利用微波炉和煮沸法快速制备大肠杆菌基因组DNA PCR模板

利用微波炉和煮沸法可以简单、快速、有效地制备大肠杆菌基因组DNAPCR模板。用该模板做PCR具有很高的效率和良好的特异性。

快速制备酵母质粒和基因组DNA PCR模板

发展了一个利用煮沸法快速制备酵母质粒和基因组DNAPCR模板的程序 。

快速制备水稻基因组DNA PCR模板的煮沸法

文章发展了一个采用煮沸法快速制备水稻基因组DNA PCR模板的程序,成功地从水稻基因组扩增到了相应基因。

碱裂解叶片两步快速制备PCR模板技术研究

广泛采用提取DNA作为PCR模板的方法主要有CTAB和SDS法2种,但步骤烦琐、耗时长。根据Taq酶储存液和PCR反应缓冲液所含K+离子、Cl-离子和Tween-20等成分,以0.05mol/LKOH为强碱裂解物、2%Tween-20为稳定剂配制碱裂解液,以0.05mol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸(Tris-HCl)和2mmol/LEDTA为中和液,经加热裂解和中和两步制备PCR模板。以甘蔗叶片为材料,用新鲜配制含KOH和Tween-20的裂解液,将适量叶片放入一定体积的裂解液中加热裂解,再中和,形成裂解混合物。直接以裂解混合物为模板,甘蔗内源基因为靶基因,在优化KOH裂解浓度、模板体积、加热裂解时间以及添加适量聚合酶稳定剂的情况下,PCR反应稳定,重复性强。以有代表性的单子叶和双子叶植物叶片为材料,经过多种内源基因PCR反应的反复验证,证实了这种方法的广泛适用性。该方法通过两步制备PCR模板,无需DNA提取过程,使用材料少,可以实现活体PCR检测,为遗传分析和分子诊断提供简便、快速和高效的分析方法。

一种快速稳定制备水稻PCR模板的方法

研究建立了一种用碱处理磨碎水稻叶片快速制备PCR模板的方法,该方法简单快速、稳定可靠、扩增效 果好,对待测植株的损伤小;而且用于制备模板的样品不受叶龄的限制,低温保存后的样品和制备好的DNA模板 也不影响其扩增效果。因此,该方法在转基因水稻的大规模筛选与鉴定方面更经济有效。

一种简便快速的制备水稻基因组DNA PCR模板的方法

目的:发展一种简便快速的制备水稻基因组DNA PCR模板的方法。方法:用枪头捣碎水稻叶片代替液氮研磨法提取水稻基因组DNA作PCR模板,在去污剂SDS和表面活性剂TrionX-100的存在下在沸水中煮沸10min,然后取上清扩增微管蛋白(TubA1)基因内含子。结果:发现在利用煮沸法提取水稻基因组DNA的过程中,用枪头捣碎叶片可代替液氮碾磨,加入0.1%表面活性剂TrionX-100煮沸叶片对制备模板有促进效果,得到了预期的PCR片断。结论:该方法快速、简便、经济,具有良好的重复性与特异性,便于自动化。

利用微波炉快速制备水稻基因组DNA PCR模板

建立了利用微波炉法快速制备水稻基因组DNAPCR模板的程序,成功地从水稻基因组扩增到了相应基因。

一种简便、快速从病毒感染鱼、虾组织中制备PCR模板的方法

以虹彩病毒 (iridovirus)感染大黄鱼的脾组织、对虾白斑杆状病毒 (whitespotsyndromebaculovirus,WSBV)感染中国对虾的肌肉组织为材料 ,采用一种简便、快速的方法获得了可满足病毒PCR检测的高质量模板DNA ,分别以针对虹彩病毒、WSBV的特异性引物进行PCR扩增 ,均能有效扩增出预期的条带。与常规DNA病毒模板制备方法相比 ,具有简便、快速、提取率高、无污染等优点 ,尤其适用于水产动物病毒PCR检测试剂盒的商品化开发及生产实际应用。

三种快速制备含重复序列质粒PCR模板的方法

为了探索含重复序列质粒PCR模板的快速简易制备方法,分别利用高速离心法、TE煮沸法和TE/SDS煮沸法处理过夜培养的含重组质粒大肠杆菌菌体,制备模板后进行PCR扩增发现,均能得到比较清晰的目的条带,可以用于含重复序列质粒的初步鉴定。相比较而言,高速离心5 min、TE煮沸3 min、TE/SDS煮沸2.5 min制备的样品PCR扩增后效果较好。这3种方法快速、简便、费用低、无污染,简化了PCR模板制备的过程,为重组质粒大量筛选鉴定的研究奠定了基础。

