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Screening of Species-specific DNA Probes for Identification of Fallopia multiflora
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作者 Chuanjin ZHENG Nian CHEN 《Agricultural Biotechnology》 CAS 2014年第1期22-25,30,共5页
To screen species-specific DNA probes for identification of Fallopia muhiflora, the genomic DNA (gDNA) suppression subtraction hybridization (SSH) between F. muhiflora and F. muhiflora var. ciliinervis was firstly... To screen species-specific DNA probes for identification of Fallopia muhiflora, the genomic DNA (gDNA) suppression subtraction hybridization (SSH) between F. muhiflora and F. muhiflora var. ciliinervis was firstly performed. The obtained differential gDNA fragments by SSH were then hybridized with gDNA ar- rays consisting of multiple whole genomes of several species (adulterants and/or closely related species of F. muhiflora) and four differential fragments were screened uniquely representing F. muhiflora, which could be used as F. muhiflora species-specific probes. The screened DNA probes were tested by reverse dot blot hybridization and the results demonstrated that these probes could be used reliably to identify F, muhiflora. The species-specific DNA probes obtained in this study exhibited broad application prospects in the preparation of gene chips for identifying Chinese traditional medicines and the authentication of germplasm re- sources and crude drugs of F. muhiflora. 展开更多
关键词 Fallopia muhiflora DNA probe Species identification Reverse dot blot hybridization
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基于特征多肽抗原的阿胶基原鉴定
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作者 袁陈婷 杨容 +6 位作者 王立玮 景凌洁 陈璐阳 加羊卓玛 孙小祥 孙锦秀 杨欢 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1214-1219,共6页
目的 以特征多肽为半抗原并制备多克隆抗体,鉴定阿胶原材料基原。方法 经文献调研及数据库比对筛选特征多肽,将多肽抗原与血蓝蛋白偶联并免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,通过ELISA、dot blot和Western blot分析与验证多克隆抗体的产生、... 目的 以特征多肽为半抗原并制备多克隆抗体,鉴定阿胶原材料基原。方法 经文献调研及数据库比对筛选特征多肽,将多肽抗原与血蓝蛋白偶联并免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,通过ELISA、dot blot和Western blot分析与验证多克隆抗体的产生、效价及特异性。结果 筛选所得5个特征多肽序列均具有T细胞表位和B细胞表位,亲水性-1~0,二级结构大多为无规则卷曲。多肽抗原ECS1、ECS3~ECS5在二次加强免疫后,效价分别为1∶6 400、1∶400、1∶12 800和1∶800。制备所得的多克隆抗体之间不产生交叉反应,而且多克隆抗体Ab-ECS3与驴皮及其伪品蛋白的结合显现出较大差异。结论 以特征多肽为半抗原制备所得的多克隆抗体可通过Western blot对驴皮进行真伪鉴别,为胶类中药的基原鉴定提供了参考。 展开更多
