PCR-荧光探针杂交技术诊断肺结核的价值及卫生经济学评价

目的 探讨PCR -荧光双标记探针杂交定量结核杆菌技术对肺结核的诊断价值并进行卫生经济学评价。方法 对 2 0 0 2年 5月至 2 0 0 2年 11月收治的 30 1例患者进行回顾性研究 ,将痰PCR-荧光探针杂交法与荧光抗酸染色涂片法进行比较 ,以综合临床资料最后确诊为诊断标准 ,计算两种方法的诊断效率及进行成本 -效果分析。结果 痰PCR -荧光探针法诊断肺结核的灵敏度为5 1.9% ,涂片法 1次、3次、6次的灵敏度分别为 4 9.2 %、5 7.4 %、6 1.2 % ,经统计学分析 ,两种方法的检出率比较差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,进行成本 -效果分析 ,每检出 1例肺结核行 1次痰PCR -荧光探针法患者要花费 2 5 3.4 7元 ,行 1次涂片法要花费 5 0 .17元。结论 PCR -荧光探针杂交法与涂片法比较同样具有快速、有效等优点 ,但经济效率低于荧光涂片法 ,目前尚不能取代后者在诊断结核病中的传统地位。

PCR-流式荧光杂交技术在地中海贫血产前基因诊断中的应用价值

目的:探讨PCR-流式荧光杂交技术在地中海贫血产前基因诊断中的临床价值。方法:选取2016年1月-2019年8月在中山大学附属第一医院进行常规产前检查或优生遗传咨询的孕妇及其配偶1 001例,受检夫妻双方均为地中海贫血基因携带者,适时抽取羊水等样本,提取基因组DNA,采用PCR-流式荧光杂交技术和传统多重Gap-PCR和PCR-RDB技术对样本进行α和β-地中海贫血基因平行检测,分析基因诊断结果,评估两者在地中海贫血基因诊断中的一致性。结果:2种方法均检出正常基因型389 (占38.86%,389/1001)例,异常基因型59种,共612 (占61.14%,612/1001)例,包括α-地中海贫血416例、β-地中海贫血162例和αβ-复合地中海贫血34例。α-地中海贫血基因型主要为--SEA、-α3.7和-α4.2;β-地中海贫血中检出Cd41-42突变频率最高,其次是IVS-Ⅱ-654和CD17。检出罕见型HKαα/--SEA1例。与Gap-PCR和PCR-RDB技术相比,PCR-流式荧光杂交法的灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值和总符合率均为100%,这2种检测方法结果一致性很好。结论:PCR-流式荧光杂交技术操作简便快速,与传统技术联合平行检测有助于提高地中海贫血孕妇产前诊断的准确性。

荧光标记探针原位杂交技术

荧光标记探针原位杂交技术钟梅，吕亚利，张杰，陈乐真（北京解放军总医院病理科．北京１００８５３）荧光标记原位杂交技术（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｓｉｔｕｈｙｂｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＦＩＳＨ），国外曾多用于染色体异常的研究，近年来开始应用于实体肿瘤基因分...

BALF Xpert MTB/RIF和PCR-反向斑点杂交技术在涂阴肺结核诊断中的价值

目的:对比支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)结核分枝杆菌(MTB)/利福平(RIF)耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF)和聚合酶链反应(PCR)-反向斑点杂交技术在涂阴肺结核诊断中的价值。方法:纳入2021年6月—2023年1月于江西省胸科医院接受治疗的肺结核患者共200例,所有患者均留取BALF送检,进行Xpert MTB/RIF、PCR-反向斑点杂交技术检测。以病理检查结果为金标准,统计确诊涂阴肺结核的占比情况,并计算Xpert MTB/RIF与PCR-反向斑点杂交技术两种检测方法的阳性率、与金标准结果的一致性,并评估两种检测方法对涂阴肺结核的诊断价值。结果:Xpert MTB/RIF检测涂阴肺结核的阳性率(76.50%)与PCR-反向斑点杂交技术(69.50%)比较,差异无统计学意义(χ^(2)=2.486,P=0.115)。200例肺结核患者中确诊为涂阴肺结核有137例,占比68.50%;Xpert MTB/RIF的符合率(94.89%)高于PCR-反向斑点杂交技术(74.45%),差异有统计学意义(P<0.05)。Xpert MTB/RIF诊断涂阴肺结核的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确度均高于PCR-反向斑点杂交技术(P<0.05)。结论:Xpert MTB/RIF、PCR-反向斑点杂交技术均可用于涂阴肺结核诊断中,其中Xpert MTB/RIF的诊断价值更高,可辅助临床早期诊断筛查。

