电化学发光法测定HBV标志物与荧光定量PCR-HBV-DNA结果的分析比较

目的探讨HBV标志物与HBV-DNA的相关性,更加准确地了解患者HBV感染、病毒复制和传染性情况,为临床制定合理的治疗方案、疗效观察和预后评估提供依据。方法用电化学发光法测定HBV标志物,用实时荧光定量PCR方法检测HBV-DNA。结果 HBV标志物模式1～5均有HBV-DNA阳性检出,其中模式4的检出率最高(81.7%),而且DNA含量也最高;模式6～9均为DNA阴性。在乙肝五项指标中,HBeAg的定量结果与HBV-DNA含量相关性最大(r=0.713)。结论 HBV标志物和HBV-DNA既相关又有所不同,应将两者结合起来并相互补充才能更好的反映患者HBV病毒复制和传染性情况。

HBsAg ELISA+/HBV DNA NAT-献血者血清学与分子生物学特征分析

目的 了解西安地区无偿献血人群HBsAg ELISA检测结果与HBV DNA检测结果不一致的标本相关血清学标志物的分布情况。方法 收集2022年11月1日—2023年4月30日陕西省血液中心HBsAg ELISA+/HBV DNA NAT-(ELISA+/NAT-)标本共计71份,对其采用电化学发光法检测乙肝血清学标志物,同时复检巢式PCR扩增HBV S区和C区基因片段。结果 双ELISA+/NAT-标本(n=30)巢式PCR检测阳性率远高于单ELISA+/NAT-标本(n=41)(60%vs 24.40%,P<0.05)。前者献血者100%为初次献血者,血清抗-HBc阳性率100%,血清学模式以1、4、5此3项阳性(80%)为主;后者献血者中31.7%为重复献血者,血清抗-HBc阳性率仅为19.51%,血清学模式以单2项阳性(43.90%)和全阴(36.58%)为主。结论 单ELISA+结果存在较多假阳性,导致不必要的血液报废;而NAT-标本可能存在低水平的HBV DNA,产生漏检风险。建议针对单HBsAg ELISA+/NAT-献血者,采用多套系统多种方法追溯检测,提高献血者HBV筛查的准确度,减少不必要的血液浪费。

一种可用于OBI检测的高灵敏度核酸提取方法的建立与验证

目的 建立和验证1种可用于隐匿性HBV感染(OBI)检测的大体积高灵敏度核酸提取方法,并将其应用于低病毒载量OBI标本的定量检测。方法 参考罗氏核酸检测试剂盒核酸提取方法,建立1种大体积核酸提取方法。将HBV标准品分别配置成10 000 IU/mL、1 000 IU/mL、100 IU/mL、10 IU/mL和1 IU/mL浓度,采用磁珠法从10 mL相应浓度的标准品中提取核酸,采用荧光定量PCR法检测各浓度的CT值,每个浓度梯度进行平行双份检测,以病毒浓度的对数为X轴,2次检测CT值的平均值为Y轴,构建荧光定量标准曲线和回归方程。通过3次重复实验验证该方法的稳定性。应用本方法提取低病毒载量OBI标本核酸并进行荧光定量。结果 3次HBV病毒荧光定量标准曲线扩增效率(E)均在90%~105%,回归方程(R2)均>0.99。不同浓度标准品CT值的变异系数(CV)分别为0.63%、0.78%、1.52%、1.36%和0.78%。本方法可以提取出病毒载量低至1 IU/mL的OBI标本核酸并进行定量。结论 本方法HBV核酸定量检测系统检测下限可达1 IU/mL,并且具有较强稳定性和灵敏度,可用于低病毒载量OBI的定量检测。

56例乙型肝炎免疫标志物阳性者PCR—HBV检测结果分析

５６例乙型肝炎免疫标志物阳性者ＰＣＲ—ＨＢＶ检测结果分析山西医科大学第一医院（０３０００１）赵克斌王永昌王晋萍乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染所致的传染性疾病，酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测乙型肝炎免疫标志物已被广泛应用于临床，近年来，随着...

