新月弯孢不同分离物的RAPD及ITS区的PCR-RFLP分析

新月弯孢(Curvularia lunata)不同分离物之间分生孢子形态常有较大的变异,环境条件对形态的影响也较大,因此种的鉴定常常很困难,种的划分有时有随意性及模糊性.本研究利用RAPD和ITS区的PCR-RFLP技术,对形态学上应归属于C.lunata但是具有一定变异的15个分离物进行了分析.研究显示C.lunata不同分离物在遗传上具有较大的变异,C.lunata实际上是一个复合种.从树状图上看,供试分离物可以分为4组:组A(包括9个分离物),在形态学上它们具有典型C.lunata分生孢子特征,PDA培养基上不产生或者很少产生气生菌丝;组B(包括一个分离物,该菌株为新月弯孢空气变种,C.lunata var.aeria代表性菌株),它和组A的连锁距离约6.6(相似率15％),显示出它与典型C.lunata巨大的差异性,这一结果与Nakada等用基因组的RFLP分析及Tsuda等根据形态学的观察所得到的结论一致.因此,我们同意Tsu-da等将C.lunata var.aeria提升为种C.aeria的观点;组C(包括一个分离物)和其它分离物的RAPD带型相比,具有较大的差异,连锁距离达到6.7(相似率为13％,分生孢子不似典型的C.lunata分生孢子,PDA上形成大量灰色气生菌丝的菌落;组D(包括4个分离物),它们之间相似性很高,分生孢子为不呈典型的C.lunata分生孢子状,PDA培养基上,可以产生大量的灰色气生菌丝.组C和?

浙江地区不同寄主来源的炭疽菌ITS序列PCR-RFLP多态性分析

应用核糖体DNA(ribo-somal DNAr,DNA)的ITS(internal transcribed spacer,ITS)区的RFLP序列的多态性,分析32个不同寄主来源的炭疽菌株的遗传多样性。利用ITS1及ITS4通用引物对扩增各菌株的rD-NA的内转录间隔区(ITS1-5.8S-ITS2)获得长约600 bp片段。ITS-RFLP共迁带UPGMA聚类分析的结果表明所有来自不同寄主的炭疽菌菌株(含福建及云南菌株)都以较高的相似系数(>0.60)聚为一类,具有较近的亲缘关系;同时试验中所有酶切位点的综合Gst系数达到0.82,说明不同菌株间的ITS具有丰富的多态性。

胆固醇酯转运蛋白基因15外显子D442G突变的检测

应用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性分析 (PCR RFLP)的方法检测 110例脑动脉粥样硬化患者胆固醇酯转运蛋白 (CETP)基因 15外显子D44 2G错义突变。首先用聚合酶链反应特异性扩增包含人CETP基因 15外显子第 15 0 6位碱基的基因序列 ,扩增产物用限制性内切酶MspⅠ酶切 ,聚丙烯酰胺凝胶电泳后分析结果。 110例脑动脉粥样硬化患者中发现 4例杂合突变 ,突变率 3 6 % ,与对照组 4%比较无明显差异。该方法简单、快速、准确 ,适合于一般实验室开展及大规模人群调查。

天麻rDNA ITS区的PCR-RFLP分析

对来源于贵州大方(DF)、黎平(LP)、台江(TJ)、雷山(LS)、乌当(WD)及云南(YN)的鲜品天麻进行核糖体DNA内转录间隔区(ITS)的PCR扩增,并用限制性内切酶BamHI、HincⅡ、HeaⅢ进行酶切分析的结果显示,天麻ITS区长度约为750bp,PCR产物经HeaⅢ酶切后YN、DF和WD株的RFLP图谱基上一致,TJ2、LP和LS株的RFLP图谱基本上一致,而TJ1株则显著不同;经BamHI酶切后,LP、TJ和LS株的RFLP图谱相同,除DF3外,YN、DF1、DF2和WD株的RFLP图谱基本上一致;经HincⅡ酶切后,除DF3和TJ1 RFLP的图谱显著不同外,其余样本RFLP图谱均表现一致。表明天麻的遗传变异特征与其地域分布有一定的联系。