关键词 阿胶 特征多肽 多肽抗原 多克隆抗体 Western blot 基原鉴定
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柔嫩艾美耳球虫微线蛋白1(EtMIC1)基因的原核表达与重组蛋白的免疫原性分析
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作者 张圳 王松 +3 位作者 孙铭飞 胡建和 王丹妮 朱惠丽 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2023年第20期77-82,共6页
为了解原核表达柔嫩艾美耳球虫微线蛋白1(Eimeria tenella microneme 1,EtMIC1)重组蛋白的免疫原性,试验以柔嫩艾美耳球虫广东株孢子化卵囊为材料,首先采用PCR技术扩增去除信号肽的EtMIC1基因,将其插入原核表达载体pET-32a(+)中,构建重... 为了解原核表达柔嫩艾美耳球虫微线蛋白1(Eimeria tenella microneme 1,EtMIC1)重组蛋白的免疫原性,试验以柔嫩艾美耳球虫广东株孢子化卵囊为材料,首先采用PCR技术扩增去除信号肽的EtMIC1基因,将其插入原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组原核表达载体,然后将重组原核表达载体pET32a(+)-EtMIC1转化至大肠杆菌T7pLysY感受态细胞中,用IPTG进行诱导表达,最后对重组蛋白进行SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定。结果表明:PCR扩增出大小为2055 bp的去信号肽EtMIC1基因片段,与预期结果一致;构建的重组原核表达载体pET32a(+)-EtMIC1可在大肠杆菌T7pLysY感受态细胞中表达,重组蛋白分子质量大小约为93 ku,主要表达在上清液中,可被自然感染抗柔嫩艾美耳球虫鸡血清和EtMIC1重组蛋白多克隆抗体特异性识别。说明试验成功表达了EtMIC1重组蛋白,原核表达的EtMIC1重组蛋白具有良好的免疫原性。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 EtMIC1 原核表达 免疫原性 SDS-PAGE分析 Western-blot鉴定
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非洲猪瘟病毒K205R蛋白的原核表达与单克隆抗体制备 被引量:1
4
作者 陈寅龙 郑南南 +6 位作者 吴宏举 侯浩宇 李潮 张昂克 韩世充 吴亚楠 杜永坤 《动物医学进展》 北大核心 2023年第11期1-7,共7页
为研发非洲猪瘟病毒的免疫检测试剂提供素材,制备非洲猪瘟病毒K205R蛋白的单克隆抗体。采用PCR方法扩增K205R基因,构建重组表达质粒pET-30a-K205R,将重组质粒pET-30a-K205R转化到大肠埃希氏菌BL21(DE3)中并通过IPTG诱导表达ASFV K205R... 为研发非洲猪瘟病毒的免疫检测试剂提供素材,制备非洲猪瘟病毒K205R蛋白的单克隆抗体。采用PCR方法扩增K205R基因,构建重组表达质粒pET-30a-K205R,将重组质粒pET-30a-K205R转化到大肠埃希氏菌BL21(DE3)中并通过IPTG诱导表达ASFV K205R蛋白。将纯化出的蛋白乳化后免疫小鼠,采用杂交瘤技术制备能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞。将筛选出来的单克隆细胞注射至小鼠腹腔中,待小鼠腹部膨大时收集腹水,通过ELISA方法鉴定腹水效价、Western blot和IFA鉴定单克隆抗体特异性及反应原性,并对单克隆抗体亚型进行鉴定。经SDS-PAGE鉴定,重组ASFV K205R蛋白成功表达。Western blot分析显示,His标签抗体能够特异性识别重组表达的ASFV K205R蛋白,表明其具有良好的特异性以及反应原性。通过细胞融合和细胞筛选得到1株能稳定分泌抗ASFV K205R蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,将其命名为1C3G6。ELISA检测腹水中抗体效价为1∶100000。Western blot和IFA鉴定结果显示单克隆抗体1C3G6与K205R蛋白反应性良好。通过亚型鉴定,单克隆抗体1C3G6的重链为IgG2b类,轻链为Kappa型。经Western blot和IFA鉴定,筛选得到的1C3G6单克隆抗体可以特异性识别原核系统和真核系统表达的K205R蛋白,说明该抗体具有良好的特异性。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 K205R蛋白 原核表达 单克隆抗体 Western blot鉴定
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人心肌肌钙蛋白I的纯化及鉴定 被引量:6
5