引物浓度与退火温度不当导致巢式PCR非特异性扩增

目的探索巢式PCR非特异性扩增的产生原因及消除方法。方法以巢式PCR扩增乙型肝炎病毒(HBV)Sgene为模型,分别使用不同退火温度组合与不同引物浓度组合进行巢式PCR扩增,观察并分析实验结果。结果降低引物浓度或提高退火温度均可消除巢式PCR的非特异性扩增,但提高退火温度有可能影响反应的扩增效率,导致产物量下降甚至得不到产物。结论巢式PCR发生非特异性扩增时,可以提高退火温度或降低引物浓度对反应体系进行优化。

实时定量PCR在乙型肝炎(HBV)诊断中的应用

随着对乙型肝炎治疗的深入研究 ,对乙型肝炎病毒 (HBV DNA)数量的确诊显得尤其重要。本文采用RealTimeQuantitativePCR(简称RQ PCR)方法 ,对 2 84例经ELISA检定的乙型肝炎患者血清标本进行HBV DNA定量检测。结果有 96例HBsAg(+ ) HBeAg(+ ) HBcAb(+ )的血清标本RQ PCR阳性率为 10 0 % ,病毒平均量 5 0 2× 10 5拷贝 μl;87例HBsAg(+ ) HBeAb(+ ) HBcAb(+ )的血清标本RQ PCR阳性率为 4 4% (38例 ) ,病毒平均量 1 0 2× 10 3 拷贝 μl,5 3例HBsAg(+ ) HBcAb(+ )的血清标本RQ PCR阳性率为 5 8% (31例 ) ,病毒平均量 6 6 9× 10 4拷贝 μl;而 4 6例正常对照组经检测全为阴性。可见RQ PCR的检测结果反映了不同患者的病情 ,对乙型肝炎的诊断、治疗具有临床指导价值。

乙型肝炎e抗原作为乙型肝炎病毒围术期传播监控指标的可行性研究

目的探讨乙型肝炎ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）作为围术期乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）传播监控指标的可行性。方法使用套式ＰＣＲ（ｎＰＣＲ）极量稀释方法，以ＨＢＶ感染剂量（ＩＤ）为参比单位，ＨＢｅＡｇ与稀释血量为分类标准，评价ＨＢｅＡｇ对ＨＢｓＡｇ阳性血液传染性的影响。结果１５６例ＨＢｓＡｇ阳性者中，３１例（１９ ．９％）ＨＢｅＡｇ阳性，１１５例（７３．７％）ＨＢＶＤＮＡ阳性， ＨＢＶ传染性为 ０～１０９ ＩＤ／ｍｌ。与ＨＢｓＡｇ相比，ＨＢｅＡｇ对围术期 ＨＢＶ传播的预示作用更好。与 ＨＢｅＡｇ阴性血液相比，ＨＢｅＡｇ阳性血液的ＨＢＶ携带率更高，ＨＢＶ的传染性更强，传播所需的血量更少，对特异性预防的效果更差。结论在外科医生普遍进行ＨＢＶ特异性免疫的前提下，ＨＢｅＡｇ较ＨＢｓＡｇ更适合作为围术期ＨＢＶ传播的监控指标。

乙型肝炎患者血清HBV-DNA水平、HBV标志物及肝脏功能的相关性研究

目的 了解乙型肝炎病毒(HBV)感染者血清HBV-DNA含量、HBV血清学标志物及肝功能指标(ALT、AST)的相互关系及意义。方法 分别采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术和ELISA检测211例乙型肝炎患者血清HBV-DNA含量和HBV标志物,并与肝功能指标进行比较。结果 Pre S1抗原在HBeAg阳性模式中的阳性率(66.2％)高于HBeAg阴性模式中的阳性率(22.1％)(P<0.01);HBeAg和Pre S1抗原的阳性率随HBV-DNA拷贝数的升高而升高;HBV-DNA(-)组与HBV-DNA(+)组的ALT和AST差异显著(P<0.01),而HBV-DNA(+)组之间HBV-DNA拷贝数与ALT和AST无相关性。结论 Pre S1抗原、HBeAg和HBV-DNA含量三者彼此相关,均反映了HBV复制活性,其中HBV-DNA是最理想的指标;HBV-DNA能用于粗略判断肝功能是否正常。

溶血对检测不同含量乙肝病毒DNA干扰作用的研究

目的研究不同程度的溶血对荧光定量PCR检测不同含量的HBVDNA的干扰作用。方法采用PEG沉淀法和直接煮沸法提取血清中HBVDNA，用荧光定量PCR方法研究不同程度的溶血对检测不同含量HBVDNA的干扰作用。结果采用沉淀法提取HBVDNA，重度溶血明显抑制低拷贝组至高拷贝组HBVDNA的扩增；中度溶血使低拷贝组至中拷贝组的HBVDNA含量明显降低；轻度溶血降低了低拷贝组的HBVDNA含量。采用直接煮沸法提取HBVDNA，重度及中度溶血均明显抑制低拷贝组至高拷贝组HBVDNA的扩增；对低拷贝10^3组的抑制最显著，完全抑制其HBVDNA的扩增。轻度溶血使低拷贝组至中拷贝组的HBVDNA含量明显下降。结论重度溶血对低拷贝组到高拷贝组的HBVDNA的荧光定量检测均有明显的抑制作用，对于重度溶血标本，临床应重新留样检测HBVDNA，轻度溶血主要影响低拷贝组HBVDNA的检测结果，对低拷贝的轻度溶血样本，临床应重新留样检测，对高拷贝的轻度溶血样本，可以不重新留样。溶血对直接煮沸法的影响比沉淀法更大。

