水稻Wx基因PCR-AccⅠ标记与稻米AC的关系及其辅助育种效果

利用PCR-AccⅠ分子标记分析了105个水稻品种的Wx基因型,结果表明,用该标记检测的Wx基因型与该品种的稻米直链淀粉含量有较好的对应关系,利用PCR-AccⅠ标记可以鉴别籼稻品种直链淀粉含量的高或低;同时,对2个杂交组合F2分离群体的分析表明,PCR-AccI标记与稻米直链淀粉含量是紧密连锁、共分离的.另一方面,以直链淀粉含量中等的优质籼稻保持系D香1B为优质Wx基因供体,运用PCR-AccⅠ分子标记辅助选择,对综合性状优良、配合力高,但直链淀粉含量过高、品质欠佳的籼稻保持系G46B进行品质改良,结果在BC3F2代成功获得了直链淀粉含量中等的纯合TT基因型目标植株,表明PCR-AccⅠ标记用于优质Wx基因的分子标记辅助选择育种是有效的,因而该标记对改良稻米品质有重要作用.

同源四倍体与二倍体水稻Wx基因位点的遗传差异

测定了中国科学院成都生物所培育出的14种同源四倍体水稻及8种大面积推广的二倍体水稻的直链淀粉含量,并利用微卫星标记484/485,Wxup2/485及PCR-AccⅠ分子标记对同源四倍体及二倍体水稻进行扩增.发现直链淀粉含量发生变化的部分同源四倍体水稻Wx基因位点发生变异,表明微卫星标记与同源四倍体水稻直链淀粉含量之间存在相关性,并初步探讨了同源四倍体水稻Wx基因位点遗传变异的原因.

利用分子标记鉴定水稻品种的Wx等位基因及其与直链淀粉含量的关系

应用Wx基因的微卫星标记4 84 4 85和PCR- AccⅠ分子标记对93份籼、粳水稻品种(系)的Wx基因的多态性进行了研究,并探讨了不同基因型与直链淀粉含量的关系。4 84 4 85扩增结果表明,该微卫星标记表现为3种基因型,即Wx1 Wx1 、Wx2 Wx2 和Wx3Wx3,其中籼稻以Wx1 Wx1 和Wx3Wx3为主,粳稻以Wx2 Wx2 为主,具有Wx1 Wx1 和Wx2 Wx2 的品种(系)直链淀粉含量低,具有Wx3Wx3的品种(系)直链淀粉含量高。PCR- AccⅠ分子标记检测到两种基因型,即GG和TT型,其中GG型水稻品种的直链淀粉含量较高,TT型水稻品种的直链淀粉含量较低。两种分子标记检测结合分析,具有Wx2 Wx2 的品种(系)为TT型,Wx3Wx3的品种(系)为GG型;Wx1 Wx1 的品种(系)既有TT型又有GG型,但GG型品种的直链淀粉含量显著高于TT型品种。统计分析表明,利用微卫星标记和PCR AccⅠ分子标记检测93个水稻品种(系)中Wx基因与直链淀粉含量的相关系数分别为0 .86 7 和0 .881 ,Wx基因的遗传变异可解释这些品种(系)直链淀粉含量变异的75 %以上;因此,在水稻育种中,利用上述分子标记对辅助选择改良稻米的直链淀粉含量,提高育种效率具有重要意义。

分子标记辅助改良杂交稻协优57及其父母本的蒸煮食味品质

协优57是一个产量高和适应性强的杂交中籼组合,但由于其父母本直链淀粉含量(AC)高,导致杂交稻米的AC较高、蒸煮食味品质较差。先前利用PCR-AccⅠ分子标记辅助选择对协优57的亲本057[恢复系,记作057(GG)]和协青早A[不育系,记作协A(GG)]的W x基因进行改良。利用改良前、后的各亲本分别配组,分析不同组合的AC、食味品质和颗粒性淀粉结合酶(GBSS)活性。结果表明,改良单亲的GT型组合协A(GG)×057(TT)、协A(TT)×057(GG)杂交稻米的AC由原组合协A(GG)×057(GG)的28%分别降到19.9%和19.3%,但均一性较差。改良双亲的TT纯合型组合协A(TT)×057(TT)的杂交稻米,不仅AC降到中等偏低水平(13.1%),而且AC的均一性也有了很大的提高,蒸煮食味品质明显改善。GBSS活性分析表明:三种W x基因型的GBSS活性总体表现为GG>GT>TT。