错配PCR-RFLP检测乙型肝炎病毒X基因/C基因启动子变异

设计错配PCR-限制性片段长度多态性分析（PCR－RFLP）检测中国HBV每株C基因启动子（BCP）区第2个AT丰富区的一对点突变；核苷酸（nt）1762的碱基由A→T和1764的碱基由G→A变异。结果发现在32例慢性HBV感染者中BCP变异者有10例，总检出率为31．2％．提示在我国HBV毒株BCP区这一联合点突变较常见．PCR－RFLP技术与序列分析结合，对于研究这一新发现的热点变异与临床的关系具有重要的实用价值．

PCR-RFLP技术在环境地球化学研究中的应用及展望

PCR—RFLP技术为环境地球化学提供了一种新的研究方法和实验设计的新的思维方式。该方法具有所需样品量低、快速简便及特征性强等优点 ,可广泛应用于物质的生物地球化学循环、环境过程的生物作用、生物多样性及有机物源判断等方面的研究。利用PCR—RFLP技术 ,以环境中存在的 16SrRNA为对象 ,对环境生物的研究已广泛开展并取得了许多成果。展望未来研究成果 ,将会在海洋及湖泊沉积物等自然环境中发现更多的、新的微生物种类 ;将进一步阐明生物作用和物质循环的机理和过程 ;

用PCR-RFLP技术鉴别猪的氟烷基因型

用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ技术对乐山市种畜场长白猪选育基础群的氟烷基因型进行了检测，查清了Ｈａｌｎ基因在该群体中的分布，Ｈａｌｎ基因的频率为１８０５６％。同时对影响ＰＣＲ的几个主要因素进行了初步研究。

HBV耐拉米夫定多聚酶基因变异检测方法的建立

目的 建立一种简便、准确、实用的乙型肝炎病毒 (HBV)耐拉米夫定多聚酶基因变异检测方法。 方法 根据已公布的HBVDNA序列 ,在HBV多聚酶基因区设计并合成了两对寡核苷酸引物 ,其中一只为错配引物 ;应用巢式错配聚合酶链反应 (PCR)特异性扩增含有HBV多聚酶基因YMDD基序的片段 ,扩增产物用限制性内切酶 (NdeⅠ )酶切 ,琼脂糖凝胶电泳 ,观察酶切后目的片段的限制性片段长度多态性 (RFLP)图谱。部分标本进行DNA测序。 结果 (1)所建立的巢式错配PCR RFLP法 ,从DNA提取到酶切后电泳分析仅需要 11小时 ;灵敏度高 ,可以检测到 10 3 copies/ml的HBVDNA ;特异性强 ,结果准确 ,经DNA测序证实。 (2 )检测 2 0例长期服用拉米夫定的慢性乙型肝炎患者的系列血清 ,发现YMDD变异者 (45 % ) 9例 ,YMDD野毒株者 (5 5 % ) 11例 ,表明该法可有效地鉴别HBVYMDD野毒株与变异株。 结论 本实验所建立的用于检测HBV耐拉米夫定多聚酶基因变异的巢式错配PCR RFLP方法简单、敏感、特异 ,适用于一般实验室及大规模的人群调查。

黔邵花猪氟烷基因序列多态性分析

为了确定黔邵花猪氟烷基因(Haln)的基因型,试验采集了15头黔邵花猪和25头杂交F1代(黔邵花猪♀×土猪♂)的肌肉或带毛囊的颈部鬃毛共40份样品,进行Haln基因特定片段的PCR扩增和限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)鉴定,对部分Haln基因特定片段测序,然后将3条黔邵花猪与6条不同品种(系)猪(民猪、藏香猪、二花脸、大约克夏、杜洛克、挪威长白猪)的Haln基因相同区域序列进行比对分析。结果表明:黔邵花猪及其杂F1代HalNHalN型和HalN基因频率均是100%,与其他6条不同品种(系)的Haln基因部分序列比对发现有17个单碱基差异,3条黔邵花猪序列Haln基因序列中6个位点发生突变,第17外显子完整且未见C1843T突变。说明黔邵花猪具有独特的种质特性和良好的抗应激能力,有必要进行合理开发和利用。