有限稀释定量PCR检测血清HBV-DNA的临床应用及意义

探讨有限稀释定量PCR用于临床检测血清HBV -DNA ,及其对干扰素抗病毒治疗的指导意义。利用有限稀释定量PCR技术分别检测 38例HBsAg、HBeAg双阳性患者α - 2b干扰素治疗前后血清HBV -DNA含量 ,观察检测结果对治疗的指导意义。 38例患者干扰素治疗 12周HBV -DNA阴转 7例 ( 18 4% ) ;治疗 2 4周阴转 11例( 2 8 9% )。其中病毒滴度 >2 5 0pg/ml者阴转 11 1% ( 1/9) ;病毒滴度 2 5fg/2 5 0pg/ml者阴转 2 5 0 % ( 4/16 ) ;病毒滴度<2 5fgml者阴转 46 2 % ( 6 /13) ,三组比较P <0 0 1。有限稀释定量PCR检测HBV -DNA对慢性乙型肝炎患者干扰素治疗具有一定的指导意义 ,以病毒滴度≤ 2 5 0pg/ml,干扰素治疗 2 4周疗效较佳。

PCR检测HBV DNA与HBV血清标志物常见模式和Pre-S2相互关系研究

目的 探讨乙型肝炎病毒 (HBV)DNA与六种常见HBV血清免疫学标志物模式、前S2 蛋白抗原 (Pre -S2 )之间的相互关系及其临床检测意义。方法 采用PCR法对HBVDNA、ELISA法对HBV血清免疫学标志物、Pre -S2 同时进行检测。结果 1484例六种常见模式HBVDNA阳性率依次为 89 8% >5 5 6 % >2 1 8% >7 5 % >7 1% >6 8% ,即模式 (1) >(3) >(2 ) >(5 ) >(6 )>(4) ;而HBV血清免疫学标志阳性例数依次为 (2 ) >(1) >(3) >(5 ) >(4) >(6 )。 (2 )、(3)种模式HBVDNA与Pre S2阳性率比较P <0 0 1,其余 (1)、(4)～ (6 )种模式HBVDNA与Pre-S2 阳性检出率无显著性差异 (P >0 0 5 )。结论 HBV血清免疫学标志物、Pre -S2、HBVDNA的检测 ,三者缺一不可 ,ELISA法检测HBV血清免疫学标志物、Pre -S2 ,只是HBV的表型指标 ,提供HBV感染的间接证据。而PCR -HBVDNA的检测是HBV感染与否的直接证据。因此它们各自有其独特的临床检测意义。

HBV前S1抗原与HBV DNA联合检测的临床意义

目的探讨乙型肝炎病毒前S1抗原(HBV pre-Sl)、HBV DNA与HBV表面标志物(HBV-M)的关系。方法从临床乙型肝炎标本中筛出HBsAg阳性病例329例,采用ELISA法检测乙肝血清标志物和前S1抗原,荧光定量PCR法检测标本HBV DNA。结果血清HBeAg抗原阳性组,HBV DNA和pre-Sl的阳性率分别为97.2%和90.0%,而HBeAg抗原阴性组的HBV DNA与pre-Sl阳性率分别为42.9%和37.0%,HBeAg阳性患者血清的HBV DNA与pre-Sl的阳性检出率明显高于HBeAg阴性患者。结论 HBV pre-Sl和HBV DNA在各组中阳性检出率有较高的一致性,pre-Sl在一定程度上可替代HBV DNA。pre-Sl与乙肝血清标志物联合检测能为乙肝患者病毒复制、肝功能损伤提供有价值的实验室依据,同时有助于慢性乙肝患者疗效考核和预后判断。

