结核分支杆菌荧光PCR试剂盒的研制及临床试验

目的用荧光PCR(fluorescence PCR,F-PCR)方法研制结核分支杆菌(TB)DNA检测试剂盒,通过临床试验评价其性能,并与其他方法进行比较。方法F-PCR是PCR和荧光探针杂交技术结合所产生的PCR方法。由于采用完全闭管荧光检测,避免了PCR后处理导致的假阳性污染;又采用了荧光检测技术,可以提高检测的灵敏性。应用F-PCR检测了297份肺结核病人和249份非结核对照者的痰液标本,以改良罗氏培养法、金胺荧光染液涂片法、Abbott公司的LCx试剂盒检测作为对照。结果设计合成了TB F-PCR诊断试剂盒。检测阳性率49.1%,灵敏性89.2%,特异性98.8%,符合率93.6%。结论F-PCR在灵敏性上显著优于培养法和涂片法,与LCx试剂盒检测无显著差异。F-PCR试剂盒可以检测TB的真实感染情况,对于临床诊断和疗效考察有一定的指导意义。

快速检测猪肉中单核细胞增多症李氏菌PCR试剂盒的研制

快速检测猪肉中单核细胞增多症李氏菌的ＰＣＲ试剂盒与分离培养法平行检测１５６份猪肉样品，结果ＰＣＲ的阳性率为５．８％，分离培养法的阳性率为３．８％，两者符合率为９７％。实验证明，该试剂盒具有良好的特异性和可重复性，可测出样品中至少３２ＯＣＦＵ细菌，并在２ｄ内取得结果，具有推广应用价值。

通过自制PCR试剂盒确诊雏鹅细小病毒感染

通过 PCR条件选择 ,组装了可用于确诊鹅细小病毒 (goose parvovirus,GPV)感染的试剂盒。首先根据 Gen Bank中已发表的鹅细小病毒不同株的核苷酸序列 ,设计并合成了 GPV特异性简并引物 ,利用该引物确定 PCR扩增条件 ,并鉴定了扩增产物的特异性。根据上述扩增条件 ,组装 GPV诊断试剂盒。试剂盒共有 3个反应管 ,贮于 - 2 0℃ ,应用时取 1号管 ,加入煮沸的肝脏悬液上清 ,2、3号管分别为阴性和阳性对照。按固定条件扩增 ,结果显示 ,待检病料的检出率在 96 %以上。该试剂盒操作简单 ,效果稳定 ,可用于

利用直扩PCR试剂盒检测小麦多效抗病基因

为了明确直扩PCR在小麦多效抗病基因检测中的效果,促进廉价、快捷的直扩PCR技术在小麦分子育种中的应用,本研究通过对聚合三个多效抗病基因Sr2、Lr34、Lr67的BC2单株进行直扩PCR检测,筛选到了三个基因聚合的杂合单株,证明了直扩PCR的有效性,并讨论了直扩PCR的优缺点和影响因素,为直扩PCR技术在作物分子育种中的推广应用提供参考。

弓形虫PCR试剂盒对感染家兔血液和精液的检测

目的:评价国内公司研制的弓形虫PCR检测试剂盒。方法:采用市售的国内生产的4种弓形虫PCR试剂盒检测弓形虫阳性兔的血液及精液标本。结果:温州伊利康TOX-PCR试剂盒、北京美迪科TOX-PCR试剂盒对家兔感染前后血液、精液标本均未出现阳性结果。上海复生TOX-PCR试剂盒检测家兔精液标本感染前阴性,感染后均能出现相应的结果,而检测血液标本杂带太多。洛阳华美TOX-PCR试剂盒检测家兔血液标本、精液感染前均为阴性,感染后血液标本阳性率76.53%,43份精液标本阳性率2.33%。结论:目前国内市售的TOX-PCR试剂盒可检测各种组织标本,但实际应用价值局限。

