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PCR结合核酸斑点杂交技术检测转基因番茄研究 被引量:2
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作者 梁彦君 陈文虎 +2 位作者 王梦娜 许爱霞 冯俊丽 《浙江理工大学学报(自然科学版)》 2013年第5期747-752,共6页
基于转基因番茄的安全性评价,建立健全番茄转基因检测体系尤为迫切。文章采用转基因作物检测常用的传统定性PCR技术和核酸斑点杂交技术,针对转基因番茄中常用的35S(花椰菜花叶病毒启动子)、NOS(胭脂碱合成酶终止子),NPTII(新霉素转移酶... 基于转基因番茄的安全性评价,建立健全番茄转基因检测体系尤为迫切。文章采用转基因作物检测常用的传统定性PCR技术和核酸斑点杂交技术,针对转基因番茄中常用的35S(花椰菜花叶病毒启动子)、NOS(胭脂碱合成酶终止子),NPTII(新霉素转移酶基因),35S-EFE(35S和番茄EFE基因的交联结构)、以及Lat52(番茄内参基因),检测了阳性对照质粒PBI121、华蕃一号样品和阴性对照合作903番茄。从华蕃一号中成功检出35S、NOS、NPTII、35S-EFE和内参基因Lat52,阴性对照番茄合作903中只有内参基因Lat52检出。试验重复性良好,检测灵敏度高,两种方法相互补充,排除假阳性。核酸斑点杂交一次可检出多个外源基因,增加了检测通量,为我国番茄转基因检测提供参考。 展开更多
关键词 转基因番茄 外源基因检测 定性pcr技术 核酸斑点杂交
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PCR、斑点杂交及间接免疫荧光试验对鸡传染性贫血病临床诊断的应用比较
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作者 孙伟 胡青海 +2 位作者 崔力兵 张长明 李刚 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期437-440,共4页
应用能特异性扩增出鸡传染性贫血病毒( C A V) 058 kb D N A 的已知引物,对江苏某地区疑为 C A V感染的 15~30 日龄病鸡的肝 D N A 样品进行了 P C R 扩增。结果,在被检的 20 份样品中,有 6 份... 应用能特异性扩增出鸡传染性贫血病毒( C A V) 058 kb D N A 的已知引物,对江苏某地区疑为 C A V感染的 15~30 日龄病鸡的肝 D N A 样品进行了 P C R 扩增。结果,在被检的 20 份样品中,有 6 份为 P C R 阳性,阳性率 30% 。利用地高辛标记的 085 k b 的 C A V 核酸探针对相同样品进行斑点杂交,结果与 P C R 扩增相同。对应的病鸡血清经间接免疫荧光试验( I I F A)发现,有 7 份为 C A V 抗体阳性,与 P C R 扩增结果的符合率为 77% 。初步结果表明,江苏某地区存在 C A V 感染, I I F A 与 P C R 展开更多
关键词 鸡传染性贫血病毒 pcr 核酸探针 间接免疫荧光试验 斑点杂交 鸡传染性贫血病
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运用荧光定量PCR检测低氧训练大鼠肝脏ChREBP基因表达 被引量:3
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作者 刘建红 黄森 +2 位作者 周志宏 林文弢 翁锡全 《中国运动医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期196-198,共3页
目的:建立碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)基因表达的绝对定量实时PCR检测技术。方法:32只SD大鼠随机分为常氧安静组、常氧运动组、低氧安静组和低氧运动组,运动组每天运动1小时,每周运动5天;低氧组每天在低氧下生活10小时。实验6... 目的:建立碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)基因表达的绝对定量实时PCR检测技术。方法:32只SD大鼠随机分为常氧安静组、常氧运动组、低氧安静组和低氧运动组,运动组每天运动1小时,每周运动5天;低氧组每天在低氧下生活10小时。实验6周后取肝组织,应用实时定量PCR方法检测肝组织ChREBP mRNA的表达。结果:实时定量PCR方法可对肝组织ChREBP mRNA表达进行定量检测,ChREBP基因拷贝数与检测阈值呈线性关系,相关系数r>0.99。结论:实时定量PCR方法检测ChREBP mRNA结果准确、可靠。 展开更多
关键词 碳水化合物反应元件结合蛋白 信使核糖核酸 实时定量pcr
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不同分子生物学方法检测鸡传染性贫血病病毒的比较分析 被引量:4
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作者 张玉标 李晓晗 +5 位作者 孟凡峰 董桂伟 任衍倍 崔治中 常爽 赵鹏 《中国家禽》 北大核心 2018年第7期18-22,共5页
