利用PCR-RFLP技术测定种猪的氟烷基因型

采用 PCR- RFL P方法对 6 1头长白猪、5 6头大约克猪和 30头杜洛克猪进行了氟烷基因型检测。结果表明 :3个品种猪群所含的氟烷应激基因分别为 5 .73% ,0 .89%和 3.33%。建议在四川省种猪选育过程中 ,应将氟烷基因型的检测作为种猪性能测定的内容之一 ,及时淘汰携带氟烷基因的个体 。

用PCR-RFLP技术检测皮肤感染性肉芽肿组织中的分支杆菌

目的 :探讨用聚酶链反应 -限制性片段长度多态性分析 (PCR -RFLP)方法快速检测皮肤感染性肉芽肿组织中的分支杆菌。方法 :皮肤感染性肉芽肿患者的组织标本 5份 ,提取组织DNA进行巢式PCR扩增 ,对PCR产物分别用HhaⅠ、MboⅠ、BstUⅠ 3种限制性内切酶进行酶切 ,聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,进行RFLP分析 ,并与培养结果进行比较。结果 :从 2份临床诊断为游泳池肉芽肿的组织标本中检测出海分支杆菌 ,从 1份诊断为皮肤感染性肉芽肿的标本中检测出结核分支杆菌 ,此 3例结果与培养鉴定结果完全一致。另两份标本分别检测出结核分支杆菌和偶发分支杆菌。结论 :用PCR -RFLP方法可以快速鉴定皮肤感染性肉芽肿中的分支杆菌 ,可协助临床进行疾病的早期诊断和及时治疗。

PCR-RFLP技术在ABO血型鉴定中的应用

目的建立ABO血型的基因检测方法,为临床安全有效输血提供保障。方法收集已知ABO血型的献血者外周血标本,运用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析技术来检测基因型。结果200份标本基因检测结果与血清学方法鉴定结果完全一致。结论基因分型技术能够准确地鉴定ABO基因型,可以为临床疑难血型的鉴定和安全有效输血提供保障。

应用PCR-RFLP技术研究云南楚雄地区嗜盐古菌生物多样性

采用限制片段长度多态性-聚合酶链式反应(PCR-RFLP)技术对从我国云南省楚雄市一平浪盐矿样品中所分离的39株极端嗜盐古菌进行生物多样性分析研究。提取39株嗜盐古菌染色体DNA,将其作为模板,进行PCR扩增,PCR产物再用HinfⅠ酶切,琼脂糖凝胶电泳,结果显示电泳的条带和数目存在较大差异,说明云南地区嗜盐古菌资源丰富,且有较显著的遗传多样性。根据39株菌株所形成条带的相对位置和数目,初步将它们分为11个类群。

PCR-RFLP技术与动物分子育种

本文在叙述RFLP、PCR-RFLP技术原理的基础上，综述了其在动物分子育种中的应用。

应用RAPD标记和细胞质基因组PCR-RFLP技术研究大花蕙兰的遗传多样性

利用RAPD、叶绿体和线粒体基因组PCRRFLP标记系统评价了大花蕙兰20个品种的遗传多样性。在50个RAPD引物分析中,有36个引物(72.0%)能揭示材料间的多态性,材料间遗传相似系数为0.503～0.765,平均0.598,根据遗传相似系数进行聚类分析表明,RAPD标记能将所有材料区分开。在7个叶绿体基因组(cpDNA)的PCRRFLP分析中,6个标记(87.5%)可扩增出1至多条清晰的谱带;扩增产物经7种限制性内切酶消化后,6个标记的19种引物/酶组合共检测到53条DNA片段,其中多态性片段有37条,占69.8%;材料间遗传相似系数变化范围为0.571～0.949,平均值为0.766。在8个线粒体基因组(mtDNA)的PCRRFLP标记分析中,只有3个(37.5%)标记能得到1条清晰的谱带;利用7种限制性内切酶对3个标记的扩增产物消化后,在10种标记/酶组合中,共检测到33条酶切片段,其中21条(63.6%)具有多态性;遗传相似系数为0.634～1.000,平均0.829。这些结果表明,RAPD标记揭示的大花蕙兰遗传多样性最高,其次为cpDNAPCRRFLP标记,而mtDNAPCRRFLP标记揭示的遗传多样性最低。