应用K88-K99 PCR试剂盒检测大肠杆菌研究

用研制的K88-K99 PCR诊断试剂盒对湖北省和江苏省的5个猪场238个病猪粪便进行了检测。扩增结果是K88检出率92.0％(219/238);K99检出率89.1％(212/238);阳性对照检出率100％,阴性对照未扩增到目的DNA片段。结果表明,运用PCR试剂盒检测具有快速、特异的优点,可同时处理大量样品,且可直接对粪便样品进行检测,值得进一步推广。

博尔纳病病毒荧光定量PCR试剂盒扩增缓冲液的优化

目的选择并优化博尔纳病病毒荧光定量PCR TaqMan探针法反应体系中的扩增缓冲液,使PCR反应体系对该病毒p24模板基因的扩增效率得到明显提高。方法通过常规PCR比较选择3种常用酸(盐酸、磷酸和硫酸)所滴定的缓冲液体系,在其基础上选择适合浓度的硫酸铵配制TSS buffer,在TSS buffer中分别加入四甲基氯化铵、TritonX-100、二甲亚砜和甜菜碱这4种常用的PCR添加剂,并确定各自的最佳工作浓度,选择扩增效果较好的添加剂与其他添加剂进行依次组合,寻找最佳的添加剂组合,最后用荧光定量PCR进行对比验证。结果在滴定酸上选择了效果最好的硫酸,配制TSS buffer硫酸铵的最佳终浓度为6 mmol/L。在添加剂的优化组合上,1.5 mol/L甜菜碱、0.15%Triton X-100、8 mmol/L四甲基氯化铵和TSS buffer组合成的TBTT buffer效果最佳,在其与TaKaRa PCR buffer的对比中,TBTT buffer效果明显好于后者。结论 成功研制优化出适合扩增博尔纳病病毒p24模板基因的扩增缓冲液。

应用PCR试剂盒对奶牛结核病的检测

应用聚合酶链式反应技术制备的PCR式剂盒,对贵州省某奶牛场140份血样和奶样标本中的结核分枝杆菌进行检测,结果显示:在111份奶样中有8份为阳性,阳性检出率7.2%。在39份血样中12头牛为阳性,阳性检出率为30.76%。本试验对PPD检测与PCR检测法进行验证,将1200头牛中PPD检测阳性牛和可疑牛,再用PCR法进行检测,PCR法阳性牛共计20头份,阳性检出率为1.67%,PPD法阳性牛24头份,阳性检出率为3.67%。结果表明:PCR试剂盒在检测牛结核病不同标本中显示出快速、特异等优点。

不同荧光PCR试剂盒检测非洲猪瘟病毒的比对与分析

为全面认识不同试剂盒检测非洲猪瘟病毒的特性。本文采用商品化的四种非洲猪瘟病毒实时荧光PCR检测试剂盒以ASF阳性对照为样品进行试验与研究。结果表明:同一种试剂扩增不同的阳性样本,其S型曲线轮廓基本相同。相同样本分别用不同试剂扩增,其S型曲线呈现出不同的轮廓特征。就S型曲线轮廓美观度而言,试剂B和C较理想。就相对荧光强度而言,A>C>B>D差异极显著(P<0.01),A试剂盒反应液中Taq酶、dNTP、离子等最充足,其次为C、B、D。B试剂反应所需要时间最短,最省时,其次为C、D、A。在实际应用中,应根据具体需求选择试剂盒。

新的实时PCR试剂盒可精确检测ASF

最近东欧暴发的非洲猪瘟（ASF）造成对精确诊断技术的需要越来越迫切，以便对这种高度传染性病原进行鉴定和监控，这种病目前既无疗法也无疫苗。赛默飞世尔科技公司的科学家展示了一种新的双工实时PCR试剂盒的研究数据，说明该试剂盒可高度敏感而特异地检测动物样本中的病毒。

病料保存条件及抗菌药物治疗对鸡毒支原体PCR试剂盒检测结果的影响

应用鸡毒支原体 (MG)S 6毒株人工感染SPF鸡 ,对采集咽喉棉拭子在不同条件下保存及药物治疗感染鸡后 ,对MG的分离培养和PCR检测结果的影响进行了探索。结果表明将咽喉棉拭子置于甘油PBS中于 -2 0℃冷藏或将干咽喉棉拭子放入 -2 0℃中保存 ,是最有效的保存方法。抗菌药物治疗感染鸡不仅影响MG的分离效果 ,同时也会降低PCR的检出率 ,从而影响MG临床诊断。

