荧光定量PCR探针熔解曲线法在结核分枝杆菌耐药基因检测中的应用研究

探讨在结核分枝杆菌耐药基因检测中,对其予以荧光定量PCR探针熔解曲线法,观察分析应用价值。方法 本研究的时长段在2022年6月到2023年6月,统共1000例结核患者接受治疗,所有病患都拓展了抗结核药物的测验,且每一位患者的标本均予以荧光定量PCR探针熔解曲线法检测,药物敏感性测定结果为黄金基准,考察判辨荧光定量PCR探针熔解曲线法对利福平医药品、异烟肼医药品、乙胺丁醇医药品、链霉素医药品的诊断效能。结果 针对1000例的标本中,经过液体药敏试验检测显示对利福平药物耐药例数250例,役使溶解曲线观察耐药性包含了240例患者;对异烟肼医药有耐药性的液体药敏试验500例,应用溶解曲线检测耐药性包含了470例;经过液体药敏试验检测显示对乙胺丁醇药物耐药例数170例,予以熔解曲线法显示耐药140例。经过液体药敏试验检测显示对乙胺丁醇药物耐药例数300例,役使溶解曲线观察耐药性包含了240例患者。熔解曲线法对利福平医药品、异烟肼医药品、乙胺丁醇医药品、链霉素医药品的灵敏度分别为84.00%、84.00%、47.06%、66.67%;特异度分别为96.00%、90.00%、84.34%、94.29%;准确度分别为93.00%、97.00%、91.00%、86.00%。结论 在结核分枝杆菌耐药基因检测中,对其予以荧光定量PCR探针熔解曲线法,可得到较高的应用价值,灵敏度、特异度、准确度较高,可筛查结核病患者对利福平、异烟肼、乙胺丁醇等药物的耐药性,为临床治疗疾病提供可靠的依据。

荧光定量PCR探针熔解曲线法在结核分枝杆菌耐药基因检测中的应用

目的应用荧光定量PCR探针熔解曲线法检测耐多药结核病患者的临床分离菌株对一线抗结核药物的耐药基因突变。方法于2009年1月1日至2012年12月31日留取南京市胸科医院结核科门诊部或住院的所有肺结核患者痰液标本，每人3～5ml，均进行痰结核分枝杆菌培养、鉴定和药物敏感性试验（简称“药敏试验”），分离出结核分枝杆菌菌株67株。应用荧光定量PCR探针熔解曲线法，根据靶序列熔点变化，实时PCR检测结核病患者的临床分离标本对利福平、异烟肼、乙胺丁醇及链霉素的耐药情况；通过与传统药敏试验进行对比，对2种结果不一致的菌株进行基因测序分析，探讨其发生突变的位点差异，并观察在治疗中的变化。结果利福平和异烟肼的表型和基因型检测具有较高的一致性，分别为99％（66／67）和97％（65／67），不一致的菌株都是表型检测法为耐药，而基因型检测为敏感，测序未检测到突变。乙胺丁醇和链霉素的表型和基因型检测一致性较低，分别为60％（40／67）和75％（50／67）。测序发现，乙胺丁醇的突变发生在embB306和embB406位点上；链霉素突变发生在rrs基因517位点和907位点，以及rpsL43耐药密码子。结论应用荧光定量PCR探针熔解曲线法，能快速筛查结核分枝杆菌对一线抗结核药物的耐药情况。

PCR探针熔解曲线法在对肺结核患者进行结核分枝杆菌耐药基因检测中的应用效果

目的 :探讨PCR探针熔解曲线法在对肺结核患者进行结核分枝杆菌耐药基因检测中的应用效果。方法 :将2018年1月至2018年3月期间在青海省第四人民医院门诊或住院部接受治疗的20例肺结核患者作为研究对象。使用PCR探针熔解曲线法对这20例患者体内结核分枝杆菌对利福平、异烟肼、乙胺丁醇和链霉素的耐药性进行耐药基因检测。然后,以药敏试验的结果为金标准,观察这些患者体内结核分枝杆菌的耐药基因检测结果与利福平、异烟肼、乙胺丁醇和链霉素耐药表型的一致性。结果 :这20例患者体内结核分枝杆菌的耐药基因检测结果与利福平、异烟肼耐药表型的一致性较高,其体内结核分枝杆菌的耐药基因检测结果与乙胺丁醇、链霉素耐药表型的一致性较低。结论 :PCR探针熔解曲线法在对肺结核患者进行结核分枝杆菌耐药基因检测中的应用效果显著,可迅速地筛查出患者体内结核分枝杆菌对利福平等常用一线抗结核药的耐药情况。