应用PCR-RFLP技术鉴别区分中国沿海四种主要养殖扇贝

扇贝的物种鉴定,通常主要是依据形态学标准来进行。然而,当用于形态辨别的部分被去除时,对扇贝的物种鉴定工作则显得十分困难。本研究利用对扇贝核糖体ITS的PCR-RFLP分析,首次从分子水平上鉴定区分了中国沿海四种主要的养殖扇贝(栉孔扇贝、华贵栉孔扇贝、虾夷扇贝及海湾扇贝)。根据四种扇贝ITS的测序结果,选取三种内切酶(SmaI、MseI及TaqI)应用于PCR-RFLP分析。根据三种内切酶产生的酶切图谱,四种扇贝可被有效鉴别区分。酶切结果在四种扇贝各群体间的稳定性,证明了利用该技术对四种扇贝进行物种鉴定的可行性。本研究同时成功地对扇贝加工品-干贝进行了物种鉴定,证明了该技术在实践中应用的可行性。

应用PCR-RFLP技术分析橡胶林土壤真菌种群动态变化

采用PCR-RFLP技术分析一年内不同深度橡胶林土壤真菌区系的变化。结果表明,随着时间和土壤深度的变化,真菌18S r DNA的PCR-RFLP图谱存在着一定的差异。相同时间不同取样深度的土壤样品酶切产生的强亮带略有差异,同时,随土壤深度的增加,橡胶土样酶切条带相似性整体增大,说明自然状态下橡胶林土壤的真菌多样性受到土壤垂直分布的影响,优势真菌种群随土壤深度的变化略有差异。而对于不同时间相同取样深度的橡胶林土壤,土壤样品酶切后产生的强亮带有所变化,但3种取样深度下的变化趋势基本相同,1-12月份橡胶土样酶切条带相似性各不相同,表明在自然状态下,橡胶林土壤中真菌多样性会随着时间变化而变化。一些优势真菌类群和非优势真菌类群在不同时间会存在交替,可能和物候有着直接的联系。PCR-RFLP技术能准确反映土壤微生物的动态变化,为进一步研究橡胶林土壤微生物群落结构和分类,生物多样性和生态系统功能的影响提供基础资料。

PCR-RFLP技术分析沼气池厌氧活性污泥细菌的多样性

应用PCR-RFLP和rRNA分析法研究了户用沼气池厌氧活性污泥细菌的多样性。采用直接提取法提取了户用沼气池微生物宏基因组DNA，构建了细菌的16S rDNA克隆文库。随机挑取了144个准确含有16S rDNA的阳性克隆进行PCR-RFLP分析，聚类得到46个OTUs（operational taxonomic units），其中3个OTUs是优势类群，分别占14％，10％和9％，21个OTUs只含有单个克隆。随机挑取了26个克隆进行测序，并构建了系统发育进化树。结果表明：农村户用沼气池中细菌种类较为丰富，占优势的类群分别为Firmicutes（28％）、Delta-proteobacteria（18％）和Bacteroidetes（17％），大多数16S rDNA序列与GenBank数据库中未培养细菌相似性最高（91％～99％），为进一步研究、利用沼气池能源提供了基础资料。

用PCR-RFLP技术鉴别鲁道夫对盲囊线虫姊妹种的研究

用保守引物扩增鲁道夫对盲囊线虫Contracaecumrudolphii姊妹种和C .septentrionalerDNA第一内转录间隔区(ITS 1)片段并纯化,根据鲁道夫对盲囊线虫A、鲁道夫对盲囊线虫B和C .septentrionalerDNAITS 1序列,选用限制性内切酶MspΙ和NsiI酶切,酶切产物用琼脂糖凝胶电泳分析.结果经MspΙ酶切后,鲁道夫对盲囊线虫姊妹种与C .septentrionale表现出不同的条带;经NsiΙ酶切后,鲁道夫对盲囊线虫B和C .septentrionale结果一致,与鲁道夫对盲囊线虫A不同.用MspΙ可以鉴定出C .septentrionale ,用NsiΙ可以鉴定出鲁道夫对盲囊线虫A ,2个限制性内切酶合用可以将鲁道夫对盲囊线虫A、鲁道夫对盲囊线虫B以及C .septentrionale分别鉴定出来.根据鲁道夫对盲囊线虫A、鲁道夫对盲囊线虫B以及C .septentrionalerDNAITS 1基因序列建立的鲁道夫对盲囊线虫姊妹种PCR RFLP鉴别技术能够对鲁道夫对盲囊线虫姊妹种进行准确。

