高通量实时动态PCR定量检测过滤后血液残余的WBC

背景 为避免WBC相关的输血并发症而广泛应用过滤器,以降低WBC到每微升血<或=0.1WBC,必须用灵敏QC法测定滤过的单位血中残余WBC的数量。一种快速有效的方法是用实时动态PCR(kPCR)扩增DNA。研究设计及方法 比较2种制备的标准方法并用于优化定量kPCR。首先将DNA细胞溶解产物注入稀释剂,随后1:9稀释。第二将10倍稀释WBC注入过滤2次的新鲜全血。250份过滤的冰冻全血样品双份扩增,以验证kPCR检测法的重复性。

PCR定量检测肺炎支原体在肺炎支原体肺炎中的应用分析

目的:探讨PCR定量检测在肺炎支原体肺炎诊断中的可行性及优越性。方法:选取186例接受治疗的肺炎患者,分别用MP快速培养法和实时PCR进行检测。记录并比较两组检测方法下的灵敏度及特异性等相关数据。结果:快速培养法与实时PCR法诊断肺炎支原体肺炎的灵敏度、阳性预测值、假阴性率及诊断符合率差异无统计学意义(P>0.05);实时PCR法诊断肺炎支原体肺炎的特异性为85.5%(65/76),明显高于快速培养法的77.6%(59/76),假阳性率为14.5%(11/76),明显低于快速培养法的22.4%(17/76),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:快速培养法与实时PCR法诊断肺炎支原体肺炎的敏感度差别不大,而实时PCR法的特异性优于快速培养法。临床上应用这两种不同原理的检测方法组合检测,取长补短,在提高肺炎支原体感染检出率的同时,还可以互相佐证,减少实验误差,提高检测的准确性。

罗非鱼戴维斯黄杆菌实时定量PCR检测方法的建立及应用

戴维斯黄杆菌(Flavobacterium davisii)是柱形病病原之一,严重影响罗非鱼养殖产业.为了实现对其快速和准确的诊断,本研究以TonB基因为靶基因构建了重组质粒,建立了戴维斯黄杆菌的实时定量PCR检测方法,并将其应用到罗非鱼感染戴维斯黄杆菌后的载菌量测定研究.结果表明:特异性引物TonB-F/R与不同基因型的黄杆菌及罗非鱼其他常见病原无交叉反应,所建立的绝对定量检测方法是常规PCR检测方法灵敏度的100倍,其重复性和稳定性良好;罗非鱼感染戴维斯黄杆菌后其鳃组织载菌量显著高于其他组织,符合该疾病的侵染特点.综上所述,该实时定量PCR检测方法具有快速、高灵敏度和强特异性等优势,可准确评估戴维斯黄杆菌的感染程度,对柱形病的预防具有重要价值.

非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测方法

试验旨在建立一种非洲猪瘟病毒(ASFV)的荧光定量PCR检测方法,根据ASFV P72基因核苷酸序列,通过基因克隆技术在质粒载体中克隆一段ASFV P72基因片段,设计一对特异性引物以及探针,通过带有基因序列的重组质粒绘制曲线,构建了一种ASFV荧光定量PCR检测手段。结果显示,该方法具有较高的敏感度,标准曲线线性关系较好,相关系数达到0.9998,重复性较佳,变异系数小;且以其他疾病核酸为模板均未出现扩增曲线,特异性较好。研究表明,该荧光定量PCR方法能够为ASFV的检测提供帮助。

如何规避非洲猪瘟荧光定量PCR检测实验中的操作问题

非洲猪瘟荧光定量PCR检测作为一种实验室快速检测技术,已被广泛应用于非洲猪瘟病原诊断中。荧光定量PCR法是一种准确、快速的检测方法,在根除、检测非洲猪瘟的过程中具有较高的应用价值。虽然,该实验室检测技术、试验试剂等非常成熟,但因检测人员操作不当,造成检测结果不清晰和假阳性复检等常有发生,实验结果无效会浪费大量实验时间和实验材料。本文仅以密云区动物疫病预防控制中心实验室的非洲猪瘟荧光定量PCR检测实验中出现的问题进行分析,提出改善措施,解决实际问题,为其他拥有相同问题的地区实验室提供参考。