Ⅱ型糖尿病患者瘦素受体基因变异与肥胖及高血压的相关性研究

目的 探讨Ⅱ型糖尿病患者瘦素受体基因Gln2 2 3Arg变异与肥胖及高血压之间的相关性。方法 采用PCR -RELP方法分析了 1 84例无锡地区Ⅱ型糖尿病患者及 86例正常对照组Gln2 2 3Arg变异频率的分布情况。结果 (1 )整个被检测的Ⅱ型糖尿病人群中Gln2 2 3Arg变异频率与正常对照组比较经统计学处理没有显著性差异 ;(2 )Ⅱ型糖尿病患者中的正常体重组A、G等位基因的分布频率与超重组分布频率的比较亦无显著性差异 ;(3)在Ⅱ型糖尿病患者中高血压组和非高血压组之间存在非常显著的A、G等位基因的分布频率差异 (P值 <0 0 0 5)。

南阳牛IGF2基因第2外显子多态性及其与生长发育相关性研究

以126头纯种南阳黄牛为研究材料,利用PCR-RFLPs技术对胰岛素样生长因子2(IGF2)第2外显子的多态性及其与生长发育的相关性进行了分析。结果表明:南阳牛在该位点的遗传多态性丰富。检测到2种等位基因A和B,频率分别为0.686 5和0.313 5,A等位基因在群体中是优势等位基因;BB型个体的6、12、18、24月龄体斜长和胸围,12、18和24月龄的坐骨端宽,初生、6月龄和24月龄体重等体征性状显著地优于AA型;6月龄体斜长、12月龄的胸围、18月龄和24月龄坐骨端宽也显著优于杂合型。初步推断IGF2基因是非常有价值的辅助选择标记,可为南阳牛肉用型方向选择提供理论依据。

南阳牛DGAT2基因PCR-RFLP多态性及其与生长性状相关性研究

以131头纯种南阳牛为研究材料,利用PCR-RFLPs对二酰甘油酰基转移酶2(DGAT2)基因的第6内含子和第7内含子的多态性及其与生长发育的相关性进行了分析。结果表明:南阳牛在该位点分别检测到两种等位基因A/B和N/M,频率分别为0.875/0.125和0.971/0.029。A和N等位基因是群体中的优势等位基因。该基因内含子6对南阳牛6月龄的体高、2岁体重、6月龄到两岁的胸围和体斜长都有显著的影响,内含子6的AA基因型的6月龄的体高比杂合型高3.8%,两岁体重高3.9%,6月龄到两岁的胸围分别高3.8%、3.4%、3.7%、4.3%;6月龄到两岁的体斜长分别高3.8%、3.6%、3.8%、3.1%。内含子7对18月龄和两岁的坐骨端宽有极显著的影响(P<0.01);对两岁的胸围有显著的影响(P<0.05)。

几株具有杀虫特异性的苏云金芽胞杆菌菌株的生物活性及杀虫蛋白基因型的鉴定

通过在全国各地采集的土壤、腐殖质、水体固形物、动物排泄物,采用醋酸钠-硫酸庆大霉素培养基分离获得多样性的苏云金芽胞杆菌(Bt)菌株,利用cry基因的PCR-RELP鉴定体系对菌株进行基因分析,并用SDS-PAGE方法获得高晶体含量的菌株,用生物测定方法筛选对不同靶标昆虫高毒力的菌株,现已分别获得对甜菜娥、斜纹夜娥、松毛虫、茶树害虫茶尺蠖、水稻螟虫、榆蓝叶甲高效的Bt天然菌株。通过对Bt生物多样性的研究,针对不同害虫,有目的选择不同特色Bt菌株用于防治,或有防效菌株交互使用,达到最佳防治目标或延缓害虫抗性。