为了解不同鸡群传染性贫血病病毒(CIAV)感染情况及禽用弱毒疫苗中CIAV的污染情况,利用常规PCR、nested-PCR、PCR结合核酸斑点杂交和实时荧光定量PCR等不同核酸检测方法对近两年企业送检的11批次525份临床病料以及13批次125份疫苗样品进... 为了解不同鸡群传染性贫血病病毒(CIAV)感染情况及禽用弱毒疫苗中CIAV的污染情况,利用常规PCR、nested-PCR、PCR结合核酸斑点杂交和实时荧光定量PCR等不同核酸检测方法对近两年企业送检的11批次525份临床病料以及13批次125份疫苗样品进行了检测。结果显示:Nested-PCR灵敏度最高,从送检的病料样品中检测出CIAV阳性率为11.2%(59/525),疫苗样品中检测出CIAV阳性率为4.8%(6/125),PCR结合核酸斑点杂交和实时荧光定量PCR与Nested-PCR检出率基本一致,但常规PCR检出率明显低于其他三种。 展开更多
关键词 CIAV pcr NESTED-pcr pcr结合核酸斑点杂交 实时荧光定量pcr
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马铃薯类病毒(PSTVd)非放射性标记cDNA探针制备及其在检测上的应用 被引量:7
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作者 吕典秋 李学湛 +2 位作者 于德才 胡林双 杨希才 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期104-108,共5页
利用含PSTVd单体克隆的重组质粒pGEM PSTVd,通过PCR扩增技术,用生物素标记制备cDNA探针,进行杂交反应检测PSTVd,其中通过化学颜色反应进行判读灵敏度可达50pg,而用化学发光反应进行判读灵敏度可达5pg,分别是R- PAGE检测灵敏度的26倍和26... 利用含PSTVd单体克隆的重组质粒pGEM PSTVd,通过PCR扩增技术,用生物素标记制备cDNA探针,进行杂交反应检测PSTVd,其中通过化学颜色反应进行判读灵敏度可达50pg,而用化学发光反应进行判读灵敏度可达5pg,分别是R- PAGE检测灵敏度的26倍和260倍,且2种反应特异性和专化性较强。cDNA核酸斑点杂交反应(NASH)检测PSTVd方法准确、灵敏度高,一次检测样品数量多,且对异地样品检测非常方便,是以往其它检测方法的有效补充。 展开更多
关键词 马铃薯类病毒 探针 核酸斑点杂交 pcr
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分子检测韭葱黄条病毒的研究 被引量:2
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作者 郑国华 明艳林 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第S1期105-107,共3页
韭葱黄条病毒(Leek yellow stripe virus,LY SV)为马铃薯Y病毒组(Potyviridae)的典型成员, 是危害葱属作物的主要病毒之一。该病毒最早由 Bos等在1978年鉴定并命名,目前在全世界范围内均有广泛分布。LYSV在电镜下呈11-12 nm ×820 n... 韭葱黄条病毒(Leek yellow stripe virus,LY SV)为马铃薯Y病毒组(Potyviridae)的典型成员, 是危害葱属作物的主要病毒之一。该病毒最早由 Bos等在1978年鉴定并命名,目前在全世界范围内均有广泛分布。LYSV在电镜下呈11-12 nm ×820 nm长的线状颗粒,为正义单链RNA病毒, 基因组全长10 142 bp,5'端具有病毒基因组结合蛋白VPg,3'端具有Poly(A),基因组含一个开放阅读框(ORF),翻译先产生一个具有蛋白酶功能的多聚蛋白,再自身酶解成包括外壳蛋白在内的十个多肽。 展开更多
关键词 核酸斑点杂交 检测方法 分子检测 感病植株 pcr 茎尖脱毒 黄条 韭葱
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HBV DNA定量检测方法的评价 被引量:13
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作者 何敏 杨朝霞 +2 位作者 刘微 陈亚杰 赵文静 《国外医学(临床生物化学与检验学分册)》 2005年第2期123-124,共2页
目的 协助临床检验工作者及科研人员选择适合本单位实际条件的HBV DNA定量检测方法。方法 采用核酸分子杂交、荧光定量PCR、微板核酸杂交三种方法对89 例乙型肝炎大三阳患者进行HBV DNA测定。结果 三种方法测定结果依次为荧光定量PC... 目的 协助临床检验工作者及科研人员选择适合本单位实际条件的HBV DNA定量检测方法。方法 采用核酸分子杂交、荧光定量PCR、微板核酸杂交三种方法对89 例乙型肝炎大三阳患者进行HBV DNA测定。结果 三种方法测定结果依次为荧光定量PCR法阳性89 例,微板核酸杂交法阳性81例,斑点杂交法阳性62例,三种方法均阳性61 例。结论 斑点杂交法准确性和特异性较高,适合于流行病学调查和药物观察等研究。荧光定量PCR技术灵敏度较高,若能提高其检测结果的准确性,它应为临床及科研之首选方法。微板核酸杂交技术有较高的灵敏度和特异性,操作简便,可常规普及。 展开更多