作者 卞智萍 杨笛 +3 位作者 顾春荣 徐晋丹 杨国平 张寄南 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期9-11,共3页
目的 提取和纯化人心肌肌钙蛋白I。方法 心室肌经匀浆、离心、盐析提取 ,CMSephadexC 5 0柱层析 ,DEAESephadexA 5 0柱层析制备人cTnI ;经 (cTnI)活性检测、SDS PAGE、westernblot鉴定。结果 从 6 5 g湿重心肌中获得 4 .1mgcTnI ,分... 目的 提取和纯化人心肌肌钙蛋白I。方法 心室肌经匀浆、离心、盐析提取 ,CMSephadexC 5 0柱层析 ,DEAESephadexA 5 0柱层析制备人cTnI ;经 (cTnI)活性检测、SDS PAGE、westernblot鉴定。结果 从 6 5 g湿重心肌中获得 4 .1mgcTnI ,分子量约为 2 4 0 0 0 ,纯度约为 84 %。结论 纯化的cTnI可被cTnI单克隆抗体特异识别 ,本实验从人心肌中成功制备cTnI。 展开更多
关键词 人心肌肌钙蛋白I 纯化 鉴定 急性心肌梗死 诊断
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海参DNA条形码的构建及应用 被引量:14
6
作者 律迎春 左涛 +5 位作者 唐庆娟 段高飞 王春霞 李晋 徐洁 薛长湖 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期782-789,共8页
为研究线粒体细胞色素c氧化酶亚基Ⅰ(Mitochondrial cytochrome c oxidase subunitⅠ,COⅠ)基因作为DNA条形码鉴定海参品种的可行性,本实验采集了7种海参(Holothuroidea)43个个体并获得其线粒体COⅠ基因序列,利用DNAstar、DNAMAN和MEGA ... 为研究线粒体细胞色素c氧化酶亚基Ⅰ(Mitochondrial cytochrome c oxidase subunitⅠ,COⅠ)基因作为DNA条形码鉴定海参品种的可行性,本实验采集了7种海参(Holothuroidea)43个个体并获得其线粒体COⅠ基因序列,利用DNAstar、DNAMAN和MEGA 4.1软件分析计算了7种海参的碱基组成以及不同海参之间的种间遗传距离和种内遗传距离,利用邻接法和最大简约法分别构建了分子系统树。结果表明,海参的种间遗传距离显著大于种内遗传距离,不同海参在系统树中分别形成各自独立的分支,表明以COⅠ作为海参DNA条形码进行品种鉴定具有一定的可行性。在建立海参DNA条形码的基础上,设计了针对仿刺参(Apostichopus japonicas)的特异性探针。对4种海参(仿刺参Apostichopus japonicas、冰岛参Cucumaria frondosa、加州拟刺参Parastichopus californicus及梅花参Thelenota ananas)进行斑点杂交实验,结果显示,该探针具有较好的特异性和较高的灵敏度,能够实现对仿刺参的鉴定。本研究为后续开展斑点杂交及基因芯片法鉴定海参种类的研究奠定了理论基础。 展开更多
关键词 海参 线粒体COⅠ基因 DNA条形码 种类鉴定 斑点杂交
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枝孢芽枝菌主要过敏原的分析与免疫、质谱鉴定 被引量:2
7
作者 李荔 李启沅 +1 位作者 刘志刚 吴海强 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期50-52,共3页
目的分析并用免疫和质谱方法鉴定枝孢芽枝菌(Cladosporium cladosporioides)的主要过敏原。方法空气中暴皿获得枝孢芽枝菌菌种,经鉴定后大规模培养;用碳酸盐缓冲液提取枝孢芽枝菌蛋白,并用SDS-PAGE、Western-blotting方法鉴定出枝孢芽... 目的分析并用免疫和质谱方法鉴定枝孢芽枝菌(Cladosporium cladosporioides)的主要过敏原。方法空气中暴皿获得枝孢芽枝菌菌种,经鉴定后大规模培养;用碳酸盐缓冲液提取枝孢芽枝菌蛋白,并用SDS-PAGE、Western-blotting方法鉴定出枝孢芽枝菌的主要过敏原。主要过敏原胶内酶切,再经基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析,所得质谱数据进入网站(http://www.matrixscience.com)Mascot检索比对。结果经过暴皿获得枝孢芽枝菌菌种,其蛋白粗提液SDS-PAGE结果显示有14个条带,含量丰富的有10个条带;Western-Blotting鉴定出18kD的蛋白阳性率达66%,为枝孢芽枝菌的主要过敏原;质谱显示枝孢芽枝菌主要过敏原与约18kD嗜冷杆菌(Psychrobacter arcticum)50S的核糖体蛋白的匹配分值最高。结论采用免疫、质谱法鉴定了枝孢芽枝菌的主要过敏原是约18kD的核糖体蛋白。 展开更多
关键词 枝孢芽枝菌 过敏原 MALDI-TOF-MS 核糖体蛋白 真菌
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用DIG-标记核酸探针鉴定传染性法氏囊病病毒 被引量:4