多重不对称PCR探针熔解曲线法在一管中检测多个肥胖易感基因方法的建立

目的针对中国人群4个常见的肥胖易感基因位点(FTO基因rs1421085位点、APOA5基因rs662799位点、FABP2基因rs1799883位点、ADRB3基因rs4994位点),建立一种方便、精准、低成本的检测方法。方法结合前期研究中发现的与中国人群肥胖密切相关的4个基因位点,设计引物对、荧光探针以及对应等位基因的靶序列,通过熔解曲线法,验证荧光探针与对应等位基因的靶序列的工作效果,确认不同基因型的熔解温度。采用PCR-Sanger测序法为金标准,对收集的人唾液样本进行检测,选取12个基因型的样本,开发多重不对称PCR荧光探针熔解曲线法进行检测。随后,使用多重不对称PCR探针熔解曲线法与PCR-Sanger测序法分别对200例志愿者的唾液样本进行基因分型检测,比较两种方法的结果与优缺点。结果多重不对称PCR探针熔解曲线法可以在一管中同时对4个常见的肥胖易感基因位点进行检测,准确度与PCR-Sanger测序法相同,且与PCR-Sanger测序法需有扩增、电泳、纯化、s测序的复杂步骤相比,可在一管中一次完成检测,操作更为便捷,且成本更加节省。结论本研究建立了一种针对4个常见肥胖易感基因位点的方便、精准、低成本的基因分型方法,为人群肥胖易感基因的批量筛查提供了一种有效的检测手段。

荧光PCR探针熔解曲线法检测MTBC对利福平、异烟肼耐药性的价值分析

目的 探讨荧光PCR探针熔解曲线法检测结核分枝杆菌复合菌群(MTBC)对利福平、异烟肼耐药性的价值。方法 回顾性分析2018年6月-2021年4月惠州市职业病防治院收治的528例肺结核与耐多药结核病患者的临床资料。所有患者均进行痰液标本采集,采集后进行送检,之后进行分离培养和药敏试验,采用荧光PCR探针熔解曲线法对MTBC对利福平、异烟肼的耐药性进行测定分析,最终获得211份阳性菌株,再经鉴定为MTBC 208份,3份为非结核分枝杆菌。对荧光PCR探针熔解曲线法检测MTBC耐药性的效能进行分析。结果 经比例法进行的药敏试验结果显示,208份MTBC菌种标本中,120份对利福平具有耐药性,146例对异烟肼具有耐药性;经荧光PCR探针熔解曲线法检查后,135份对利福平耐药,敏感73份,其中仅有114份确定对利福平具有耐药性;经荧光PCR探针熔解曲线法检查后,134份对异烟肼耐药,敏感74份,其中有131份确定对异烟肼具有耐药性。荧光PCR探针熔解曲线法检测MTBC对利福平、异烟肼耐药性的特异度分别为76.14%,95.16%,对异烟肼耐药性的检测特异度高于利福平,差异具备统计学意义(P<0.05);对异烟肼耐药性的检测灵敏度低于利福平,准确度高于利福平,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 荧光PCR探针熔解曲线法检测MTBC耐药性的效能较高,可应用于快速发现耐药基因位点突变,筛查耐多药肺结核,并在治疗中进行动态监测,进而可指导临床调整治疗方案。