一种简易的甘蔗叶组织PCR模板制备方法

以转基因甘蔗叶片为材料,少量嫩叶经碱并短暂高温处理,再中和,形成裂解混合物。直接以此为模板,转基因甘蔗外源基因bar、KP4、Cry1Ac-2A-gna融合基因及内源基因Shactin基因为靶基因,PCR扩增结果稳定、准确、重复性强,完全可以达到常规CTAB法提取的DNA扩增效果。用此方法制备的模板室温下2周之内,4℃、-20℃下一个月之内结果不变。经多种外源基因PCR反应的反复验证,证实了这种方法在转基因甘蔗检测中的广泛适用性。该方法快速制备PCR模板,无需DNA提取过程,具有使用样品量少,成本低、简便、快捷等优点。

绿色木霉PCR模板的制备方法研究

采用经典CTAB法、简化CTAB法、氯化苄法和快速提取法对绿色木霉总DNA进行制备。利用依据绿色木霉CBH2基因设计合成的一对引物,以上述方法制备的DNA为模板进行PCR反应,证明简化CTAB法是绿色木霉PCR模板DNA制备的最佳方法。

一种用于PCR模板制备的电泳产物简易回收方法

为了探索一种简便、有效而且能从琼脂糖凝胶中大量回收用于第2次PCR扩增的DNA电泳条带的方法,采用刀片切胶法和牙签插胶法从琼脂糖中回收DNA,并进行了两种方法的比较.结果显示牙签插胶法回收的DNA用作第2次PCR的模板,获得了清晰、稳定的PCR产物电泳条带,用该法成功地制备了一批DNA微阵列探针.由此可见牙签插胶法是一种简便、快速、有效的用于PCR模板的DNA琼脂糖凝胶回收法.

PCR模板的快速制作

ＰＣＲ模板的快速制作无锡市妇幼保健院（２１４００２）江苏省苏南片遗传医学诊断中心糜祖煌ＰＣＲ因灵敏、特异、简便而作为新颖的基因诊断技术已被临床医学所接受。然而，正确、及时地发放ＰＣＲ检测报告选择合适的标本处理方法（ＰＣＲ模板制作）十分重要。本文介绍我...

两种放线菌基因组DNA PCR模板制备方法的比较

[目的]比较制备放线菌基因组DNA PCR模板的两种方法液氮研磨法及TE煮沸法。[方法]以从河西走廊盐碱土壤中分离鉴定的8属16株菌为材料,包括糖丝菌属(Saccharothrix)Ⅳ23-3-4、类诺卡氏菌属(Nocardioides)Ⅴ22-5-1、原小单孢菌属(Promicromonospora)Ⅸ5-4-3、小单孢菌属(Micromonospora)Ⅱ23-4-1、放线多孢菌属(Actinopolyspora)Ⅳ8-2-5、拟诺卡氏菌属(Nocardiopsis)Ⅱ8-4-3、链单孢菌属(Streptomonospora)DA01305、链霉菌属金色类群DA03401、链霉菌属金色类群DA01408、链霉菌属蓝色类群DA09140、链霉菌属金色类群DA01308、链霉菌属灰红紫类群DA05213、链霉菌属蓝色类群DA11417、链霉菌属粉红孢类群DA04401、链霉菌属灰红紫类群DA04402、链霉菌属球孢类群DA04307。对两种方法制备的PCR模板进行16S rDNA的扩增,PCR产物进行电泳检测。[结果]两种方法均能得到比较清晰的目的条带,但TE煮沸法简化了放线菌基因组DNA PCR模板制备的过程,可用于高通量放线菌PCR模板的快速制备。[结论]该研究为大批量菌株的快速鉴别和系统分类提供了有效的方法。

水稻PCR扩增模板的快速制备

用碱处理水稻嫩叶,取碱处理水稻叶片浸出液直接用作PCR扩增的模板,扩增结果稳定、准确,与常规提取的DNA扩增效果相比没有显著差异。用此方法制备的模板室温下2周之内、4℃下3周之内、-20℃下4个月以上扩增结果不变。此方法所需试剂均为常规试剂,具有需要材料少、成本低、简便、快捷等优点,尤其适合材料比较宝贵的转基因水稻的预筛选和大样本量的PCR检测,为分子标记技术的实际应用创造了条件。

一种从特殊植物材料中制备PCR模板的新方法

报道了一种从较长年代的植物标本以及富含次生代谢物质的植物材料中制备PCR模板的新方法.对常规方法提取的纯度较低的总DNA,采用微量玻璃粉吸附,并直接用于PCR反应.作为应用实例,比较了新方法与常规方法对6个样品的nrDNA ITS区和cpDNA rbcL基因的PCR扩增结果.结果显示,新方法明显比常规方法优越,这为特殊植物材料DNA的纯化与PCR模板的制备提供了一种简便、快速、低成本的方法.