PCR结合斑点杂交诊断肺结核

目的评价PCR结合斑点杂交诊断肺结核的临床应用价值。方法应用PCR方法扩增呼吸道标本中结核分枝杆菌IS6110内的一段长度为188bp DNA片段,分别用地高辛随机引物标记DNA探针斑点杂交(PCR-斑点杂交)和琼脂糖凝胶电泳(PCR-电泳)检测扩增的PCR产物,比较灵敏度和特异度。肺结核的诊断以呼吸道标本结核分枝杆菌培养阳性作为诊断金标准。结果PCR-斑点杂交方法检测临床可疑肺结核患者298例呼吸道标本(痰液246例,诱导痰52例)结果显示其诊断肺结核总的敏度90.6%,特异度93.8%,而PCR-电泳方法总的灵敏度84.0%,特异度94.3%,经McNemar检验,P<0.05。结论PCR结合斑点杂交能快速、敏感诊断肺结核,有助于临床及时治疗。

虾池中桡足类及其休眠卵携带对虾白斑综合症病毒的初步调查研究

探讨对虾白斑综合症（White Spot Syndrome WSS）与虾池中桡足类之间的关系，于2003年5～10月份，在暴发过对虾白斑综合症的池塘中采集桡足类样品共128个，并从冬季底泥样品分离出桡足类休眠卵样品20个，以及此种休眠卵孵化得来的桡足类幼体样品5个。利用PCR斑点杂交法以及巢式PCR法检测样品中对虾白斑综合症病毒（White Spot Syndrome Virus WSSV）携带情况。结果表明，5～10月份桡足类样品中均能检测到阳性样品，总的阳性率为56．3％；其中，5月份样品阳性率为37．5％，6，8，9，10月份各取样1次，每次样品中的阳性率均在60％以上。在20例桡足类休眠卵样品中有1例为阳性，阳性率为5％；并且实验室中孵化此种休眠卵得来的桡足类幼体样品中检测到阳性，阳性率为40％。本研究初步表明，桡足类是WSSV的携带者或传播媒介之一，且冬季池塘底泥中携带WSSV的桡足类休眠卵可萌发出带病毒的桡足类。

不同分子生物学方法检测鸡传染性贫血病病毒的比较分析

为了解不同鸡群传染性贫血病病毒(CIAV)感染情况及禽用弱毒疫苗中CIAV的污染情况,利用常规PCR、nested-PCR、PCR结合核酸斑点杂交和实时荧光定量PCR等不同核酸检测方法对近两年企业送检的11批次525份临床病料以及13批次125份疫苗样品进行了检测。结果显示:Nested-PCR灵敏度最高,从送检的病料样品中检测出CIAV阳性率为11.2%(59/525),疫苗样品中检测出CIAV阳性率为4.8%(6/125),PCR结合核酸斑点杂交和实时荧光定量PCR与Nested-PCR检出率基本一致,但常规PCR检出率明显低于其他三种。

广东江门地区13725例新生儿遗传性耳聋基因筛查结果分析

目的了解江门地区新生儿常见耳聋基因突变类型和携带率,建立有效的新生儿听力筛查与耳聋基因联合筛查体系。方法选择2016年6月至2018年2月江门市妇幼保健院和开平市妇幼保健院出生的13 725例新生儿,利用诱发耳声发射和自动判别听性脑干电位进行听力筛查,利用PCR反向斑点杂交检测GJB2、GJB3、SLC26A4和线粒体DNA 12S rRNA基因16个突变位点。结果13 725例新生儿听力筛查通过率99.03%(13 592/13 725),未通过率为0.97%(133/13 725),筛查出耳聋基因阳性511例,阳性率为3.72%,其中GJB2基因突变242例(1.76%),SLC26A4基因突变210例(1.53%),线粒体DNA 12S r RNA基因突变29例(0.21%),GJB3基因突变26例(0.19%),发现双基因杂合突变2例,单基因复合杂合突变2例。共检出突变位点14个,检出率最高的为GJB2基因c.235del C突变215例(215/511,42.07%),其次是SLC26A4基因IVS7-2 A>G 137例(137/511,26.81%)。听力筛查联合耳聋基因筛查检测到阳性新生儿630例(4.59%),听力筛查未通过的133例新生儿中耳聋基因检测异常14例,497例新生儿为耳聋基因异常而听力筛查通过。结论江门地区新生儿遗传性耳聋GJB2及SLC26A4基因突变率高,开展新生儿听力筛查联合耳聋基因筛查有助于新生儿耳聋的早期诊断和防治。

