PCR-流式荧光杂交技术在地中海贫血产前基因诊断中的应用价值

目的:探讨PCR-流式荧光杂交技术在地中海贫血产前基因诊断中的临床价值。方法:选取2016年1月-2019年8月在中山大学附属第一医院进行常规产前检查或优生遗传咨询的孕妇及其配偶1 001例,受检夫妻双方均为地中海贫血基因携带者,适时抽取羊水等样本,提取基因组DNA,采用PCR-流式荧光杂交技术和传统多重Gap-PCR和PCR-RDB技术对样本进行α和β-地中海贫血基因平行检测,分析基因诊断结果,评估两者在地中海贫血基因诊断中的一致性。结果:2种方法均检出正常基因型389 (占38.86%,389/1001)例,异常基因型59种,共612 (占61.14%,612/1001)例,包括α-地中海贫血416例、β-地中海贫血162例和αβ-复合地中海贫血34例。α-地中海贫血基因型主要为--SEA、-α3.7和-α4.2;β-地中海贫血中检出Cd41-42突变频率最高,其次是IVS-Ⅱ-654和CD17。检出罕见型HKαα/--SEA1例。与Gap-PCR和PCR-RDB技术相比,PCR-流式荧光杂交法的灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值和总符合率均为100%,这2种检测方法结果一致性很好。结论:PCR-流式荧光杂交技术操作简便快速,与传统技术联合平行检测有助于提高地中海贫血孕妇产前诊断的准确性。

PCR-流式荧光杂交技术在地中海贫血基因诊断中的应用

目的探讨PCR-流式荧光杂交技术在地中海贫血基因诊断中的诊断效能。方法采用PCR-流式荧光杂交技术对381例疑似地贫患者标本进行α和β-地贫基因检测,同时以常用的多重Gap-PCR和PCR-RDB为对比方法,比较两者在地贫基因诊断中的结果是否一致。结果采用PCR-流式荧光杂交法对381例疑似地贫样本进行检测,检出地贫165例,检出率为43.31%,包括α-地贫115例、β-地贫43例和αβ-复合地贫7例。α-地贫中检出的基因型主要为--^(SEA)、-α^(3.7)和-α^(4.2);β-地贫中检出CD41-42突变频率最高,其次是IVS-II-654与CD17。PCR-流式荧光杂交法与Gap-PCR技术和PCR-RDB技术相比较,其灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值和总符合率均为100%。两种方法检测结果一致性很好。结论 PCR-流式荧光杂交技术操作简便快速、结果可靠,适合于地中海贫血的基因诊断。

PCR-流式荧光杂交用于8005例地中海贫血产前基因诊断的回顾性分析

目的评价PCR-流式荧光杂交技术在地中海贫血产前基因诊断中的诊断效能。方法回顾性分析2017年9月至2020年12月间于广东省妇幼保健院进行地中海贫血产前基因诊断的8005份胎儿的样本,所有样本均经多重缺口-PCR、PCR-反向斑点杂交法、Sanger测序和多重连接依赖性探针扩增等方法确诊基因型,同时应用PCR-流式荧光杂交技术作为地中海贫血常见突变位点的验证平台进行平行检测。分析基因检测结果,并比较PCR-流式荧光杂交技术与传统方法对于地中海贫血常见突变位点的检测结果的诊断效能差异。结果传统方法共检出地中海贫血阴性样本1939份,阳性样本6066份,其中包括α-地中海贫血4513份、β-地中海贫血1475份以及αβ-地中海贫血78份。经软件首次判读,PCR-流式荧光杂交方法共判读成功7845份,与传统方法比较,其敏感度、特异度和准确度均为100%。首次判读失败的160份样本经复检或人工复核数据后均可成功正确判读。结论PCR-流式荧光杂交方法与传统方法对于地中海贫血产前基因诊断中常见突变位点的诊断效能无差异。