刍议活动性肺结核早期检验中半巢式全自动实时荧光定量PCR检测与涂片抗酸染色法的应用研究

目的评估半巢式全自动实时荧光定量PCR检测与涂片抗酸染色法在活动性肺结核早期检验中的应用效能。方法选取2022年9月—2023年9月于平邑县结核病防治所就诊的90例疑似肺结核患者为研究对象,采用Xpert MTB/RIF技术、涂片抗酸染色法检验及简单法固体培养法同时检测90例疑似肺结核患者痰标本,对检测结果进行比较。结果以固体培养结果作为金标准,痰培养阳性率85.56%,阴性率14.44%。Xpert MTB/RIF阳性率84.44%、阴性率15.56%。涂片抗酸染色法检验阳性率48.88%、阴性率51.11%。Xpert MTB/RIF检验的灵敏度97.40%、准确度96.67%、阳性预测值98.68%以及阴性预测值85.71%均高于涂片抗酸染色法检验50.64%、52.22%、88.64%、17.39%,差异有统计学意义(χ^(2)=43.768、46.722、5.922、22.546,P均<0.05)。结论与涂片抗酸染色法相比,在活动性肺结核早期检验中采用半巢式全自动实时荧光定量PCR检测(Xpert MTB/RIF)的应用效能更高。

高危型HPV感染临床检验中实时荧光定量PCR检测法的作用

目的分析高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染临床检验中实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测法的作用。方法选取80例疑似高危型HPV感染患者,均接受第二代杂交式捕获法(HCⅡ)、实时荧光定量PCR检测,以病理检查结果为金标准,分析实时荧光定量PCR检测价值。结果实时荧光定量PCR检验准确率97.50%、敏感度98.51%、特异度92.31%,均显著高于HCⅡ的78.75%、88.06%、38.46%(P<0.05);实时荧光定量PCR诊断检出率CINⅠ100%、慢性宫颈炎92.31%,均显著高于HCⅡ的88.10%、46.15%(P<0.05)。结论应用实时荧光定量PCR检测法可明显提高高危型HPV感染患者的临床检验准确性,提高治疗方法的针对性。

猪传染性胃肠炎荧光定量PCR检测与治疗

猪传染性胃肠炎(TGE)为一类兽医临床常见的传染病,TGE的主要临床表现为严重腹泻、呕吐、脱水。与猪流行性腹泻(PED)的临床特征相似,二者常出现混合感染,导致临床诊断困难。PCR技术是快速诊断TGE的重要方法,TGEV作为TGE的病原体,其核衣壳蛋白(N)基因是PCR检测的靶基因。建立敏感特异的荧光定量PCR方法用于检测TGEV。本病的临床表现为呕吐、腹泻和脱水等症状,具有高传染性和致死率。如果病猪没有得到及时治疗,有可能感染其他猪只,就此影响健康猪只的健康及养殖场的经济收益。因此,做好猪传染性胃肠炎疾病诊断和治疗工作意义重大。基于此,笔者分析猪传染性胃肠炎荧光定量PCR检测与治疗方法。

4种致牛腹泻病毒多重荧光定量PCR检测方法的建立及应用

【目的】建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛冠状病毒(BCoV)、牛轮状病毒(BRV)、牛恶性卡他热病毒(MCFV)4种致牛腹泻病毒多重荧光定量PCR检测方法,为BVDV、BCoV、BRV和MCFV的鉴别诊断提供技术支持。【方法】根据BVDV的5′UTR基因、BCoV的N基因、BRV的VP6基因和MCFV的ORF9基因的保守区域设计引物,克隆目的基因构建标准阳性重组质粒,建立可同时检测4种致牛腹泻病毒的多重荧光定量PCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行评价。用建立的多重荧光定量PCR检测方法对76份临床样品进行检测,并与常规PCR检测方法的结果进行比较。【结果】建立了BVDV、BCoV、BRV和MCFV多重荧光定量PCR检测方法,该方法建立的标准曲线线性关系良好,仅可特异性扩增出4种目标基因片段;对BVDV、MCFV、BRV和BCoV的最低检出限分别为9.4×10^(1),1.4×10^(3),9.1×10^(1)和1.2×10^(2)拷贝/μL,与普通PCR相比,灵敏性高出10~1000倍;批内、批间差异均小于5%。76份临床样品检测结果显示,多重荧光定量PCR检测结果与普通PCR检测结果的符合率分别为98.7%(BCoV)、97.4%(BRV)、100.0%(BVDV)和100.0%(MCFV)。【结论】建立了BVDV、BCoV、BRV和MCFV多重荧光定量PCR检测方法,该方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于牛腹泻病毒病原的实验室检测。