荧光PCR探针熔解曲线法评价结核分枝杆菌复合群对利福平和异烟肼耐药性的价值

目的:探讨使用荧光聚合酶链式反应(PCR)探针熔解曲线法检测结核分枝杆菌复合群(MTBC)对利福平耐药性、异烟肼耐药性的评价效果。方法:从珠海市慢性病防治中心2019年1月至2021年2月所接收的180例肺结核与耐多药结核病患者中,筛查萋–尼染色结果阳性的80份痰标本,对鉴定结果为MTBC的痰标本做比例法药敏试验与荧光PCR探针熔解曲线法分析,以比例法药敏试验为金标准,观察荧光PCR探针熔解曲线法对利福平耐药性与异烟肼耐药性的检测效能。结果:金标准结果显示71份MTBC痰标本中41份对利福平耐药,50份对异烟肼耐药,荧光PCR探针熔解曲线法对利福平耐药的检测效能上,灵敏度、特异度与准确度分别为95.12 %、76.67 %、87.32 %,一致率Kappa值为0.81;对异烟肼耐药的检测效能上,灵敏度、特异度与准确度分别为90.00 %、95.24 %、91.55 %,一致率Kappa值为0.77。结论:采取荧光PCR探针熔解曲线法检测MTBC对利福平耐药性、异烟肼耐药性的检测效能均较高,检测结果同比例法药敏试验的一致率高。

应用荧光定量PCR-探针熔解曲线法快速鉴定分枝杆菌菌种方法的建立及初步评价

目的应用荧光定量PCR-探针熔解曲线法建立一种快速、简便、高效的分枝杆菌菌种鉴定新方法,为临床医师正确诊断提供理论依据。方法以DNA直接测序法为对照,通过荧光定量PCR技术-探针熔解曲线法(包括反应A、B、C)分析22种分枝杆菌标准株、11种非分枝杆菌标准株和32株分枝杆菌临床分离株的菌种。结果应用荧光定量PCR-探针熔解曲线法分析22种分枝杆菌标准株和11种非分枝杆菌标准株,结果与标准株DNA测序一致,成功地建立鉴定方法。32株分枝杆菌临床分离株中,经DNA测序和荧光定量PCR-探针熔解曲线法分析显示,4株为结核分枝杆菌复合群(mycobacterium tuberculosis complex,MTC),7株为胞内分枝杆菌,6株为龟分枝杆菌脓肿亚种,4株为瘰疬分枝杆菌,4株为偶然分枝杆菌,3株为堪萨斯和胃分枝杆菌,2株为戈登分枝杆菌;另有2株分离株反应A的熔解曲线显示为分枝杆菌属的熔解温度(melting temperature,Tm)值,反应B和C的熔解曲线Tm值与22株分枝杆菌标准株的Tm值均不同,经DNA测序证实与戈登分枝杆菌标准株序列不同,与报道的戈登分枝杆菌分离株一致。结论用荧光定量PCR-探针熔解曲线法可简便、快速、灵敏、特异地将大多数分枝杆菌鉴定到种,提高分枝杆菌病的正确诊断率,指导临床合理用药。

探针熔解曲线法快速检测结核分枝杆菌注射类二线药耐药突变

目的评价结核分枝杆菌注射类二线药耐药突变检测试剂盒MeltPro TB/SL的分析性能以及临床性能。方法首先使用企业参考品对试剂盒的突变检出能力进行考察,之后将野生型基因组DNA以10倍梯度稀释后考察试剂盒的最低检测限,使用野生型质粒以及含常见耐药突变的质粒以不同突变比例混合考察试剂盒检测不均一耐药样本的能力,并使用23株非结核分枝杆菌标准株考察试剂盒的分析特异性,最后使用241份临床分离株对试剂盒进行临床评价。结果该试剂盒可以将9种耐药相关突变与1种野生型多态性与野生型进行区分。可以检测到低至5个拷贝的野生型基因组DNA。当突变比例为30%或更高时,试剂盒可以将其与野生型进行区分。23种非结核分枝杆菌的结果显示该试剂盒有良好的特异性。和比例法药敏试验进行对比,该试剂盒的临床灵敏度为卡那霉素90.0%(9/10),阿米卡星80.0%(8/10),卷曲霉素85.7%(6/7);特异性为卡那霉素98.8%(85/86),阿米卡星98.8%(85/86),卷曲霉素96.6%(86/89)。试剂盒检测结果与测序结果一致。结论该试剂盒灵敏度高、特异性好,可以快速、准确地检测结核分枝杆菌注射类二线药常见的耐药突变,有望应用于临床。