用PCR-RFLP技术鉴别嗜人按蚊和中华按蚊的研究

目的 依据嗜人按蚊和中华按蚊rDNA的ITS2区段基因特征 ,建立一种新的嗜人按蚊和中华按蚊基因鉴别技术。方法 对不同地区的嗜人按蚊、可疑嗜人按蚊和中华按蚊样本通过采用特异性ITS2 引物PCR扩增 ,限制性内切酶RsaI和HinfI消化 ,以及琼脂糖凝胶电泳分析进行PCR -RFLP基因鉴别。 结果 不同地区嗜人按蚊rDNA的ITS2 基因PCR扩增产物能被限制性内切酶HinfI酶切 ,并显示一条 4 5 0bp的酶切DNA条带 ;中华按蚊的ITS2 基因PCR扩增产物则能被限制性内切酶RsaI酶切 ,并显示 4 0 0bp和 2 0 0bp两条酶切DNA条带 ;辽宁可疑嗜人按蚊的PCR -RFLP结果与嗜人按蚊相同而广东珠海可疑嗜人按蚊的PCR -RFLP结果与中华按蚊相同。结论 依据rDNA的ITS2 区段基因特征建立的PCR -RFLP技术可用于嗜人按蚊和中华按蚊的基因鉴别。采用该PCR -RFLP基因鉴别技术发现辽宁可疑嗜人按蚊的基因与中国大陆的嗜人按蚊属同种 ,而广东可疑嗜人按蚊的基因与中华按蚊属同种。

利用PCR-RFLP技术对鲫鱼6个不同品系的鉴定

采用PCR-RFLP方法分析鲫鱼不同品系mtDNA ND3/ND4L/ND4基因片段,对野鲫、异育银鲫、红鲫、白鲫、彩鲫及金鱼的基因片段进行测序,测序结果用RESearch-version1.0软件对限制性内切酶特异性位点进行分析,最终选择MvaⅠ核酸限制性内切酶对目的基因片段进行酶切,同时引入鲤鱼作为外类群,构建了系统树。酶切结果分析表明,基于聚合酶链式反应——限制性片段长度多态性分析能快速而准确地区分鲫鱼的4个不同品系,首次提出异育银鲫和浙江地区野鲫(河鲫鱼)在mtDNAND3/ND4L/ND4基因上的分子鉴定法,为物种鉴定提供了一定的理论研究基础。但野鲫、金鱼、彩鲫的基因序列两两只有一个碱基的差异,相似度接近100%,用酶切软件(RESearch-version1.0)进行分析后未能找到区别三者的限制性内切酶位点,这一结果也验证了关于金鱼、彩鲫起源于野鲫的观点。

用RFLP和PCR-RFLP技术研究东北虎和华南虎线粒体DNA多态性

采用ｍｔＤＮＡＲＦＬＰ和ＰＣＲＲＦＬＰ技术研究了东北虎和华南虎的ｍｔＤＮＡ的多态性。在ｍｔＤＮＡＲＦＬＰ研究中，分离纯化了东北虎和华南虎肝、肾和心脏组织的ｍｔＤＮＡ，用２０种识别６碱基对的限制性内切酶消化，结果只有１种限制性内切酶（ＸｂａⅠ）检测到多态性片段，其余１９种限制性内切酶消化产生的限制性格局在东北虎和华南虎完全一致。在ＰＣＲＲＦＬＰ研究中，用ＰＣＲ技术分别扩增了东北虎和华南虎ｍｔＤＮＡ的控制区（ｃｏｎｔｒｏｌｒｅｇｉｏｎ），用８种识别４碱基对的限制性内切酶分别对扩增产物进行消化，结果只有１种限制性内切酶（ＲｓａⅠ）检测到多态性片段。ｍｔＤＮＡＲＦＬＰ及ＰＣＲＲＦＬＰ的结果均提示东北虎和华南虎之间的遗传距离极小。这可能与下列因素有关：两者分布区间无天然隔离屏障；具有强扩散能力；近几百年才被相互隔离。

