甲基化特异性PCR过程中的影响因素分析

DNA甲基化是表观遗传学的重要研究内容之一。它是指在DNA甲基转移酶的作用下，将甲基添加在DNA分子中的碱基上,常见的DNA甲基化发生在DNA链上的胞嘧啶第五位碳原子和甲基闯的共价结合，即形成5甲基胞嘧啶（5mC），哺乳动物基因组中约70％的5mC存在于CpG二联核苷。DNA甲基化影响着基因的转录表达．因此它在基因的表达调控、细胞增殖、分化发育等方面起着重要作用，

利用自制纸质教具促学生掌握PCR反应过程

多聚酶链式反应(PCR)实验是分子水平的实验。对于高中生而言,学习PCR过程需要具备一定的生物学基础和空间想像能力,这给学生的学习带来了一定的困难。为此,可利用纸片、纸条等材料借助魔术表演的方式展示PCR反应过程,从而让学生在魔术表演的游戏操作中轻松掌握PCR反应过程。

用M13噬菌体作探针进行人的DNA限制性片段长度多态性分析

用M13噬菌体作为探针,可以检测人和动物基因组DNA中高度可变的小卫星区域,其有效顺序是该噬菌体基因Ⅲ中的两组15bp的串联重复。本文介绍的是采用随机引物与PCR过程相结合的方法标记M13噬菌体,得到高比活性的探针,与经HinfⅠ消化的人DNA杂交,产生具有高度多态性的DNA图谱,并与33.15探针杂交的DNA图谱进行了比较,证明M13噬菌体是进行DNA多态性分析的一种非常有用的探针。

单基因遗传性疾病的胚胎种植前遗传学诊断

因在绝大多数的单基因遗传性疾病(SGD)中基因突变是异质性的,所以对大多数SGD病例行胚胎种植前遗传学诊断(SGD-PGD)时都需个别设计。为此,设计就成为SGD-PGD的重要一环。由于SGD的遗传模式(常染色体显性和隐性,性染色体连锁显性和隐性)和突变种类(点突变,大小片段插入和丢失,重复顺序数超常等)不同,应有相应的不同设计技巧和策略。笔者通过设计实例,向读者介绍了不同的设计技巧和策略。现今SGD-PGD的最基本实验室操作还是用聚合酶链反应(PCR)把单细胞(卵裂细胞)靶DNA片段扩增,然后诊断扩增后所得片段。设计最重要的一步就是对PCR所用引物的设计。设计还应包括单细胞PCR的特殊操作规定,DNA限制性内切酶酶切点设计(因在点突变时,常需用限制性酶内切后片段长度多态性分析方法作诊断)做诊断结果分析预估,确定最后一轮PCR的两个引物之一为荧光标记引物。成功的SGD-PGD工作需要有权威性的领导核心组织,协调,对团队的统管和支持,这也是成批地开展SGD-PGD的先决条件。而且,只有在遗传流行病学工作者、各医院儿科、各专门疾病研究所和分子生物学基因诊断科室的密切配合下,才能对多种SGD全面开展SGD-PGD。

实时荧光定量PCR检测技术及其在病原微生物检测中的应用

实时荧光定量PCR（Real-time PCR,RT-PCR）技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出,通过对PCR过程的实时监控,可专一、灵敏、快速、可重复地精确定量起始模板浓度,真正实现了PCR从定性到定量的飞跃。该技术拥有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点,已成为了分子生物学研究的重要工具。本文对RTPCR技术的原理、检测方法、定量方法及其应用进行了综述。

叠加通气模式联合心肺复苏机对心肺脑复苏的影响

心搏骤停（cardiac arrest，CA）是严重的心脏急症，无论心源性还是非心源性，病死率都极高。如何在心肺脑复苏（cardiopulmonary-cerebral resuscitation，CPCR）救治过程中提高成功率，成为当今急救医学研究的热点。本研究在CPCR过程中应用Thumper1007型心肺复苏机（美国密执安仪器公司生产）和PB760型呼吸机（美国PB公司生产）采用叠加通气模式和Thumper心肺复苏机联用，并与VCV通气模式和徒手标准复苏进行分析比较，现报道如下。