PCR熔解曲线法检测乙型肝炎病毒变异株

目的 探讨PCR熔解曲线法检测HBVDNA聚合酶活性区YMDD变异的临床应用价值 ,并以DNA测序结果为标准 ,比较其敏感性和特异性。方法 采用DNA测序法和PCR熔解曲线法 ,对拉米夫定抗病毒治疗过程中出现HBVDNA由阴转阳的 6 8例慢性乙型肝炎患者的血清 ,同步进行YMDD变异株的检测。结果 6 8例患者血清中 ,用DNA测序法检出YMDD变异株 5 5例 ,其中YIDD变异 2 5例 (其中 11例伴有L5 2 8M变异 )、YVDD变异 2 4例 (其中伴有L5 2 8M变异 19例 )、YMDD与YVDD共生伴有L5 2 8M变异 1例、YMDD与YIDD共生伴有L5 2 8M变异 5例 ,有 13例未发生YMDD变异 (野生型 )。用PCR熔解曲线法检出YMDD变异株 5 2例 ,其中YIDD变异 2 8例、YVDD变异 2 1例、YMDD与YVDD共生 1例、YMDD与YIDD共生 2例。有 10例未发生YMDD变异 (野生型 ) ,阴性结果 6例。两法变异符合率为 93.88% (46 / 4 9) ;检出符合率为 91.18% (6 2 / 6 8)。结论 采用PCR熔解曲线法进行YMDD变异株的检测 ,其操作方法简便 ,省时 ,不易交叉污染 ,很适用于临床快速诊断和人群筛查。但该法的敏感度和特异性均不如DNA测序法。

基于探针熔解曲线分析技术的非缺失型地中海贫血基因检测方法的建立

目的结合多重不对称PCR技术和荧光探针熔解曲线法,建立一种快速、准确、简便的非缺失型地中海贫血基因检测方法。方法设计针对9个常见非缺失型地中海贫血基因位点(αWSα、αQSα、αCSα、βIVSⅡ654、βCD-17、β-28、βCD41-42、βCD-71-72、βCD-26)的引物对、荧光探针以及对应等位基因的靶序列;使用熔解曲线法验证荧光探针与对应等位基因的靶序列的工作效果,确认不同基因型的熔解温度;使用30份已知基因型别的临床样本,提取全血样本的DNA并PCR扩增其9个等位基因目标片段,利用对应荧光探针的熔解温度变化区分不同位点的基因型;收集疑似地中海贫血病例的血液样本200例,按照双盲对照实验原则,分别用反向斑点杂交法试剂盒和多重不对称PCR探针熔解曲线法对这200例样本进行基因分型检测,比较两种方法的结果是否一致,并对两种方法的优缺点进行比较。结果多重不对称PCR探针熔解曲线法可以同时对9个非缺失型地中海贫血的基因位点进行检测,并通过对应荧光探针的熔解温度的变化区分不同位点的基因型,检测结果与反向斑点杂交法相比较有相同的准确度,且有操作简便、耗时短、成本低、污染风险低等优势。结论本研究建立了一种基于多重不对称PCR探针熔解曲线的基因分型方法,并成功用于9个非缺失型地中海贫血基因位点的诊断,该方法是一种简便、快速、低成本的检测方法,在地中海贫血筛查中有较好的应用前景。

荧光PCR熔解曲线法在检测临床标本结核分枝杆菌及其耐药性中的应用

目的评价荧光PCR熔解曲线法检测临床标本结核分枝杆菌及其对利福平和异烟肼敏感性的性能。方法收集重庆市公共卫生医疗救治中心2016年7月至2018年7月进行过荧光PCR熔解曲线法结核检测的病例,分别与结核菌培养和Genexpert比较检测结核菌的灵敏度,与比例法药敏比较药敏结果。结果在结核菌检测上,荧光PCR熔解曲线法阳性率与结核菌培养相近,低于Genexpert;与比例法药敏相比,检测利福平药敏的灵敏度为93.2%,特异度为80.2%,符合率为84.3%;检测异烟肼药敏的灵敏度为92.6%,特异度为86.3%,符合率为88.6%。结论荧光PCR熔解曲线法可以高灵敏地直接对临床样本快速检测结核菌及其耐药性。

