建立PCR-CE-RFLP方法快速诊断女性生殖道的细菌感染

目的建立PCR-CE-RFLP方法直接检测女性生殖道感染标本中的细菌,为临床提供快速、准确的诊断依据。方法利用细菌16S rRNA集保守性和变异性于一体的特点,合成1对通用引物,其上游5′端用5-′FAM标记。将8株已知菌和38例临床诊断为生殖道炎症的标本及其培养物进行PCR扩增,扩增产物经限制性内切酶HaeⅢ消化,经毛细管电泳(CE)通过限制性片断长度多态性分析(RFLP)来鉴定不同病原菌。结果(1)已知菌株PCR扩增阳性率为75%(6/8)、生殖道感染标本的PCR扩增阳性率为79%(30/38),毛细管电泳阳性率两者均为100%。(2)已知菌株PCR扩增产物的5′端HaeⅢ完全酶切片段的毛细管电泳结果,与电子克隆产物的酶切片段基本一致。(3)用传统培养检测法在生殖道能检出的常见致病菌,实验用PCR-CE-RFLP法同样也能检出。(4)实验还发现数种传统培养法未检出的细菌。结论PCR-CE-RFLP法比传统的细菌培养法具有快速、准确、灵敏的优点,比传统方法缩短20 h,可用于临床标本的直接鉴定。