PCR-荧光法与PCR-膜杂交法在检测HPV-DNA中的比较分析

分析PCR-荧光法与PCR-膜杂交法在检测HPV-DNA中的比较。方法 选取HPV-DNA检测的女性患者114例,时间为2020年7月-2022年7月。所有患者在明确细胞学诊断的基础上,分别采用PCR-荧光法和PCR膜杂交法检测HPV-DNA,比较各组HPV-DNA阳性率。结果 细胞学诊断结果显示,所选114例患者中,85例细胞正常,29例细胞异常。其中15例为ASC-H,12例为低级别鳞状上皮增生,1例为 HSIL,1例为 HSIL。、SCC(宫颈鳞癌)1例。HPV-DNA检测结果显示,细胞正常组与细胞异常组相比,用PCR-荧光染色及PCR-膜杂交方法对大肠癌的检出率,经统计学处理,均有统计学意义, P<0.05。PCR-荧光和PCR-膜杂交分别为12.94%和28.24%,二者相比,有显著差异,P<0.05。细胞异常组中,PCR-荧光和PCR-膜杂交分别为93。10%和96 5%,P>0.05。结论 在HPV-DNA检测当中,PCR核酸扩增检测技术的灵敏度、特异度都比较高。其中PCR-荧光法在临床筛查诊疗当中应用价值更高,PCR-膜杂交法在非高危性HPV检测及科研方面优势更明显。临床上对于HPV诊断可采取细胞学检查与HPV-DNA检测联合应用的方法,可以使准确性大大提高,为临床提供充分依据。

流式荧光杂交法检测高危型人乳头瘤病毒的临床价值

目的:探索流式荧光杂交法检测高危型人乳头瘤病毒的临床价值。方法:收集山西省子宫颈癌高发区妇女的宫颈脱落细胞样本638例,应用流式荧光杂交法和第二代杂交捕获实验(Hybrid Capture(2 Assay,hc2)进行检测分型,根据病理诊断对检测结果进行评价,对该人群中高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)的感染情况和型别分布进行统计学分析,并对这2种方法作一致性检验。结果:流式荧光杂交法检测的灵敏度、特异度、准确度分别为77.78%、93.59%和92.42%,阴、阳性预测值分别为98.13%和49.30%。该人群中高危型HPV的感染率为11.7%,非瘤样病变和子宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)1级(CIN1)中,HPV16和HPV52型为主要感染型别;子宫颈上皮内瘤变2级(CIN2)中,HPV16和HPV58型较为常见;子宫颈上皮内瘤变3级(CIN3)和子宫颈癌以HPV16型感染为主;HPV16、52、58型的感染率与病变进展呈正相关(P<0.01)。将流式荧光杂交法与hc2的检测结果作一致性检验:Κ=0.60。结论:流式荧光杂交法检测高危型HPV的特异度很高,灵敏度达77.78%,与hc2相比,两者的一致性较好;但还需进一步改进方法以提高检测的灵敏度,增加可分型的HPV亚型数。

流式荧光杂交法检测高危型人乳头瘤病毒的临床验证试验

目的评估流式荧光杂交法检测高危型人乳头瘤病毒(HPV)的临床应用价值。方法随机选择1061名年龄在21～65岁间的妇女,采用流式荧光杂交法和第二代杂交捕获实验(hc2)检测其子宫颈脱落细胞,以病理诊断作为金标准对检测结果进行分析和评价,并对二者的检测结果作一致性检验。结果流式荧光杂交法检测的灵敏度和特异度分别为80.31%和85.83%。阳、阴性预测值分别为44.5%和96.9%。与hc2检测一致性检验结果显示Kappa=0.58。结论流式荧光杂交法检测高危型HPV的特异度与hc2相似,灵敏度低于hc2,但两者检测的一致性较好。

流式荧光杂交法检测人乳头瘤病毒基因型的临床应用

目的探讨流式荧光杂交法检测人乳头瘤病毒(HPV)基因型的应用价值。方法 266例有不同程度宫颈疾病的患者宫颈脱落细胞标本,用流式荧光杂交技术检测HPV基因型7种低危亚型、19种高危亚型,观察各年龄段感染情况;并对其中40例标本用流式荧光杂交法与荧光定量PCR法平行检测。结果流式荧光杂交法共检出HPV阳性96例,总检出率为36.1%,其中单一基因型别阳性率为26.3%(70/266),多重基因型别阳性率为9.8%(26/266);26例多重基因型别阳性患者中,二重感染20例(7.5%),三重感染6例(2.3%)。26种HPV亚型共检测出13种,分别为HPV 6、11、16、18、33、31、45、52、53、58、61/73、82,常见基因型别为HPV6、11、16、18、33、52、58。年龄在21到30岁之间的患者低危型的感染率较高,达26.0%,年龄在31到40岁之间的患者高危型的感染率高于低危型;感染的高峰年龄在21～30岁,占52.1%,31～40岁占26.0%。两种方法低危组与高危组的阳性检出率经χ2检验,P均>0.05,差异无统计学意义。结论流式荧光杂交法是临床HPV感染分型检测的有效方法。