用于筛选直链淀粉含量为中等的籼稻品种的分子标记

用PCR AccⅠ分子标记检测方法 ,检测了来自不同地区的 6 3个栽培水稻品种 (系 )蜡质基因第 1内含子剪接供体 +1位碱基是G或是T。另外 ,还测定了这些水稻成熟种子的直链淀粉含量。结果显示该位置是G碱基的水稻品系成熟种子中直链淀粉含量均高于 2 0 % ,该位置是T的均低于 18%。在杂交育种过程中 ,这一分子标记可用于预测水稻植株种子的直链淀粉含量。对高直链淀粉含量的水稻亲本与中等直链淀粉含量的水稻亲本之间 5个籼型杂交组合F2 群体的分析表明 ,蜡质基因第 1内含子 +1位碱基是G或是T与水稻种子中直链淀粉含量的高或低是紧密连锁 ,共同分离的。这些结果表明PCR

香蕉ACC合成酶cDNA的PCR扩增及序列测定

从香蕉果实中提取总RNA，经反转录成cDNA第一链，根据已知植物ACC合成酶的cDNA及其所编码的氨基酸序列合成引物，经PCR扩增香蕉cDNA得到一长约1．1Kb的产物，对该序列测定结果表明，该cDNA所编码的氨基酸序列包括了ACC合成酶8个高度保守区中的7个，并且包括该酶的活性中心。

由ACC合成酶反义基因转化所得枣树其RNA表达量的测定

利用real timeRT PCR对转基因枣树中的anti ACSG的RNA表达量进行了定量测定.样品扩增产物荧光量随着扩增循环数的增加而呈现"S"形增加;经熔解曲线分析,其扩增产物中未检出非特异性产物和引物二聚体;扩增产物的CT值和模板cDNA起始浓度两者之间呈线性相关(R2=0.9929);转化体中anti ACSGRNA表达量约为4500～10300拷贝/g组织.

哈密瓜ACC氧化酶_cDNA克隆及其序列分析

以哈密瓜 (CucumismeloL .)成熟果实为材料 ,用改进的异硫氰酸胍一步法提取总RNA ,通过RT PCR方法和DNA序列测定证实获得了甜瓜ACC氧化酶 ( 1 aminocyclopropane 1 carboxylicacidoxidase ,ACO)多基因家族中一个与果实后熟有关的基因CM ACO1的cDNA克隆pCM ACO1,该cDNA全长 12 36bp ,编码区 95 7bp ,共编码 318个氨基酸残基。序列分析结果表明该序列与国外以罗马甜瓜为材料获得的相同基因的cDNA序列完全相符。推断该基因在甜瓜种内可能是完全或高度保守的 。

梨ACC氧化酶基因(ACO)的片段克隆及其RNAi载体构建

以若光梨成熟果实为材料,提取总RNA,在ACC氧化酶基因(ACO)cDNA序列同源性较高区域设计一对特异引物,利用RT-PCR克隆了ACC氧化酶(ACO)基因片段。将ACO反义基因、与副球菌中类胡罗卜素合成有关的间隔基因YYT和ACO正义基因3个片段串联在一起,经鉴定后,插入到植物表达载体中,构建成能够表达ACC氧化酶基因的双链RNA的植物载体pYF028,为耐贮砂梨的遗传转化创造条件。

强雌性系西瓜ACC合成酶基因的克隆及其序列分析

为了解ACC合成酶基因对西瓜花性型分化的作用机理,根据已报道的西瓜ACC合成酶(ACS)基因序列,设计特异性引物,以强雌性西瓜总RNA为模板,通过RT-PCR扩增得到4条特异性片段:Cit-ACS1为1 690 bp、Cit-ACS2为402 bp、Cit-ACS3为598 bp和Cit-ACS4为499 bp。序列同源性比对表明,该4个片段与已报道的西瓜ACC合成酶基因序列的同源性99.8%～100%。构建了西瓜ACC合成酶基因系统进化树,显示Cit-ACS1与甜瓜CMe-ACS2和黄瓜CS-ACS2亲缘关系最近;并对Cit-ACS1基因编码的蛋白进行了二级结构和三级结构分析。

牡丹ACC氧化酶基因cDNA克隆及全序列分析

以牡丹品种‘洛阳红’(Paeonia suffruticosa‘Luoyang Hong’)花瓣为材料,用CTAB法提取总RNA,根据已报道的ACC氧化酶(1-am inocyclopropane-1-carboxylic acid oxidase,ACO)保守氨基酸序列设计简并引物,通过RT-PCR扩增得到1条821bp的牡丹ACO基因同源片段。利用该已知中间序列,通过快速扩增cDNA末端技术(Race)及序列拼接,最终得到该基因cDNA全长序列,命名为Ps-ACO1,GenBank登录号为DQ337251。分析结果表明,Ps-ACO1 cDNA全长1221bp,包含一个939bp的开放读码框,5′非翻译区长65bp,3′非翻译区长217bp,编码产物为含有312个氨基酸残基的蛋白质。氨基酸序列与烟草、苹果、桃等植物的ACO同源性都达80%以上。

