.73%。结论 研究获得了中国南方汉族人群中 9个 STR位点的等位基因频率。应用这 9个 STR位点的等位基因鉴定 ,能成功地开展亲子鉴定 。

应用多种STR技术对基因嵌合体进行亲权鉴定分析

目的查找嵌合基因的来源并进行父母和孩子的亲权鉴定。方法采用Chelex-100法抽提基因组DNA,用复合扩增和荧光检测技术对STR、X-STR和Y-STR基因座进行分型。结果父亲为XX,XY基因嵌合体,其能够提供给孩子必须的遗传基因。结论父亲为被检孩子的生物学父亲。

三种不同核酸分析系统的效率比较分析

以4种转基因玉米基因组DNA为研究对象,使用转基因事件特异性引物进行普通PCR及多重PCR扩增,并分别应用普通琼脂糖电泳以及ABI 3730XL、岛津MultiNA、QIAGEN QIAxcel这3种核酸分析仪进行分析,比较了各种检测方法的优缺点。研究结果对不同检测需求的核酸片段大小分析方法提供了重要参考。

ABO血型遗传异常的亲子鉴定案例分析

目的探讨应用短串联重复序列(STR)基因位点检测技术开展亲子鉴定的可行性。方法采用PCR复合扩增技术、毛细管电泳及五色荧光自动化检测技术对2例亲子鉴定案例6份血液样本,进行了15个STR基因位点和1个Am elogen in性别基因位点检测分析。认定亲权关系的均以亲子关系指数(RCP)≥99.73%为准,排除亲权关系的则以≥3个以上基因位点不符为依据。结果1例排除亲子关系,另1例不排除亲子关系。结论STR位点的基因扫描方法简便、省时、快速、灵敏度高,结果准确可靠。

STR基因位点检测技术在亲权鉴定中的应用

目的探索应用短串联重复序列(STR)基因位点检测技术开展亲权鉴定的可行性.方法自2002年3月～2004年5月间,采用PCR复合扩增技术、毛细管电泳及五色荧光自动化检测技术对143例亲权鉴定案例389份血液样本,进行了15个STR基因位点和1个Amelogenin性别基因位点检测分析.认定亲权关系的均以亲子关系指数(RCP)≥99.99%为准,排除亲权关系的则以≥3个以上基因位点不符为依据.结果在143例亲权鉴定案例中,认定有亲权关系的119例,占83.22%,排除有亲权关系的24例,占16.78%,结论 STR基因检测位点多,多态性高,DNA片段短、造成错配和优先扩增的可能性小,提高了PCR扩增的成功率和灵敏度,而且标本用量少(一般仅为0.1 ng模板DNA),因此,目前STR基因位点检测技术可以作为亲权鉴定的主要技术手段.

成都汉族群体15个短串联重复序列基因座遗传多态性

目的 获得15个短串联重复(short tandem repeat,STR)基因座在成都汉族群体的群体遗传学数据。方法 2 10份EDTA抗凝血样采自成都地区无血缘关系的汉族个体。Chelex法提取DNA,PCR复合扩增,自动基因分析仪电泳收集电泳结果数据,基因扫描分析软件计算扩增产物片段相对大小,基因分型软件进行样本基因型分型。结果 全部样本的每个STR基因座都获得了清晰的基因型分型结果。15个STR基因座的杂合度介于0 .5 2 9～0 .881之间。累计非父排除率和累计个人识别机率为0 .999998和7.3×10 - 1 7。结论 经一次扩增电泳可获得15个STR基因座的基因型分型结果并明确样本性别。累计非父排除率和累计个人识别机率较高,适用于法医学亲权鉴定和个人识别。

PowerPlexFusion Kit 24个STRs在河南汉族人群中的遗传多态性研究

目的调查河南地区汉族人群24个短串联重复序列(STR)基因座的遗传多态性研究。方法本研究所使用的PowerPlexFusion System是美国Promega公司新近推出的一种扩增24个位点的多重复合扩增系统。包括22个常染色体位点1个性别位点Amelogenin及1个男性专有的DYS391位点。使用AB9700 PCR扩增仪和3500Dx遗传分析仪,对河南地区1503名汉族无关个体进行基因组多态性检测,并用Genemapper ID-X软件进行基因分型。结果 22个常染色体STR基因座在1503名河南汉族无关个体中的等位基因频率介于0.0003-0.7200,个体识别能力介于0.4330-0.9870,多态性信息含量值介于0.3800-0.9100,观察杂合度值介于0.6310-0.8720,期望杂合度值介于0.4329-0.9987,非父排除率值介于0.3440-0.7300,经典父权指数值介于0.5000-3.9100。22个常染色体STR基因座中,Penta E的各项多态性指标均为最高,TPOX基因座的各项指标值均为最低。结论 PowerPlexFusion System扩增体系所包含的22个常染色体STR及1个Y-STR在河南汉族中具有极高的遗传多态性、个体识别力和非父排除率,可用于河南汉族群体的亲子鉴定、个体识别以及DNA数据库建设。