实时荧光PCR定量检测粪便中Akkermansia muciniphila方法研究

目的建立实时荧光PCR定量检测粪便中Akkermansia muciniphila(A.muciniphila)的方法,为A.muciniphila的定量检测及深入研究提供技术支持。方法建立SYBR GreenⅠ荧光PCR定量检测A.muciniphila的方法,利用A.muciniphila标准品制备标准曲线,评价该方法的灵敏度、特异性、抗干扰性及重复性,并对30例人粪便样本进行检测。结果标准曲线线性关系良好(R2=0.999);方法灵敏度可达到1.0×102 CFU/mL;该方法可特异性扩增A.muciniphila,不受其他肠道细菌的影响;组内和组间重复性较好,Ct值的变异系数均小于2%;30例人粪便样品中A.muciniphila阳性率为73%,Ct值为17.40~31.77。结论本研究建立的实时荧光PCR定量检测粪便中A.muciniphila的方法简便、快速、经济,且具有良好的灵敏度、特异性、抗干扰性和重复性,适用于实际粪便样品的检测。

肺结核细菌检测中的荧光定量PCR检测应用分析

目的分析荧光定量PCR检测在肺结核细菌检测中的应用效果。方法选取2022年1月至2022年12月我院收治的100例疑似肺结核患者,采集患者的痰液标本,进行荧光定量PCR检测、痰涂片检测、痰培养检查,将以痰培养检查结果作为“金标准”,对比分析另两种检测方法对肺结核细菌的检测效果。结果在100例疑似肺结核患者中经痰培养检查检出阳性81例,阴性19例;采用荧光定量PCR检测检出真阳性78例,真阴性17例;经痰涂片检测检出真阳性70例,真阴性13例;荧光定量PCR检测诊断灵敏度(96.30%)、阴性预测值(85.00%)以及诊断符合率(95.00%)均高于痰涂片检测(86.42%、54.17%、83.00%),差异有统计学意义(P<0.05),两种检测方法的诊断特异度、阳性预测值保健,差异无统计学意义(P>0.05)。结论荧光定量PCR检测对于肺结核细菌检测的效果要优于痰涂片检测,有着较高的灵敏度,能够有效增加结核杆菌测定结果,帮助疾病早诊断和早治疗。

基层非洲猪瘟荧光定量PCR检测技术研究

随着现代化养猪业的快速发展,非洲猪瘟已成为全球养猪业最大的威胁之一。我国将非洲猪瘟列为重点防范的一类动物疫病,实行严格的防控措施,包括加强检测和监测、加强动物隔离和消毒、实行扑杀等紧急措施。在基层工作中,为了更快速、准确地检测非洲猪瘟病毒,多采用荧光定量PCR的检测方法。本文将围绕这个主题进行论述。

猪传染性胃肠炎荧光定量PCR检测与治疗

近年来,随着居民生活品质不断提升,养猪业规模化进程不断推进,同时各类病害发病率随之加大。该文阐述了猪传染性胃肠炎的致病原与传播途径,就某养猪场发病情况描述了发生特征,并介绍了荧光定量PCR检测方法以及针对性中医治疗与西医治疗方法,给养殖户提供借鉴,确保养殖业持续良好发展。

乙肝病毒DNA荧光定量PCR检测及其意义

探究乙肝病毒DNA荧光定量PCR检测及其意义。方法 在我院选取96例大三阳患者作为实验A组研究对象,96例小三阳患者作为实验B组研究对象,96例乙肝病毒检查显示HBsAG(乙肝表面抗原)阳性者作为实验C组研究对象,96例乙肝病毒检查显示HBsAb(乙肝表面抗体)阳性者作为实验D组研究对象患者作为实验组研究对象,另外选取60例同期接受门诊健康体检的健康者作为对照组研究对象。样本纳入启动时间为2021年1月,完结时间为2022年1月。所有样本均接受乙肝病毒DNA荧光定量PCR检测,对比各组间检查数据的差异。结果 乙肝病毒DNA荧光定量PCR检测HBV-DNA阳性率高低顺序分别为实验A组(100.00%)、实验粗C组(60.41%)、实验B组(44.79%)、实验D组(21.88%)、对照组(3.13%),各组间均有明显差异(P<0.05);各组乙肝病毒DNA荧光定量PCR检测病毒拷贝数高低顺序分别分为实验A组>实验B组>实验C组>实验D组>对照组,组间数据差异显著(P<0.05)。结论 DNA荧光定量PCR检测可对乙肝病毒感染作出准确的分析,可根据患者病毒复制状态实施相关治疗。