应用双色荧光原位杂交技术检测克氏综合征

探讨用双色荧光原位杂交技术(dual colorfluorescenceinsituhybridization,D FISH)检测性染色体数目异常克氏综合征的应用价值,建立常规分裂期染色体和间期细胞FISH技术的实验方法。以Biotin标记的X染色体α 卫星DNA(pBamX7)探针和以Digoxigenin标记的Y染色体长臂末端重复序列(pY3.4)探针对19例克氏综合征标本同时进行外周血染色体及其间期细胞核的原位杂交,分别用Avidin FITC和Rhodamine FITC及其Anti avidin进行信号的检测与放大,DAPI复染。于OlympusAX 70型荧光显微镜下,分别通过WIB、WIG及其WU滤光镜观察杂交信号及其染色体或间期核背景,并统计外周血中期染色体及其间期细胞核的杂交信号颗粒数量。在显微镜下可见以Biotin标记的pBamX7探针显示2个绿色杂交信号,以Digoxigenin标记的pY3.4探针显示1个红色杂交信号,染色体或间期核背景经DAPI复染显示蓝色;18例出现XXY杂交信号的细胞,染色体及其间期细胞核杂交平均出现率分别为95.89%和95%,明显大于正常对照标准值2.75%,证实核型为47,XXY,与染色体检测的结果一致;其余1例染色体核型检测为嵌合体,XXY杂交信号细胞出现率为92%,同时检出6.7%的XY杂交信号细胞(>正常对照标准值4.17%)。用FISH技术检测性染色体数目异常克氏综合征具有快速、敏感度高、信号强、

荧光原位杂交(FISH)技术在厌氧颗粒污泥研究中的应用

本文介绍了荧光原位杂交(FISH)技术的基本原理和操作步骤,重点介绍和讨论了FISH技术在厌氧颗粒污泥研究中的应用现状,并对该技术在国内的应用前景进行了展望。

荧光原位杂交技术及其研究现状

从荧光原位杂交探针的类型、探针的标记方法、探针和染色体的杂交、染色体显带、荧光显微镜检测等方面介绍了荧光原位杂交技术,并对荧光原位杂交技术目前的发展状况进行了阐述。

荧光原位杂交技术快速检测产甲烷菌的变化

针对油藏中的产甲烷菌检测繁琐、费时的问题，研究荧光原位杂交技术检测产甲烷菌，并结合产甲烷菌数量、低分子有机酸和甲烷气体体积分数的变化，分析模拟油藏条件下微生物驱油过程中产甲烷菌的变化规律。在模拟油藏条件下，培养30d后，产甲烷菌的数量逐渐升高；培养50d后，总菌数增加；前期由其他微生物代谢产生的乙酸等产物作为产甲烷菌所需的代谢底物被消耗，随着培养时间的延长，产甲烷菌的生长代谢又促进了其他微生物的生长。应用荧光原位杂交技术可将检测时间缩短到1d以内，快速、准确地检测模拟油藏条件下产甲烷菌的变化，为明确各种微生物的生长代谢对驱油效果的贡献提供依据。

应用双色荧光原位杂交技术检测一例49,XXXXY性染色体异常

目的:探讨用双色荧光原位杂交技术(dual-color fluorescence in situ hybridization,D-FISH)检测性染色体数目异常的实验方法及其应用价值。方法:以Biotin标记的X染色体α-卫星DNA(pBamX7)探针和以Digoxigenin标记的Y染色体长臂末端重复顺序(pY3.4)探针与经处理的标本同时进行外周血染色体及间期细胞核的原位杂交,分别用Avidin-FITC和Rhodamine-FITC及其Anti-avidin进行信号的检测与放大,DAPI复染。于Olympus AX-70型荧光显微镜下,分别通过WIB、WIG及其WU滤光镜观察杂交信号及其染色体或间期核背景,并统计外周血中期染色体和间期细胞核的杂交信号颗粒数。结果:在显微镜下可见以Biotin标记的pBamX7探针显示4个绿色杂交信号,以Digoxigenin标记的pY3.4探针显示1个红色杂交信号,染色体或细胞质背景经DAPI复染显示兰色;统计350个中期染色体和间期细胞核,X染色体杂交信号阳性率分别为91.43％和92.57％;Y染色体杂交信号阳性率分别为99.5％和99.8％。结论:双色荧光原位杂交技术是检测49,XXXXY性染色体异常以及其他性染色体数目异常患者的一种十分有价值的技术,具有高效、灵敏、可靠等特点,可为临床提供良好的辅助诊断。