荧光原位杂交技术和流式细胞仪在菌斑中致龋性变形链球菌定量检测中的应用

目的：建立快速定量检测菌斑中主要致龋菌变形链球菌的方法，为龋齿活跃性评估提供参考数据。方法：收集无龋（caries free，CF）和高龋（caries susceptible，CS）儿童牙菌斑各15例，将不同荧光素标记的寡核苷酸探针：细菌通用探针和变形链球菌特异性探针进行荧光原位杂交，结合流式细胞仪检测菌斑中变形链球菌所占的比例。结果：在无龋儿童菌斑中，变形链球菌在总菌中所占比例数是1．24％～3．4％（2．25±0．71），而在高龋儿童菌斑中比例为5．04％-9．7％（7．37±1．34），两组比较有着明显的统计学差异（P〈0．01）。结论：流式细胞仪结合荧光原位杂交技术，可作为一种细菌定量检测方法应用于致龋性变形链球菌的定量分析中。

流式荧光杂交技术和导流杂交基因芯片技术在HPV分型检测中的应用评价

目的对检测人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染分型的流式荧光杂交技术(flexible multi-analyte profiling,xMAP)和导流杂交基因芯片技术(flow-through hybridization and gene chip,HybriMax)进行评估。方法参照美国临床和实验室标准化协会(CLSI)EP12-A2文件推荐方法,通过比较2种检测试剂的C50值,判断其检测灵敏度差异;用xMAP技术检测751例宫颈病变妇女的宫颈脱落细胞标本,判断其临床符合率;用xMAP和HybriMax同时检测535份液基薄层细胞学检测(thinprep cytologic test,TCT)异常标本,比较两种方法检测高危亚型HPV(HR-HPV)结果的一致性。结果 xMAP技术检测HPV的C50小于HybriMax技术C50。HPV感染率随亚临床HPV感染(SPI)、子宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ、CINⅡ、CINⅢ的变化而升高,其差异有统计学意义(χ2=143.15,P<0.01)。两种试剂检测标本HR-HPV结果的kappa值为0.76;两者检出的13种HR-HPV的构成比差异无统计学意义(P均>0.05)。结论 xMAP技术和HybriMax技术检测HPV结果一致性较好,xMAP技术灵敏度更高,操作更快速方便,适用于HPV感染普查和宫颈疾病高危人群的监控。

用流式荧光杂交技术调查浙江义乌妇女HPV感染及分型

目的了解义乌妇女的人乳头瘤病毒(HPV)感染及分型情况。方法收集4 178例HPV体检妇女宫颈脱落细胞标本,用流式荧光杂交法(液相芯片技术)检测HPV基因型7种低危型、19种高危型。结果 4 178例妇女中有765例阳性,总检出率为18.31%,其中单一基因型检出率为15.53%,二重感染率为2.28%,三重感染率为0.31%,四重感染率为0.19%。HPV亚型共检测出21种,分别是6、11、40、61、16、18、26、31、33、38、39、45、51、52、53、56、58、59、68、82、83型;常见的基因型分别为6、11、16、18、33、52、58等亚型。18～30岁组感染较集中的有6、11、16、33、52、58等基因型,31～40岁组较集中的有16、18、39、52、58等,41～50岁组较集中的有16、18、33、52、58等;低危型感染在18～30岁组检出率相对较高,16、52、58型在18～50岁组阳性率均较高;18型在31～40、41～50岁2组阳性率较高,与18～30岁组比较,P均<0.05。HPV 18、11、6型在本地与外地人口的感染率存在显著差异,P<0.01,HPV 18型本地人口高,而HPV 11、6型外地人口高。结论义乌妇女的HPV感染受经商流动人口的影响,基因型分布较广。

流式荧光杂交法检测26种HPV亚型在不同程度宫颈病变中的分布规律

目的分析不同程度宫颈病变患者中人乳头瘤病毒(HPV)感染亚型的分布规律,探讨HPV分型检测对宫颈癌防治的价值。方法对403例阴道镜活检病理诊断为不同宫颈病变的患者,用流式荧光杂交技术进行HPV分型检测。结果 403例标本中共检出20种亚型,高危亚型检出率为94.9%(451/475),低危亚型检出率为5.1%(24/475)。检出频率前6位亚型为:HPV 52、16、58、33、18和39型。HPV 16型在宫颈癌中检出率高达94.7%,且随宫颈病变级别加重感染率呈上升趋势(P<0.01)。HPV 52型总检出率最高,但检出率随宫颈病变严重程度的升高而降低(P<0.01)。结论广州地区宫颈病变常见的HPV感染亚型是HPV 52、16、58、33、18和39型。HPV分型与宫颈病变程度密切相关。