PCR-RFLP技术在兽医寄生虫学上的应用

聚合酶链式反应连接的限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP),是在基因组上寻找多态性位点,揭示个体或群体间遗传变异或评估种间亲缘关系的一种分子标记技术。由于其具有丰富的多态性、操作的可重复性、遗传信息的忠实性等优点,PCR-RFLP技术的研究和应用十分活跃。寄生虫的遗传变异现象十分普遍,用PCR-RFLP技术精确分析寄生虫遗传变异的研究意义重大。因此,PCR-RFLP技术近年来在兽医寄生虫学虫种分类、流行病学调查、种群变异、确定寄生虫与宿主的关系、药物治疗分析等方面的应用越来越普遍。

采用PCR-RFLP技术在不同水平上鉴定大豆根瘤菌(英文)

采用16SrRNA基因PCR扩增与限制性酶切片段多态性分析（RFLP）技术对选自弗氏中华根瘤菌（S．fredii）、大豆慢生根瘤菌（B．japonicum）和埃氏慢生根瘤菌（B．elkanii）的19株代表菌进行了比较分析，根据用3种限制性内切酶的RFLP分析结果，可将供试菌株分为S．fredii，B．japonicum，B.elkaniiⅡ和B．elkaniiⅡa等4种基因型。各类菌株之间没有交叉，因此本研究采用的PCR-RFLP技术不失为一种快速鉴别大豆根瘤菌的新方法。采用本技术已将分离自中国的22株快生菌和19株慢生菌分别鉴定为S．fredii和B．japonicum。对供试参比菌株和野生型菌株进行的16S～23S基因间隔DNA（IGS）的PCR-RFLP分析结果表明：S.frediii和B.japonicum菌株的IGS长度不同，所有供试S．fredii菌株的IGS为2.1kb，而供试B.japonicum菌株则为2．0kb。依据RFLP的差异，可将来自中国两个不同地区的S.fredii株区分为2个基因型，而来自中国东北黑龙江地区的19株B．japonicum菌株则可分为11个基因型。对上述野生型菌株还进行了REP－PCR和ERIC-PCR分析并确定其具有菌株水平的特异性。

PCR-RFLP技术DLA-DRB1基因分型在狗卵巢移植配型中的应用

目的探讨狗组织相容性系统（ＤＬＡ）－ＤＲＢ１基因分型方法及用于狗卵巢移植配型的可行性。方法 选择特定的引物和 ６种限制性内切酶，采用聚合酶链反应－限制性片段长度多态性（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎｂａｓｅｄｏｎｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｆｒａｇｍｅｎｔ ｌｅｎｇｔｈ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ， ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）技术建立了 ＤＬＡ－ＤＲＢ１基因分型的方法。用 ＰＣＲ方法对 ６ 只无亲缘相关的个体纯种比格狗ＤＲＢ１基因扩增，通过选用 ＨａｅⅢ， Ｈｉｎｆ Ⅰ， ＭｓｐⅠ， ＨｈａⅠ， Ｓａｕ９６Ⅰ及 ＲｓａⅠ等６种限制性内切酶对该片段进行酶切分析。结果酶切图谱显示出ＤＬＡ－ＤＲＢ１基因具有高度多态性。应用于３对卵巢移植狗的基因配型获得成功。结论研究表明，该方法在狗器官移植配型中有较好的实用价值。

应用PCR-RFLP技术对HLA-DRB1*04位点进行基因分型

目前对ＨＬＡ－ＤＲＢ１等位基因分型，应用较多方法是ＰＣＲ－ＳＳＯＰ法，其优点是结果准确可靠，缺点是需合成许多探针，有放射性辐射，操作复杂及耗时长。为了探索快速、简便、精确的ＤＲＢ１＊０４等位基因分型方法，笔者对Ｏｔａ等［１］的方法加以改进，用ＰＣＲ－...

PCR-RFLP技术用于中国登革2型病毒株基因型快速分型

利用RT PCR的方法 ,对中国 5株登革 2型病毒的prM E基因进行扩增 ,选择合适的限制性内切酶将扩增产物特异地切割成若干长度不同的片段 ,经 5 %聚丙烯酰胺凝胶电泳后 ,对获得的银染带型进行分析。结果表明FJ 10株和FJ 11株属同一基因型 ,D2 4 3株和D2 4 4株属同一基因型 ,D2 0 4株与上述 4株基因型不同 ,这与核苷酸测序分析结果完全一致。在此基础上建立PCR RFLP技术用于登革 2型病毒基因型快速分型 ,具有省时、操作简单、不需使用同位素等特点 。