荧光原位杂交技术的发展与应用

本文主要介绍了荧光原位杂交技术的建立及其发展过程。

ES探针荧光原位杂交法检测bcr/abl融合基因

目的探讨应用ES型bcr/abl探针(双色单融合)荧光原位杂交技术(FISH)在检测bcr/abl融合基因中的价值。方法慢性髓细胞性白血病(CML)初诊或复诊患者30例(骨髓标本43份),行普通染色体核型分析和ES型bcr/abl探针荧光原位杂交分析。结果 43份骨髓标本,6份未做骨髓培养,6份培养失败,在其余31份培养成功的标本中,找到Ph1染色体9份,另有1份标本多次检查都发现存在21p+染色体异常;43份骨髓都经FISH检测,13份标本发现bcr/abl融合基因。结论 ES型bcr/abl探针对CML初诊病例的bcr/abl融合基因有较高的检出率;对复发病例,不仅能辅助诊断CML,而且在监测白血病微小残留病灶、判断疾病的进展上均有较高的灵敏度。

荧光原位杂交在麦类作物育种中的应用研究进展

综述了荧光原位杂交技术 (florescenceinsituhybridization ,FISH)主要特点及其在麦类作物育种中的应用现状 ,包括异源染色体和染色体片段的鉴定 ,染色体物理图谱构建及麦类作物基因组进化和亲缘关系方面的应用 。

抗酸染色法、PCR-反向点杂交法和PCR-荧光探针法在结核分枝杆菌诊断中的研究

目的:比较抗酸染色法、PCR-反向点杂交法和PCR-荧光探针法在诊断结核分枝杆菌感染中的价值。方法:选取解放军总医院第八医学中心2024年1月-2024年4月80例疑似结核的样本,其中包括疑似肺结核及疑似肺外结核。80例样本在制成石蜡样本后同时采用抗酸染色法、PCR-反向点杂交法和PCR-荧光探针法进行结核分枝杆菌的检测。结果:PCR-反向点杂交法检出率63.6%,PCR-荧光探针法检出率59.1%,抗酸染色检出率25.0%,PCR-反向点杂交法和PCR-荧光探针法检出率均高于抗酸染色法,且P<0.05;PCR-反向点杂交法和PCR-荧光探针法的阳性检出率基本一致。抗酸染色法具备检测成本低,实验时间短的特点,但仅仅根据形态学无法明确判断是否为结核分枝杆菌感染;PCR-反向点杂交法检测成本高于抗酸染色法,实验时间长于抗酸染色法和PCR-荧光探针法;PCR-荧光探针法检测成本适中,但相较于PCR-反向点杂交法检测时间更短。结论:PCR-荧光探针法检出率高,操作快速,简单,费用适中,对于样本量较多的医院具有良好的临床应用价值。

PCR-流式荧光杂交技术在地中海贫血基因诊断中的应用

目的探讨PCR-流式荧光杂交技术在地中海贫血基因诊断中的诊断效能。方法采用PCR-流式荧光杂交技术对381例疑似地贫患者标本进行α和β-地贫基因检测,同时以常用的多重Gap-PCR和PCR-RDB为对比方法,比较两者在地贫基因诊断中的结果是否一致。结果采用PCR-流式荧光杂交法对381例疑似地贫样本进行检测,检出地贫165例,检出率为43.31%,包括α-地贫115例、β-地贫43例和αβ-复合地贫7例。α-地贫中检出的基因型主要为--^(SEA)、-α^(3.7)和-α^(4.2);β-地贫中检出CD41-42突变频率最高,其次是IVS-II-654与CD17。PCR-流式荧光杂交法与Gap-PCR技术和PCR-RDB技术相比较,其灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值和总符合率均为100%。两种方法检测结果一致性很好。结论 PCR-流式荧光杂交技术操作简便快速、结果可靠,适合于地中海贫血的基因诊断。