流式荧光杂交法检测人乳头瘤病毒的临床应用

目的探讨流式荧光杂交法检测人乳头瘤病毒(HPV)的临床应用价值。方法采集苏州地区1 406例妇科就诊患者宫颈脱落细胞,用流式荧光杂交技术检测HPV基因型,并对HPV感染率、基因亚型和年龄分布等进行分析。结果检出HPV感染576例(40.97%),其中单一亚型感染392例(27.88%),多重亚型感染184例(13.09%);采用流式荧光杂交法可同时检测26种HPV基因亚型,最常见的亚型为HPV-6、11、16、52、58等;单纯HPV低危亚型感染117例,占阳性病例的20.31%,高危亚型感染365例(63.37%);50～59岁年龄组HPV感染率最高(52.24%),30～39岁年龄组感染率最低(34.02%);并且,随年龄增加低危亚型感染率逐步降低,高危亚型感染率却呈明显上升趋势。结论本地区妇科患者中HPV感染率较高,流式荧光杂交法是检测HPV感染的有效方法,开展HPV分型检测对宫颈病变的防治意义重大。

PCR-荧光探针杂交技术诊断肺结核的价值及卫生经济学评价

目的 探讨PCR -荧光双标记探针杂交定量结核杆菌技术对肺结核的诊断价值并进行卫生经济学评价。方法 对 2 0 0 2年 5月至 2 0 0 2年 11月收治的 30 1例患者进行回顾性研究 ,将痰PCR-荧光探针杂交法与荧光抗酸染色涂片法进行比较 ,以综合临床资料最后确诊为诊断标准 ,计算两种方法的诊断效率及进行成本 -效果分析。结果 痰PCR -荧光探针法诊断肺结核的灵敏度为5 1.9% ,涂片法 1次、3次、6次的灵敏度分别为 4 9.2 %、5 7.4 %、6 1.2 % ,经统计学分析 ,两种方法的检出率比较差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,进行成本 -效果分析 ,每检出 1例肺结核行 1次痰PCR -荧光探针法患者要花费 2 5 3.4 7元 ,行 1次涂片法要花费 5 0 .17元。结论 PCR -荧光探针杂交法与涂片法比较同样具有快速、有效等优点 ,但经济效率低于荧光涂片法 ,目前尚不能取代后者在诊断结核病中的传统地位。

利用流式荧光原位杂交法测定细胞端粒长度

目的建立利用流式荧光原位杂交法检测细胞端粒长度的技术方法。方法以端粒酶敲除的G3小鼠和同龄野生型小鼠为检测对象,分离其外周血中的单个核细胞后与肽核酸荧光探针杂交,用流式细胞仪采集和分析其端粒长度,分别用荧光原位杂交方法和SYBR Green荧光定量PCR方法验证其准确性。结果流式荧光原位杂交法测定G3小鼠细胞端粒相对长度与C57BJ/6野生型小鼠相比为0.5345,荧光定量PCR测定端粒相对长度为0.5717,结果基本一致。结论流式细胞术与原位杂交方法结合起来检测细胞端粒的平均长度可靠易行,对单个核细胞端粒平均长度的检测有较高的实用性。

全自动图像细胞法、荧光原位杂交法、流式细胞仪对膀胱肿瘤的诊断和意义

目的探讨荧光原位杂交法(FISH)及全自动图像细胞法(ICM)对膀胱肿瘤的诊断价值。方法对20例非尿路上皮癌和40例膀胱肿瘤患者的尿液采用全自动图像细胞法及FISH、进行尿细胞学检查。另对确诊的45例膀胱肿瘤患者肿瘤组织及10例排除膀胱肿瘤患者的正常膀胱黏膜,行流式细胞VEGF及VEGFR检测。结果 FISH的敏感性显著高于ICM的敏感性(P<0.05)和常规尿细胞学的敏感性(P<0.05),同时ICM敏感性也显著高于常规尿细胞学的敏感性(P<0.05);ICM、FISH和常规尿脱落细胞学检测的敏感性与患者病理分期无相关性(P>0.05),但与肿瘤病理分级显著相关(P<0.05)。结论 FISH对膀胱尿路上皮癌诊断的敏感性高于ICM和尿细胞学检查。VEGF、VEGFR定量分析可作为膀胱肿瘤的生物学行为评估方法之一。