荧光标记杂交双探针PCR融解曲线法在临床的应用评价

目的:对国产荧光标记杂交双探针PCR融解曲线法(FH—PCR—MC)检测乙型肝炎病毒聚合酶酪氨酸-蛋氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸基序(HBVYMDD)变异的试剂进行临床应用评价.方法:慢性乙型肝炎患者外周血浆标本217份,分别采用荧光标记Taqman探针定量PCR法(FT—PCR)和荧光标记杂交双探针PCR融解曲线法(FH—PCR—MC)检测HBVDNA含量和YMDD及其变异;其中78份HBVDNA阳性标本采用基因型特异性多引物对巢式PCR法进行基因分型(A—F),30份标本用PCR产物克隆测序法检测HBVYMDD及其变异.结果:血浆标本HBVDNA阳性率(≥1.0×106copies/L)为75.6%(164/217).YMDD及其变异检出率为67.7%(147/217).其中YMDD44.9%(66/147),YIDD22.5%(33/147).YVDD17.7%(26/147),YIDD/YVDD混合株10.9%(16/147),其他混合株4.0%(6/147);结合HBVDNA含量,HBVYMDD及其变异的检出下限为HBVDNA=5.0×106copies/L,但在106copies/L时检出率较低,仅为36.4%,随着HBVDNA含量增高,检出率显著增高(>80%),且在107copies/L时即有显著增高(χ2=7.177,P<0.01).在基因分型的78份标本中,C基因型占89.8%,B和D基因型分别占8.9%和1.3%,YMDD及其变异总检出率为100%,变异总检出率为59.0%;1份D基因型YMDD及其变异检测为YIDD/YVDD混合变异;B,C两种基因型变异检出率分别为71.4%和55.7%,但二者无统计学差异.以测序法的检测结果为相对标准,则FH—PCR—MC法检测HBVYMDD及其变异的相对敏感性、特异性和符合率分别为96.3%(26/27),100%(3/3)和96.7%(29/30);对于HBVYMDD及其变异的类型,两种方法检测结果一致.结论:FH—PCR—MC法是一种快速、特异的HBVYMDD及其变异检测方法,具有较高的检出率,且能区分YMDD及其变异的类型.

应用多色探针熔解曲线法检测G6PD缺乏症杂合子的基因突变

目的应用多色探针熔解曲线法(multicolor melting curve analysis,MMCA),建立一种快速筛查葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症杂合子的临床方法。方法收集重庆地区2015年1月至2016年7月共429例(男性342例,女性87例)疑似G6PD缺乏症的患者外周血,采用G6PD/6PGD定量比值法和MMCA法分别检测男性和女性G6PD酶活性和基因突变,以金标准Sanger测序来评价两种方法。同时收集重庆地区进行G6PD缺乏症新生儿疾病筛查的1 754份女性末梢血滤纸片,采用MMCA法筛查G6PD基因突变。结果 429例疑似病例中,G6PD/6PGD定量比值法诊断男性的灵敏度96.8%、特异性100%,与Sanger测序法一致性好(Kappa=0.917,P<0.05);但女性的灵敏度仅10%,特异性100%,与Sanger测序法一致性差(Kappa=0.127,P<0.05)。MMCA法诊断男性的灵敏度95.7%,特异性100%,与Sanger测序法一致性较好(Kappa=0.891,P<0.05);女性的灵敏度100%,特异性100%,与Sanger测序法结果完全吻合(Kappa=1.000,P<0.05)。1 754例女性中杂合子占1.14%(20/1 754),G6PD酶活性均正常。结论与传统的G6PD/6PGD定量比值法比较,MMCA法检测杂合子灵敏度更高,可用于G6PD缺乏症杂合子筛查,为一种简便、准确的诊断新方法。