等位基因差异特异性PCR检测HBVDNA的前C区1896突变位点及其临床意义

为了探讨ＨＢＶ前Ｃ区 １８９６突变位点检测的临床意义，采用３－末瑞等位基因差异特异性ＰＣＲ方法对９５例乙型肝炎病毒感染者的ＨＢＶＤＮＡ１ ８９６位点进行基因型（野生株／突变株）的检测，结果显示：总突变率为６４．２％，总野生率为５５．８％，纯野生型和纯突变型的检出率分别为２８．４％和２７．４％；不同临床类型的乙肝病毒感染者均可出现突变，其野生型、突变型和混合感染型的检出率之间的比较无显著性差异（Ｐ＞０．０５），急性乙肝与慢性乙肝、携带者、肝硬化和肝癌的总突变率存在差异（Ｐ＜０．０５）；血清不同ＨＢｅ系统均可发生突变．抗－ ＨＢｅ阳性组的突变率显著高于ＨＢｅＡｇ阳性和ＨＢｅ系统阴性组（Ｐ＜０．０５），提示：机体感染了ＨＢＶ后．变异主要是发生在慢性持续性感染过程中．突变株逐渐替代了野生株并成为优势株．使宿主得以持续感染ＨＢＶ。

母婴间乙型肝炎与丙型肝炎双重感染的研究

从流行病角度，利用分子生物学技术及免疫学方法，对２１０例产妇血清及新生儿 脐带血清，应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）、反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），检测乙型肝炎病毒（ＨＢＶ） 及丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）标志物，其结果为：ＨＢｓＡｇ阳性产妇的新生儿阳性率为６５．５％，ＨＢｅＡｇ阳 性产妇的新生儿阳性率为８１．８％，抗－ＨＣＶ阳性产妇的新生儿阳性率为７５．０％，ＨＢＶ－ＤＮＡ及 ＨＣＶ－ＲＮＡ双重阳性产妇的新生儿阳性率为１００．０％，说明母婴间存在乙型肝炎（ＨＢ）、丙型肝炎 （ＨＣ）及双重感染，其垂直传播可发生于宫内及围产期，是婴幼儿患病毒性肝炎的主要感染途径。 由于乙型肝炎及丙型肝炎的临床表现无特异性，不能从临床症状和体征中得以诊断，所以建立敏 感、特异的实验检测方法，为临床提供早期诊断依据，建立围产期保健制度，分娩过程中对婴儿加 强保护，阻断传播途径，是目前可行的有效措施。控制和降低病毒性肝炎的母婴间传播，有利优生 优育，提高人口素质的基本国策。”

乙型肝炎病毒血清标志物与HBV DNA定量结果分析

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)血清学检测出现的组合模式与HBVDNA定量之间的关系,正确评价其临床意义。方法用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清标志物,用荧光定量PCR检测HBVDNA含量,依据乙肝病毒标志物阳性出现的模式分为7组A组191例,为HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性(俗称大三阳);B组328例,为HBsAg、HBe-Ab、HBcAb阳性(俗称小三阳);C组26例,为HBsAg、HBeAg阳性;D组54例,为HBsAg、HBcAb阳性;E组35例,HBsAb、HBeAb、HBcAb阳性;F组11例,为HBsAb、HBcAb阳性;G组10例,为HBcAb阳性。结果各组HBVDNA>1.00ⅹ103拷贝/ml的阳性增高百分率分别为A组98.95%(189/191);B组46.34%(152/328);C组100%(26/26);D组57.41%(31/54);E组20.00%(7/35);F组18.18%(2/11);G组20.00%(2/10)。A组、C组与B、D、E、F、G组间HBVDNA阳性增高率有显著性差异(P<0.01),其他各组间比较有些差异有显著性,有些差异无显著性(P<0.01或P>0.05)。结论正确合理地分析HBV血清学指标出现的类型,与HBVDNA的联合动态检测有助于临床诊断、疗效观察及预后判断。

荧光定量PCR法检测乙肝病毒DNA和乙肝病毒标志物检测的临床价值分析

目的探讨荧光定量PCR法(FQ-PCR)检测乙肝病毒DNA(HBV-DNA)和乙肝病毒标志物(HBV-M)ELISA法检测的临床价值。方法选取本院收治的乙肝患者653例,先采用ELISA法对其血液标本进行HBV-M模式定性检测,再采用FQ-PCR法进行HBV-DNA定量检测,观察不同HBV-M模式检测结果。结果大三阳(1、3、5模式)和1、3模式的HBVDNA阳性率分别为97.97%和94.74%,显著高于其他模式(P<0.05)。大三阳(1、3、5模式)的HBV-DNA表达水平为(5.59×106±2.42×105),显著高于其他模式(P<0.05)。结论不同HBV-M模式的HBV-DNA表达水平及阳性率存在显著差异,联合HBV-M定性及HBV-DNA定量检测对临床早期诊断及用药具有重要指导价值。