关键词 HBV 阳性 DNA定量检测 微板核酸杂交 特异性 斑点杂交 荧光定量pcr 核酸分子杂交 普及 测定结果
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PCR系统制备地高辛标记的探针检测脊髓灰质炎病毒核酸
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作者 刘明团 王树声 +1 位作者 朱田风 韦一知 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第3期164-166,共3页
笔者应用聚合酶链反应(PCR)合成系统,以逆转录的SabinⅠ、Ⅱ、Ⅲ型病毒cDNA为模板,在反应液中加入标记的Dig-dUTP,经扩增制备了地高辛配基标记的脊髓灰质炎病毒cDNA探针、该法比PCR扩增产物后,电泳,片段回收到标记、提纯,常需3... 笔者应用聚合酶链反应(PCR)合成系统,以逆转录的SabinⅠ、Ⅱ、Ⅲ型病毒cDNA为模板,在反应液中加入标记的Dig-dUTP,经扩增制备了地高辛配基标记的脊髓灰质炎病毒cDNA探针、该法比PCR扩增产物后,电泳,片段回收到标记、提纯,常需3天。结果比较PCR技术直接制备地高辛标记cDNA探针方便,快速,标记率高,用于型别鉴定比中和试验快,敏感,特异性强等优点。 展开更多
关键词 脊髓灰质炎病毒 核酸 斑点杂交 地高辛标记 pcr
原文传递
侵染厦门百合的百合无症病毒的鉴定及其分子检测
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作者 明艳林 李燕 +1 位作者 郑国华 张文珠 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第S1期153-155,共3页
百合无症病毒(Lily symptomless carlavirus, LSV)属于香石竹潜隐病毒组(Carlavirus),是单链正义RNA病毒。基因组全长为8 394 bp,共有6 个开放阅读框(Open reading fragment,ORF),分别编码RNA依赖的RNA复制酶,三基因连锁结构, 外壳蛋白... 百合无症病毒(Lily symptomless carlavirus, LSV)属于香石竹潜隐病毒组(Carlavirus),是单链正义RNA病毒。基因组全长为8 394 bp,共有6 个开放阅读框(Open reading fragment,ORF),分别编码RNA依赖的RNA复制酶,三基因连锁结构, 外壳蛋白和16 kD核酸结合蛋白。主要侵染百合属、郁金香属植物,通常在百合上不产生明显症状,与黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus, CMV)复合侵染时,导致叶片出现坏死斑。LSV 是危害百合的重要病毒,在世界各地都有分布。近年来国内陆续有该病毒病的报道,其发病率一般在40%-50%,二代种球的带毒率在90%以上, 严重制约了我国百合鲜切花的产量和质量,目前LSV已成为各口岸进出口百合种球的主要检疫对象。 展开更多
关键词 百合 花叶 LSV 核酸序列 补阴药 百合无症病毒 分离物 侵染 引物 病毒粒子 病毒体 寄主范围 pcr 地高辛标记 RNA 稀释度 探针浓度 硝酸纤维素膜 斑点杂交 斑点印迹 厦门 福建
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用抗细胞表面分子单链抗体筛选和鉴别其相互作用肽
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作者 许静 李侠 +3 位作者 刘俊霞 何一心 韩忠朝 宋增璇 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期40-44,共5页
展示于噬茵体表面的肽库适于用抗体筛选其特异性结合表达肽。scFv-C193是一个抗KGla细胞表面分子的单链抗体,其抗原仍不清楚,为了筛选并鉴定其识别分子,用8cFv-C193筛选了1个展示于T7噬茵体表面的人胎肝cDNA片段库。经4轮生物吸附后分... 展示于噬茵体表面的肽库适于用抗体筛选其特异性结合表达肽。scFv-C193是一个抗KGla细胞表面分子的单链抗体,其抗原仍不清楚,为了筛选并鉴定其识别分子,用8cFv-C193筛选了1个展示于T7噬茵体表面的人胎肝cDNA片段库。经4轮生物吸附后分离单个阳性噬斑,并对其表达产物做电泳分析及斑点杂交。结果鉴别出1个scFv-C193结合肽,scFv-C193+克隆噬菌体DNA插入片段的PCR扩增和序列分析结果表明它是1个43bpDNA片段表达产物。BLAST分析EST人类基因数据库,发现它97%相同于CD34+造血干/祖细胞mRNA的1-43bp,提示scFv-C193识别片段存在于人类造血干/祖细胞基因中,单克隆单链抗体scFv-C193可能用于研究这些人类基因的性质。 展开更多
关键词 抗体筛选 表面分子 相互作用 鉴别 造血干/祖细胞 CDNA片段 噬菌体DNA CD34^+ 单链抗体 表达产物 特异性结合 pcr扩增 基因数据库 BLAST 生物吸附 斑点杂交 电泳分析 分析结果 mRNA 细胞基因 人类基因 体表面 人胎肝 结合
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