乙肝病毒DNA荧光定量PCR检测及其意义

目的 探讨荧光定量PCR法检测的乙肝病毒DNA与乙肝病毒标志物之间的关系。方法 3 62例血清标本同时进行乙肝病毒标志物和HBVDNA的检测 ,按照不同的乙肝病毒标志阳性情况分组后 ,进行乙肝病毒DNA与乙肝病毒标志物的分析研究。结果 乙肝病毒标志物HBsAgHBeAgHBcAb阳性组HBVDNA阳性率 97.7% ,拷贝数在 10 4 ～ 10 8之间 ;HBsAgHBeAbHBcAb阳性组阳性率 5 6% ,拷贝数在 10 2 ～ 10 7之间 ;HBsAgHBcAb阳性组阳性率 5 4% ,拷贝数在 10 2 ～ 10 7之间 ;HBsAgHBeAg组阳性率 10 0 % ,拷贝数在 10 7之间 ;HBeAbHBcAb组 3例 ,有 1例阳性 ,拷贝数 10 2 ;HBsAb组阳性率 14 .3 % ,拷贝数在 10 3 ～ 10 7之间 ;189例全阴性有 2例阳性 ( 1.0 6% ) ,拷贝数在 10 4 ～ 10 5之间。结论 HBVDNA在各种模式的HBV标志阳性血清甚至全阴性的血清中均可检出 ,但检出率相差甚大 ,从 1.0 6%～ 10 0 % ;HBVDNA乙肝病毒标志中HBeAg阳性者其HBVDNA阳性率及拷贝数较高 ;HBsAg及其抗体阳性者仍可检出HBVDNA ,说明仅仅依靠乙肝病毒标志进行早期诊断以及判断病人是否具有传染性是不够的。

荧光定量PCR检测人类乳头瘤病毒在尖锐湿疣中的应用

目的 对尖锐湿疣 (CA)患者进行乳头瘤病毒 (HPV )DNA定量测定。方法 用聚合酶链反应 (PCR )测定HPVDNA的载量及HPV分型。结果 2 0 0例尖锐湿疣患者中 198例疣体组织HPV测定阳性 ,2例阴性。在 84例疣体组织HPV6、11阳性者中有 12例合并HPV16、18阳性。 5例疣体组织及宫颈分泌物同时阳性。定量测定结果显示 :HPV6、11患者最高 2 .0× 10 8copy/ml ,最低 3 .0× 10 4copy/ml,HPV16、18患者最高 1.75× 10 7copy/ml,最低 3 .0× 10 5copy/ml。 结论 尖锐湿疣患者应用荧光定量PCR检测HPV阳性率高 ,并可快速区分致癌型及致疣型HPV感染 。

黄瓜花叶病毒荧光定量PCR检测方法的建立

【目的】建立检测香蕉中黄瓜花叶病毒Cucumber mosaic virus(CMV)的实时荧光定量方法.【方法】根据CMV外壳蛋白(CP)保守序列设计了TaqMan实时荧光定量PCR特异性探针及引物,优化反应体系检测TaqMan探针实时荧光定量方法的灵敏度、特异性和重复性.【结果和结论】该方法检测灵敏度为4.2×102μL-1,比普通PCR高100倍,且与香蕉束顶病毒Banana bunchy top virus(BBTV)、香蕉线条病毒Banana streak virus(BSV)无交叉反应,特异性和重复性都较好.用实时荧光定量PCR检测14份田间香蕉样品有5份样品为阳性,进一步证明建立的实时荧光定量方法可用于香蕉CMV的检测.

TaqMan探针用于转基因食品的荧光定量PCR检测

选择了内源基因大豆植物凝集素 (lectin)、玉米转化酶 (invertase)和外源基因抗草甘膦除草剂的 5 烯醇式丙酮酰莽草酸 3 磷酸合成酶 (cp4epsps)、抗欧洲玉米螟的苏云金芽孢杆菌杀虫毒蛋白 (cryIAb)的TaqMan探针 ,确定了探针浓度和镁离子浓度等反应条件 ,分别对转基因大豆和转基因玉米系列标准品进行内源基因和外源基因的荧光PCR扩增 ,在PCR反应过程中分别以TET和FAM两种荧光通道信号分别追踪同一样品DNA的内源基因和外源基因的扩增动力学变化 ,并依此绘制了ΔCt值与转基因食品百分比含量之间的标准曲线 ,建立了转基因大豆和转基因玉米的TaqMan -荧光定量PCR检测方法 ,该方法具有探针设计较简便、成本较低的特点 ,初步实现了对转基因食品的定量分析及品种鉴定。

荧光定量PCR检测解脲支原体感染与胎膜早破的关系

目的:探讨解脲支原体(UU)感染与胎膜早破的关系。方法:采用荧光定量PCR检测法分别对50例胎膜早破和50例正常妊娠非胎膜早破妇女的宫颈分泌物、胎盘母面、新生儿咽拭子进行解脲支原体检测。结果:胎膜早破组宫颈分泌物、胎盘母面、新生儿咽拭子中,UU检测率明显高于对照组,两组比较,差异均有显著性(P<0.05)。结论:解脲支原体感染与胎膜早破的发生关系密切。