实时荧光PCR熔解曲线法快速鉴定嗜肺军团菌

目的建立特异、快速、敏感的实时荧光PCR熔解曲线基因分型方法,并探讨该法在鉴定嗜肺军团菌中的应用价值。方法根据嗜肺军团菌16S rRNA基因保守序列设计引物和猝灭FRET探针建立实时荧光PCR熔解曲线方法,优化引物与探针浓度,用15株嗜肺军团菌、30株非嗜肺军团菌及7株其他病原菌标准菌株验证该方法的特异性、敏感性和重复性,用该法检测117例临床痰标本并进行基因测序。结果 15株不同血清型的嗜肺军团菌Tm值均为57℃;7株非嗜肺军团菌Tm值为43℃,1株Tm值为45℃;其余22株非嗜肺军团菌和7株其他病原菌均无明显Tm值。该方法最低检出限可达0.1 pg/μL。检测117例痰标本发现3株嗜肺军团菌,与PCR基因测序法检测结果一致。结论实时荧光PCR熔解曲线法可特异、快速和敏感地检测嗜肺军团菌,适用于临床痰标本的嗜肺军团菌检测。

非探针法高分辨率熔解曲线(HRM)对FecB基因分型方法的研究

为了建立一种基于非探针法高分辨率熔解曲线(HRM)技术对绵羊FecB基因高效分型的方法,试验选用健康、成年绵羊48只,利用HRM和限制性片段长度多态性(PCR-RLFP)对绵羊多胎主效基因FecB基因进行分型效果研究。结果表明:FecB基因具有3种基因型,分别是野生型(AA)37.50%、杂合型(GA)33.33%、纯合突变型(GG)29.17%;通过对基因测序比对、HRM和PCRRLFP结果的准确率比较,HRM的准确率达到了95.83%(46/48),高于RLFP的分型结果,所需试验时间大大缩短。说明非探针法HRM技术是一种高效率、节省人工的FecB基因分型方法。

多色探针熔解曲线法应用于别嘌呤醇不良反应相关基因HLA-B* 58∶01的检测

目的评价多色探针熔解曲线法（MMCA）在别嘌呤醇不良反应相关的HLA-B＊ 58∶01基因检测中的应用。方法收集1147（人）份厦门地区无偿献血者的外周静脉血标本,提取全基因组DNA后,按双盲对照试验,分别应用HLA序列分型（HLA-SBT）测序法和MMCA法检测各标本的HLA-B＊ 58∶01基因,比较2种检测方法的符合率。结果采用HLA-SBT测序法与MMCA法在1 147人份献血者标本中检出的HLA-B＊ 58∶01阳性及阴性标本均相同,分别为213和934例,符合率为100%（1 147/1 147）;本组厦门地区献血人群的HLA-B＊ 58∶01携带率为18.57%（213/1147）。结论 MMCA法用于HLA-B＊ 58∶01基因检测简便、快速、灵敏度高、特异性强。

荧光PCR熔解曲线法对痰样本结核分枝杆菌耐药性检测价值及耐药特征分析

随着抗结核药物广泛、长期以及不规范使用等因素影响,结核分枝杆菌耐药问题越来越复杂,耐药结核病尤其耐多药结核病(MDR-TB)的发病率日趋增高,耐药性的产生使其具有病程长、病情复杂、治愈率低、病死率高等危害。2020年全球上报耐多药/利福平耐药结核(MDR/RR-TB)13.2万例,准广泛耐药或广泛耐药结核病2.6万例,合计约15.8例,较2019年下降22%,据估算我国耐药结核病发病率居全球前三位[1]。2017年,《肺结核诊断标准》把结核分枝杆菌(MTB)分子生物学检查纳入结核病病原学诊断范围[2]。

荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐药性的临床价值评估

目的:分析评价荧光PCR熔解曲线技术检测结核分枝杆菌异烟肼、利福平、氟喹诺酮类、注射类二线药耐药性的临床应用价值.方法:收集2013年黑龙江省耐药监测结核分枝杆菌临床分离株215例,运用荧光PCR熔解曲线法检测其对异烟肼、利福平、氟喹诺酮类、注射类二线药物的耐药性,以微孔板药敏试验结果为金标准,评估熔解曲线快速检测耐药的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、符合率.结果:荧光PCR熔解曲线法检测利福平的灵敏度90.9%(20/22)、特异度95.85%(185/193)、阳性预测值71.42%(20/28)、阴性预测值98.93(185/187)、符合率95.34%(205/215);检测异烟肼的灵敏度为83.33%(35/42)、特异度91.9%(159/173)、阳性预测值71.42%(35/49)、阴性预测值95.78%(159/166)、符合率90.23%(194/215);检测氧氟沙星的灵敏度为90%(9/10)、特异度100%(205/205)、阳性预测值100%(9/9)、阴性预测值99.51%(205/206)、符合率99.53%(214/215);检测莫西沙星的灵敏度为88.88%(8/9)、特异度100%(206/206)、阳性预测值100%(8/8)、阴性预测值99.51%(206/207)、符合率99.51%(214/215);检测阿米卡星的灵敏度100%(3/3)、特异度100%(212/212)、阳性预测值100%(3/3)、阴性预测值100%(212/212)、符合率100%(215/215);检测卡那霉素的灵敏度80%(4/5)、特异度100%(210/210)、阳性预测值100%(4/4)、阴性预测值99.52%(210/211)、符合率99.53%(214/215).结论:荧光PCR熔解曲线技术检测结核分枝杆菌对异烟肼、利福平、氟喹诺酮类、注射类二线药的耐药性有较好的灵敏性、特异性,检测时间短,可用于辅助耐药结核分枝杆菌快速诊断筛查.

PCR熔解曲线法检测MTHFR 677T基因多态性在H型高血压诊治中的应用

高同型半胱氨酸血症是指血浆同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）水平的异常升高（Hcy≥10μmol/L）。亚甲基四氢叶酸还原酶（methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR）是同型半胱氨酸代谢过程中较为重要的关键酶，MTHFR677C/T多态性可引起血浆Hcy水平的增高，研究发现MTHFR677C/T突变是中国人患有高同型半胱氨酸血症的重要原因之一。

荧光PCR探针熔解曲线技术检测痰标本中结核分枝杆菌异烟肼耐药性的研究

目的评价荧光PCR探针熔解曲线(fluorescence polymerase chain reaction probe melting curve,Melt Pro)技术检测痰标本结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)异烟肼耐药性的应用价值。方法收集2021年5月至2022年5月在北京市疾病预防控制中心结核病门诊Gene Xpert MTB/RIF检测为MTB的(简称MTB阳性)患者痰标本,对每份标本同时进行涂片镜检、分枝杆菌分离培养、Melt Pro技术和线性探针技术(Geno Type MTBDRplus,简称Hain试验)异烟肼耐药检测。分析Melt Pro技术检测痰标本MTB异烟肼的耐药性,痰标本荷菌量对检测结果的影响;以培养阳性菌株异烟肼比例法药敏结果为参考标准,评价Melt Pro技术耐药检测效能。结果收集MTB阳性的合格痰标本157例,经分枝杆菌分离培养获得阳性菌株130株。Melt Pro技术痰标本MTB异烟肼耐药性检测成功率为84.1%(132/157)。不同痰涂片结果等级间,Melt Pro技术检测异烟肼耐药成功的比例差异存在有统计学意义(H=24.169,P=0.000),随痰涂片结果等级的升高,检测成功率由“阴性”标本的64.8%(35/54)升高到“3+”“4+”标本的100%(17/17,6/6);该比例也随Gene Xpert MTB/RIF检测MTB等级的升高而升高,由“极低”标本的54.8%(17/31),到“高”标本的96.4%(27/28),各等级间差异有统计学意义(H=27.763,P=0.000)。Melt Pro技术、Hain试验和药敏试验的异烟肼耐药检出率分别为22.0%(29/132),15.3%(19/124),和14.6%(19/130),三者差异无统计学意义(χ^(2)=2.997,P=0.223)。以培养阳性菌株比例法药敏试验结果为参考标准,Melt Pro技术检测异烟肼耐药的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为:84.6%(11/13)、91.2%(93/102)、55%(11/20)、97.9%(93/95),Kappa值为0.614;Hain试验检测异烟肼耐药的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为:55.6%(10/18)、92.3%(84/91)、58.8%(10/17)、91.3%(84/92),Kappa值为0.490。结论Melt Pro技术可直接检测痰标本MTB耐药性,快速准确筛查患者耐药情况,缩短耐药筛查时间。