流式荧光杂交法检测女性妇科门诊人群和体检人群的HPV基因型

目的 比较女性门诊人群和体检人群人乳头瘤病毒（HPV）感染情况及常见基因型的差异.方法 采用流式荧光杂交方法检测2098例门诊人群和同期2730例体检人群女性宫颈脱落细胞标本的HPV分型,分析两类人群的HPV感染率、感染类型、常见亚型以及不同年龄段HPV感染类型的差异.结果 门诊人群和体检人群总感染率为39.37％（826/2098）比17.36％ （474/2730）,其中单一亚型感染为29.79％比14.17％（高危亚型为25.83％比11.76％,低危亚型为3.96％比2.41％）,多重感染为9.58％比3.19％（两重感染占6.82％比2.67％,两重以上感染占2.76％比0.52％）.门诊人群常见的HPV亚型为HPV52 （22.03％）、16（19.37％）、58 （14.65％）、33（7.51％）、56（7.51％）、6（5.21％）、61（4.12％）,体检人群常见的HPV亚型为HPV52（20.46％）、58（15.40％）、61（9.70％）、39（8.02％）、16（7.38％）、68（6.96％）、44（5.27％）.门诊人群和体检人群之间,HPV阳性检出率的差异有统计学意义（x2=292.03,P＜0.01）,且门诊人群多重感染率高于体检人群（x2=6.244,P＜0.05）.两类人群单一亚型感染以31～50岁为主,多重感染以两重和三重感染为主,但门诊人群比体检人群的四重和五重感染多见;体检人群的两重感染率最高是＞40～50岁,而门诊人群的两重感染最高是31～40岁,门诊人群多重感染程度有随年龄增加而加重的趋势.结论 门诊人群的HPV感染率和多重感染率明显高于体检人群,体检人群HPV感染以52和58亚型为主,门诊人群以52、16和58亚型为主,本院女性门诊人群和体检人群HPV感染有一定的区域特征性.

荧光原位杂交-流式细胞术法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的建立并评价检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的荧光原位杂交-流式细胞术法。方法根据正交实验设计原则,分别对荧光原位杂交法的菌液浓度、探针浓度、杂交温度等实验条件进行优化,用流式细胞仪检测杂交后的荧光信号;检测结果与荧光实时PCR的结果进行比较。结果荧光原位杂交-流式细胞术法以每微升杂交缓冲液含细菌数40×105、探针4 ng以及杂交温度50℃时检测效果最佳;其检测敏感性为97.3%、特异性为100.0%,检测结果与荧光实时PCR法差异无统计学意义。结论荧光原位杂交-流式细胞术法检测MRSA的mecA基因,具有快速、准确的特点,可在临床实验室推广应用。

流式荧光杂交法检测咽喉部肿瘤样病变HPV亚型的意义

目的探讨咽喉部人乳头状瘤病毒(HPV)感染与良、恶性肿瘤样病变的关系。方法采取25例声带息肉、24例咽喉鳞状上皮乳头状瘤和19例喉鳞状细胞癌临床活检石蜡组织标本,用流式荧光杂交技术检测HPV基因型19种高危亚型和7种低危亚型的表达。结果 HPV感染率在声带息肉组为24%(6/25),咽喉乳头状瘤组为37.5%(9/24),喉鳞癌组为10.5%(2/19)。良性病例HPV亚型感染以HPV6和HPV11亚型为主,鳞癌病例仅为HPV16亚型。结论咽喉部肿瘤样病变的发生与HPV感染密切相关,部分良性病例伴有HPV16亚型感染,可以作为提示恶变倾向的指征。

PCR荧光法与PCR-反向点杂交法检验人乳头瘤病毒对比分析

目的将PCR荧光法和PCR-反向点杂交法用于人乳头瘤病毒检验中,分析其检验结果。方法2014年4月~2017年4月本院收治的100例宫颈炎或是疑似人乳头瘤病毒感染的患者归入笔者研究目标,对100例患者都进行CR荧光法检验和PCR-反向点杂交法检验,统计2种不同检验方法的阳性检出合计值及两者检验结果的符合总计值。结果 PCR-反向点杂交法检验的人乳头瘤病毒阳性检出合计值与PCR荧光法检验对比,差异有统计学意义(P<0.05),PCR荧光法检验结果和PCR-反向点杂交法检验结果对比,阴性符合总计值、阳性符合总计值、总符合总计值分别是70.00%、93.02%、94.00%。结论 PCR荧光法和PCR-反向点杂交法用于人乳头瘤病毒检验都具有良好效果,且PCR-反向点杂交法检验的阳性检出率更高一些。