白介素-16基因多态性与广西地区鼻咽癌遗传易感性的研究

目的研究广西地区人群白介素-16(IL-16)基因多态性与鼻咽癌(NPC)遗传易感的相关性。方法对来自广西地区的75例鼻咽癌患者和75例健康体检者采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)及酶联免疫吸附法,分析IL-16基因的3个单核苷酸多态性(SNP)位点(rs11556218T/G、rs4778889T/C、rs4072111C/T)多态性与NPC的相关性。结果 IL-16基因rs11556218位点在NPC患者中TG基因型分布频率(49.3%)显著高于健康对照组(34.7%)(P=0.037)。NPC组IL-16-rs11556218G等位基因频率为32.7%,高于正常对照组的21.3%(P=0.027),并且G等位基因携带者的血清IL-16水平明显高于TT基因型(P=0.00)。携带GTT和GCC单倍型的个体罹患鼻咽癌风险性是携带TTC单倍型者的2.95倍和2.73倍。结论 IL-16基因rs11556218位点的基因多态性与广西地区鼻咽癌的遗传易感性有关,TG基因型可能是NPC发生的易感基因型,携带G等位基因的个体患NPC风险增高。

ras癌基因点突变的研究

N-ras基因第12密码子、K-ras基因第12和13位密码子无已知的限制性内切酶的酶切位点,不能使用PCR-RFLP方法分析这些位点的突变。我们在PCR引物的3’端引入了一个误配的硷基使之正好成为某限制性内切酶的酶切位点,因而能使用PCR-RFLP方法分析上述位点的突变。本文使用PCR-RFLP方法分析了c-Ha-ras基因第12和61位、N-ras基因第12位、K-ras基因第12位和13位密码子的点突变。

5-HT_6受体基因多态性与双相情感障碍的关联研究

目的 探讨5-HT6受体基因多态性与双相情感障碍之间的关系。方法 应用聚合酶链反应(PCR)和限制性片段长度多态性(RFLP)技术,对93例双相情感障碍病人和102例正常对照者的5-HT6受体基因多态性(267C/T)进行了检测。结果 双相情感障碍与5-HT6受体基因的多态性(267C/T)之间无显著意义的关联,发病年龄也与此多态性无关。 结论 5-HT6受体基因的267C/T多态性可能与双相情感障碍的发生无直接关联。

应用PCR/SSCP分析恙虫病东方体分离株基因型的研究

目的 对分离自辽宁、吉林地区的 6株恙虫病东方体目的基因进行分析研究 ,并与国际参考株进行比较。方法 经PCR/SSCP检测 ,呈现出 2种不同的单链构象图谱 :HCAa92 0 2株、HCAp92 0 3株及HCM95 0 1株图谱与Gilliam参考株相同 ,而KDCt940 2株、KDCp940 3株及KDCt940 4株的图谱则与Karp参考株相同。结果 辽宁、吉林地区恙虫病东方体分离株至少存在 2种型别。结论 应用PCR/SSCP方法分析恙虫病东方体基因型 ,简便、经济、省时、结果准确。

四川省一个新引进外种猪群体氟烷基因及酸肉基因的检测和分析

为了加强对四川省某核心种猪场新引进种猪的选育,试验采用PCR-RFLPs方法对新引进的457头外种猪的氟烷(HAL)基因和酸肉(RN)基因的多态性进行研究。结果表明:新引进种猪中存在3头HALn基因携带者,HALn基因频率为0.33%。RN-rn+、RN-RN-基因型种猪数分别为1头、38头,在整个群体中RN-的基因频率为8.42%。在今后的育种工作中,应加强对氟烷基因和酸肉基因的检测和标记辅助选择(MAS),以选育出抗应激的优质猪群体。

植物遗传多样性保护及其分子生物学研究方法

植物遗传多样性保护及其分子生物学研究方法李俊清（北京林业大学森林资源与环境学院，１０００８３）ＣｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎｏｆＰｌａｎｔＧｅｎｅｔｉｃＤｉｖｅｒｓｉｔｙａｎｄＲｅｌａｔｅｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．￥Ｌｉ...

K562白血病细胞系HLA-II等位基因型

目的:测定K562白血病细胞系HLA -II等位基因型。方法:采用聚合酶链反应 -限制性片断长度多态性技术对K562白血病细胞系HLA -II类抗原基因进行DNA分型。结果:K562细胞系的HLA -II基因型均为纯合子型 ,等位基因分别是 :DRB1*0301/*0301,DQB1*0201/*0201,DPB1*0402/*0402。结论:提高对K562白血病细胞系HLA -II基因型的认识。