PCR-毛细电泳片段分析法检测毛细支气管炎病原的临床价值探讨

目的探讨PCR-毛细电泳片段分析法(PCR-CEFA)检测毛细支气管炎病原的临床应用价值。方法选取2018年1至12月温州医科大学附属第二医院、育英儿童医院儿科收治的因毛细支气管炎住院的≤24个月且喘息次数≤2次的患儿932例,采集患儿鼻咽分泌物,采用PCR-CEFA检测呼吸道合胞病毒(RSV)、鼻病毒(RV)、流感病毒(Flu)、副流感病毒(HPIV)、腺病毒(ADV)等8种病毒核酸;直接免疫荧光法(DFA)检测RSV、HPIV、Flu、ADV抗原;并收集患儿性别、年龄、既往喘息史、湿疹史、哮喘家族史、家族过敏性疾病史、总IgE、血嗜酸性粒细胞计数(B-Eos)等资料。比较两种方法、不同年龄组患儿病毒检出率及RSV组与RV组患儿流行病学资料及实验室检查结果。结果PCR-CEFA病毒检出率为88.2%,高于DFA的33.6%,差异有统计学意义(P<0.01)。PCR-CEFA对RSV、HPIV、Flu、ADV的检出率均高于DFA,差异均有统计学意义(均P<0.01)。以DFA为参照,PCR-CEFA检测RSV、HPIV、Flu、ADV的特异度均达80%以上。≤12月龄患儿RSV检出率高于>12~24月龄患儿,RV、ADV、HBoV检出率均低于>12~24月龄患儿,差异均有统计学意义(均P<0.05)。RV组患儿年龄、B-Eos升高比例均明显高于RSV组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论与DFA比较,PCR-CEFA病毒检出率更高,病毒检测种类更多,具有良好的特异度,有利于早期明确毛细支气管炎病原。

荧光定量PCR分析法在结核病诊断中的应用

目的 探讨荧光定量PCR(FQ PCR)技术检测结核分枝杆菌的临床应用。方法 采用FQ PCR技术检测 14 5例标本 ,并与培养法、抗酸染色法和PCR 电泳法进行比较。结果 在 115例来自结核病人的高度怀疑有结核分枝杆菌的标本中 ,FQ PCR法检出阳性为 5 3例 ,其检出率高于PCR 电泳法检出率 ( 4 8/115 )、培养法检出率 ( 4 3 /115 )和抗酸染色法检出率 ( 3 1/115 ) ,3 0例非结核病病人标本 ,四种方法均未检出结核分枝杆菌。FQ PCR法的阳性检出最低值为 10 3 拷贝 /ml,PCR 电泳法为 10 4拷贝 /mL。结论 FQ PCR技术是高度灵敏、高度特异的快速定量检测结核分枝杆菌方法。

基于聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳法的博物馆展厅空气细菌群落动态监测

目的了解博物馆展厅内空气中细菌数量和种类的动态变化。方法于2015年6月至2017年5月连续24个月在博物馆同一展厅同一位置进行空气微生物采样,采用培养法对空气微生物菌落总数进行检测,并进一步采用聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳法(PCR-denaturing gradient gel electrophoresis,PCR-DGGE)对空气中细菌的组成种类进行分析。结果监测的两年间展厅空气中细菌数量有波动,菌落总数为78～616 CFU/m^3之间,主要种类有5～15种,种类变化存在季节性差异。马胃葡萄球菌(Staphylococcus equorum)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、溶血性葡萄球菌(Staphylococcus hominis)、假单胞菌属(Pseudomonas sp.)在24个月内均有检出,且未随季节和人员的不同而变化。结论持续两年的监测显示博物馆展厅空气中细菌在种类和数量上呈现季节性变化,但已在一定程度上形成稳态。

一个脊髓性肌萎缩症的家系报道

目的 对一个生育过脊髓性肌萎缩症患儿的家系进行产前诊断,同时对三种实验室检测技术进行方法学的比较。方法 应用荧光定量PCR、荧光PCR-毛细管电泳法及MLPA对家系外周血样本及绒毛组织、羊水组织进行了检测。同时进行了亲缘鉴定以排除母源污染。结果 第一胎患儿为SMN1基因7、8号外显子纯合缺失合并SMN2基因的3拷贝重复,患儿父亲为SMN1基因第7、8号外显子的杂合缺失携带者合并SMN2基因的3拷贝重复,患儿母亲为SMN1基因第7、8号外显子的杂合缺失携带者,SMN2基因2拷贝。本次妊娠胎儿为SMN1基因第7、8号外显子杂合缺失及SMN2基因3拷贝重复。结论 经检测胎儿仅为SMN1基因杂合缺失的携带者,可继续正常妊娠。同时,荧光PCR-毛细管电泳法和MLPA可同时对SMN1和SMN2基因拷贝数进行检测,检测较为全面,但荧光定量PCR检测操作方便,检测周期短,适合大样本人群的普筛。