安捷伦科技公司发布用于克隆、基因表达和定量的一步法RT-PCR试剂盒

2010年1月6日，安捷伦科技公司（NYSE：A）宣布推出了AffinityScript一步法RT—PCR试剂盒。这一试剂盒的问世意味着安捷伦Stratagene产品部又一次携市场领先的高性能解决方案挺进一步法RT—PCR市场，致力于帮助研究者改善终点法RT-PCR的实验结果。

安捷伦科技推出新型PCR试剂盒——SureDirect血液PCR试剂盒可用于扩展的基因分型和病原体检测研究

安捷伦科技公司近日推出新型SureDirect血液PCR（聚合酶链反应）试剂盒．该试剂盒拓宽了公司PCR产品线，扩展了血源性疾病的基础和临床研究者在基因分型和病原体检测方法的应用．

6种非洲猪瘟荧光PCR试剂盒对比试验

对5个厂家的6种非洲猪瘟荧光PCR试剂盒检测的敏感性和一致性进行综合比较,选取已知阳性的核酸样品作为待测样品进行梯度稀释,每组设置三个平行对照,使用A1、A2、B、C、D、E6种试剂盒,按照各厂家试剂盒说明书对所有样品进行非洲猪瘟荧光PCR检测及结果判定,并从检出ct值的样品数量、检出核酸最低拷贝浓度、检出ct值的平均值和检出ct值的离散度四个维度来综合评估对6种试剂盒的敏感性和一致性。结果显示:检测灵敏度方面,由高至低的排名为试剂盒D>试剂盒C>试剂盒A2>试剂盒E>试剂盒B>试剂盒A1;检测一致性方面,试剂盒D>试剂盒C>试剂盒A2>试剂盒E>试剂盒B=试剂盒A1。综合6种试剂盒的敏感性和一致性来看,试剂盒D的灵敏度和一致性最好,试剂盒C稍低于试剂盒D,但差距很小,几乎在同一水平,试剂盒A2灵敏度和一致性次之,其余三种试剂盒E>试剂盒B>试剂盒A1。

应用鸡毒霉原体PCR试剂盒对人工感染鸡的检测

应用鸡毒霉原体 (MG)聚合酶链式反应 (PCR)试剂盒对人工感染鸡的样品进行检测 ,结果人工感染后第1～ 2 4天 ,所采集喉头及腭裂处粘液、喉气管组织、肺组织均可检出 MG,阳性检出率要比传统分离鉴定方法高 ,试验结果表明了 MG PCR试剂盒对 MG的检测不仅特异、敏感、快速 ,而且操作简便 ,适合在临床上推广应用。

美国FDA新批准医疗器械选介（2013年7月） therascreen EGFR RGQ PCR试剂盒

therascreen EGFR RGQ PCR试剂盒是一款自动分子化验产品，用于检测非小细胞肺癌中表皮生长因子受体基因的突变。在正常组织中，表皮生长因子受体蛋白质会向细胞传递信号，以调节细胞的生长与死亡。表皮生长因子受体基因发生突变将致使表皮生长因子受体蛋白质功能异常，并对非小细胞肺癌的癌细胞生长产生刺激作用。

新课标生物实验常规试剂盒介绍——普通PCR试剂盒

本试剂盒根据PCR反应原理，精确地提供PCR反应所需的全部试剂（包括Taq DNA聚合酶、缓冲液、MgCl2、dNTPs、引物Ⅰ、引物Ⅱ、

新课标生物实验常规试剂盒介绍——极速PCR试剂盒

本试剂盒根据PCR反应原理,精确提供PCR反应所需的全部试剂（包括TaqDNA聚合酶、PCR反应缓冲液、MgCl2、dNTPs、引物Ⅰ、引物Ⅱ、模板质粒）,整个反应过程只需要31rain。具有快速、高效、操作简单方便等优点。