转基因河套蜜瓜新品系育种过程的方法及其生态适应性

1-氨基环丙烷-1-羧酸合成酶(ACS)是高等植物中乙烯合成的关键酶。以成熟河套蜜瓜果实的RNA为模板,经反转录和PCR扩增合成和克隆了河套蜜瓜ACS基因cDNA片断(627 bp),将ACS基因cDNA反向构建到植物表达载体pGA643,配制成DNA溶液后用花粉管通道法导入外源基因,对转基因河套蜜瓜的叶片用CTAB法提取总DNA,PCR扩增检测,结果表明某些果实的部分种子已整合外源基因。目前,该转基因新品系正在进行生态适应性研究及“环境释放”和“生产性试验”的安全性评价。

富有柿果ACC氧化酶cDNA的克隆及其序列分析

以富有柿果为材料,用RNA提取试剂盒提取总RNA,根据已报道的柿果ACC氧化酶(1-aminocyclopropane-l-carboxylic acid oxidase,ACO)基因的序列设计并合成1对引物,通过RT-PCR方法获得1条约1.2 kb特异片段,把该片段连接到pGEM-T easy vector上进行测序,其全长共1 237 bp,编码区697 bp,共编码231个氨基酸残基。序列分析结果表明,该序列与DK-ACO1的cDNA序列同源性达99%,氨基酸的同源性达98%。

奶牛ACC基因SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立

乙酰辅酶A羧化酶(ACC)在奶牛肝脏中脂肪酸的合成及氧化代谢过程中起着关键作用,ACC mRNA的表达水平对于研究奶牛酮病、脂肪肝等物质代谢障碍性疾病具有重要意义。研究采用双标准曲线法,成功建立了奶牛ACC基因荧光定量检测方法。结果表明,建立的SYBR Green I荧光定量PCR方法具有操作简便、特异性强、定量准确等优点,为进一步对ACC基因定量分析,研究其在奶牛酮病、脂肪肝等营养代谢性疾病中的作用奠定了基础。

康乃馨ACC氧化酶cDNA的克隆及其反义植物表达载体的构建

以康乃馨 (DianthuscaryophyllusL .)花瓣为材料 ,用改进的异硫氰酸胍一步法提取总RNA ,根据已报道的康乃馨ACC氧化酶 (1 aminocyclopropane 1 carboxylicacidoxidase ,ACO)基因的序列设计并合成一对引物 ,通过RT PCR方法获得一约 1 2kb特异片段 ,把该片段连接到pGEM(R) Teasyvector上进行测序 ,其全长共 115 6bp ,编码区 915bp ,共编码 30 4个氨基酸残基。序列分析结果表明该序列与GenBankL35 15 2中的康乃馨ACC氧化酶基因的cDNA序列完全相符 ,推断该基因在康乃馨种内可能是完全或高度保守的。随后将此片段反向插入植物表达载体pBI12 1的 35S启动子和NOS终止子之间 ,构建了一反义植物表达载体pBO ;又把花特异表达启动子PchsA插入pBI12 1的HindIII +Xbal位点构建中间载体pCHB ,再把康乃馨ACC氧化酶基因反向插入中间载体pCHB的XbaI +Sst1位点构建成另一反义植物表达载体pCBO。

康乃馨ACC氧化酶cDNA的克隆及其序列分析

以康乃馨(DianthuscaryophyllusL.)花瓣为材料,用改进的异硫氰酸胍一步法提取总RNA,根据已报道的康乃馨ACC氧化酶(1-aminocyclopropane-1-carboxylicacidoxidase,ACO)基因的序列设计并合成一对引物,通过RT-PCR方法获得一约1.2kb特异片段,把该片段连接到PGEM-Teasyvector上进行测序,其全长共1156bp,编码区915bp,共编码304个氨基酸残基。序列分析结果表明该序列与国外SavinKw报道的康乃馨ACC氧化酶基因的cDNA序列完全相符。推断该基因在康乃馨种内可能是完全或高度保守的。

伤处理和乙烯对桃ACC氧化酶基因表达的影响

桃果实不耐贮运，特别是溶质水蜜桃、珐I大11＿程技术的发展使番茄果实实现延熟保鲜'－'、人f［］也试图通过乙烯合成的关键酶的］i义HNA技术来延长桃果实的贮运期。：ICC氧化酶是乙烯生物合成的关键酶之一，ACC氧化酶4peJL从番茄'、矮牵牛。。。桃卜'、苹果、'等许多植物...

辣椒ACC氧化酶基因部分序列的分离与鉴定(英文)

乙烯作为一种植物激素,在植物生长发育过程中发挥着重要的作用。1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)氧化酶(ACO)是乙烯生物合成途径中的一种关键酶。本研究以辣椒为研究材料,根据报道的辣椒ACC氧化酶基因序列(AJ011109)设计引物,利用PCR的方法从中国种湘研4号基因组获得长度为354bp的gDNA序列和213bp的cDNA序列。利用生物信息学软件对所获得的gDNA和cDNA序列进行了分析。