上海地区宫颈细胞学正常女性人乳头瘤病毒型别分布及影响因素分析

目的了解上海地区宫颈脱落细胞学正常女性人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）型别分布特征及其相关影响因素。方法选取上海地区已婚女性3372人进行问卷调查；用PCR反向斑点杂交法（PCR-RDB）对3206名妇女的宫颈脱落细胞样本进行HPV感染型别鉴定；采用Logistic回归对资料进行分析。结果3206名妇女中HPV感染者为669例，阳性检出率为20．87％。阳性检出率前3位的年龄段为55-59岁、50-54岁和45～49岁，阳性检出率分别为27．67％％、21．65％和21．55％。在HPV感染中-重感染占70．4％；多重感染占29．6％。在多重感染中以二重感染为主（20．63％）。中高危基因型HPV感染的前5位型别是HPV52型3．65％，HPV53型2．71％，HPV51型2．03％、HPV58型1．87％和HPVl6型1．40％；低危型前3位型别是HPV81型2．03％，HPV42型1．43％和HHPV55型1．31％。HPV感染患者中中高危HPV感染者483例，中高危HPV阳性受试者与HPV阴性受试者在年龄、初次性生活年龄、周性生活次数、学历和饮酒等方面差异有统计学意义（P〈0．05）。其中，经年龄分层发现55～59岁年龄段感染率明显高于其他年龄段（X^2=15．349，P=0．000）。单因素分析，中高危基因型HPV感染的保护因素为高学历和较晚的初次性生活年龄，而危险因素为55～59岁年龄段、更年期月经状况、≥3次／周的性生活次数和饮酒。经多因素非条件Logistic回归分析，高学历和较晚的初次性生活年龄仍然是中高危基因型HPV感染的保护因素，其回归系数分别为-0．165和-0．08（P〈0．01）；55～59岁年龄段、／〉3次／周性生活次数和饮酒是中高危HPV感染的风险因子，其OR值分别为1．558、1．275和1．678（P〈O．01）。进一步分析，55～59岁年龄段和饮酒是中高危HPV感染的独立风险因素。结论上海地区女性中高危HPV感染的常见型别是HPV52型、HPV53型、HPV51型、HPV58型和HPVl6型；55-59岁年龄段是中高危HPV感染的高风险人群，55-59岁年龄段和饮酒是独立风险因素；适度性生活，推迟初次性生活年龄能降低中高危HPV的感染风险。

应用悬浮点阵和变性高效液相色谱技术检测β地中海贫血基因的比较

目的比较悬浮点阵技术(suspension array,SA)及变性高效液相色谱技术(DHPLC)在β-地中海贫血及基因分型诊断中的应用。方法通过分析100例正常人标本和69例经PCR反向斑点杂交技术(PCR-RDB)确认的β-地中海贫血患者外周血DNA标本,经PCR扩增并分别运用SA及DHPLC两种方法对其进行基因分型诊断。结果100例正常人标本结果为阴性,69例β-地中海贫血标本经两种方法检测其缺失和突变的基因型别完全一致,其中单位点基因突变65例,多位点基因突变4例。结论两种检测技术在β-地中海贫血基因分型诊断中准确性完全一致,具有快速、高效、检测平台的通用性的共同点;但悬浮点阵技术在临床标本检测具有更高的优势,变性高效液相色谱技术则可检测未知突变,在基础研究方面具有优势。