荧光定量PCR检测HBV DNA与血清HBV标志物和preS1相互关系研究

目的探讨荧光定量PCR法检测乙型肝炎病毒(HBV)DNA与HBV血清免疫学标志(HBVM)模式,preS1之间的相互关系及临床意义。方法采用实时荧光定量PCR法(FQ-PCR)检测801例血清的HBVDNA,用ELISA方法对其免疫学标志,preS1同时进行检测。结果HBVDNA的总检出率为67·0%,preS1的总检出率为74·9%。其中,在模式HBsAg(+),HBeAg(+),HBcAb(+)中血清HBVDNA含量明显高于HBsAg(+),HBeAb(+),HcAb(+)及HBsAg(+),HBcAb(+)组。在HBsAg(-)模式中HBVDNA亦有检出。在HBsAg(+),HBeAb(+),HcAb(+)组,HBVDNA的检出率为55·8%,而preS1的检出率为69·8%,两者有显著差异(P<0·01),其余HBVM模式,无显著差异(P>0·05)。结论HBVM和preS1提供了HBV感染的间接证据,荧光定量PCR法检测HBVDNA准确灵敏,是HBV感染及复制的直接证据,HBVM,preS1和HBVDNA的检测各有其独特的临床检测意义,在乙型肝炎的诊断治疗中均具有重要的临床指导价值。

河南省艾滋病流行区HIV共感染HBV和HCV状况分析

目的:了解河南省艾滋病流行区艾滋病病毒(HIV)共感染乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)状况。方法:首先用Combas Amplicor HIV-1病毒载量检测法对从我省HIV某高发县采集的由输血感染HIV-1的130份血样进行定量测定。挑选出HIV-1病毒载量4.28×102拷贝/mL以上的血浆样本81份,同时收集30份HIV-1阴性健康体检者血浆作为对照,再用巢式PCR法对以上样本进行HBV和HCV测定。结果:81份HIV-1阳性样本中HBV阳性32份(39.5%),HCV阳性72份(88.9%);同时感染HBV和HCV的样本为7份(8.6%)。30份HIV-1阴性对照组中,HBV阳性7份(23.3%),与HIV-1阳性组间比较差异无统计学意义(χ2=2.51,P>0.05);HCV阳性4份(13.3%),与HIV-1阳性组间比较差异有统计学意义(χ2=57.88,P<0.05);HIV-1阴性对照组中未检测出HBV和HCV共感染样本,与HIV-1阳性组相比差异无统计学意义(χ2=2.77,P>0.05)。结论:经输血感染HIV的患者具有共感染HCV的倾向;对以上途径感染HIV的患者,在进行HIV治疗时应同时进行HBV和HCV检测,阳性者应在治疗HIV-1的同时给予抗HBV和HCV治疗。

聚合酶链反应检测HBV M阳性血清中HBV DNA的临床意义

应用聚合酶链反应对140例乙型肝炎病毒感染标志(HBV M)阳性的慢性肝病患者血清中HBV DNA进行检测。结果发现:1.HBV DNA总阳性率为72.86％;HBsAg、HBeAg和抗-HBc阳性血清中HBV DNA阳性率分别为76.56％、96.15％和74.42％HPsAg阴性血清中HBVDNA阳性率为33.33％,HBeAg阴性血清中HBV DNA阳性率为59.09％。2.各HBV感染模式中,HPsAg、HBeAg和抗-HBc均阳性的.血清HBV DNA阳性率最高达96.15％,显著高于其它模式(P<0.05或<0.01),提示HBsAg的抗原性与感染力并不等同。HBeAg确是HBV活动性与传染性的重要标志。抗-HBc作为HBV感染标志,在肝癌高发区似有其特殊的临床意义,并证明聚合酶链反应是判断HBV感染状态的灵敏而准确的方法,适用于对乙型肝炎疗效或复发的监测。

职业献血浆员HBV和HCV感染状况的研究

本文采用ELISA法检测247名职业健康献血浆员中抗-HCV和HBV感染标志(HB-VM),并用PCR技术检测其中85人血清HBV-DNA的存在状况.发现抗-HCV阳性率为4.0%,HBVM阳性率为29.1%,HBV-DNA阳性率为11.8%≥40岁人群抗-HCV阳性率明显高于30岁以下人群(7.7%比0,P=0.042).HBVM阳性者抗-HCV阳性率明显高于HBVM阴性者(8.3%比2.3%,P=0.038),HBV感染与HCV感染之间存在一定的伴随关系.HBVM阳性者血清HBV-DNA阳性率明显高于HBVM阴性者(18.2%比 0,P<0.05).结论认为目前常规筛选献血员的方法不安全,建议加以改进.