8
作者 王永山 周宗安 +3 位作者 翟春生 王元伦 方元 顾志香 《中国兽医学报》 CAS CSCD 1994年第2期151-153,共3页
用DIG-标记IBDVcDNA探针进行斑点杂交试验鉴定传染性法氏囊病病毒(IBDV)。实验结果证明,该探针能与试验的10株IBDV的RNA发生限性杂交反应,结果清晰稳定,无非特异性反应。本试验是一种新的敏感的IBDV... 用DIG-标记IBDVcDNA探针进行斑点杂交试验鉴定传染性法氏囊病病毒(IBDV)。实验结果证明,该探针能与试验的10株IBDV的RNA发生限性杂交反应,结果清晰稳定,无非特异性反应。本试验是一种新的敏感的IBDV鉴定方法。 展开更多
关键词 IBD 病毒 CDNA探针 斑点杂交试验
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用反相杂交技术对HLA-DQA1基因分型及其应用 被引量:2
9
作者 林源 阙庭志 +2 位作者 李莉 赵珍敏 周月琴 《法医学杂志》 CAS CSCD 2000年第1期12-13,共2页
目的 :HLA -DQA1其因的分型研究及在实际办案中的应用。方法 :PCR结合反相杂交检测技术对HLA -DQA1基因进行分型。结果 :检见7种基因 ,24种基因型 ,获得上海地区HLA -DQA1基因的基因频率及基因型的频率分布数据。结论 :对法医学中常见... 目的 :HLA -DQA1其因的分型研究及在实际办案中的应用。方法 :PCR结合反相杂交检测技术对HLA -DQA1基因进行分型。结果 :检见7种基因 ,24种基因型 ,获得上海地区HLA -DQA1基因的基因频率及基因型的频率分布数据。结论 :对法医学中常见的血液 (痕 )、牙齿、精斑、混合斑、人体组织等检材进行HLA -DQA1分型检测 ,其结果稳定可靠 。 展开更多
关键词 PCR技术 HLA-DQA1基因 亲权鉴定 个体识别
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牙龈卟啉菌核酸探针的制备、鉴定 被引量:2
10
作者 刘鲁川 史俊南 吉昌华 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 1994年第4期200-202,共3页
根据Pg的特异的fimA基因设计一对引物,采用PCR技术扩增其中542bp长的DNA片段,用^(32)P标记作为探针与25株细菌DNA进行杂交鉴定.结果显示该探针能识别5株同种菌,而与其它20株异种菌DNA无阳性信号出现,探针的敏感性达到微微克级.提示该探... 根据Pg的特异的fimA基因设计一对引物,采用PCR技术扩增其中542bp长的DNA片段,用^(32)P标记作为探针与25株细菌DNA进行杂交鉴定.结果显示该探针能识别5株同种菌,而与其它20株异种菌DNA无阳性信号出现,探针的敏感性达到微微克级.提示该探针具有特异、敏感、快速、简便的特性.适用于对Pg的检测. 展开更多
关键词 核酸探针 细菌 鉴定 斑点杂交 牙龈卟啉菌 制备
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牛血清中27kDa蛋白的免疫学特性研究 被引量:2
11
作者 邵先安 沈燕 +3 位作者 徐薇 王缨 胡新美 熊思东 《中国病毒学》 CSCD 2004年第1期6-9,共4页
为探讨牛血清中存在的HBsAg样蛋白的性质,给HBV的发病机制、治疗、预防等研究提供依据,我们采集93份牛血清,以SDS-PAGE、WesternBlot对血清中HBsAg样蛋白进行研究,发现其分子量约为27kDa;以SDS-PAGE分离牛血清中的HBsAg样蛋白,经皮下多... 为探讨牛血清中存在的HBsAg样蛋白的性质,给HBV的发病机制、治疗、预防等研究提供依据,我们采集93份牛血清,以SDS-PAGE、WesternBlot对血清中HBsAg样蛋白进行研究,发现其分子量约为27kDa;以SDS-PAGE分离牛血清中的HBsAg样蛋白,经皮下多点免疫小鼠,可产生与人HBV编码蛋白HBsAg反应的抗体。表明该27kDa蛋白可能存在与HBsAg相似的免疫学特性。 展开更多
关键词 牛血清 鉴定 抗原性 乙型肝炎病毒
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PCR反向点杂交技术快速鉴定BALF中分枝杆菌菌种的应用研究 被引量:3
12
作者 辛茶香 熊国亮 +2 位作者 袁小兰 张周云 彭亦平 《实验与检验医学》 CAS 2016年第4期439-441,共3页
目的探讨PCR-反向点杂交技术(PCR-RDBHA)快速鉴定支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid BALF)标本中分枝杆菌菌种的临床应用价值。方法对临床306例活动性肺结核患者、疑似非结核分枝杆菌感染肺病患者BALF标本采用PCR-反向点... 目的探讨PCR-反向点杂交技术(PCR-RDBHA)快速鉴定支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid BALF)标本中分枝杆菌菌种的临床应用价值。方法对临床306例活动性肺结核患者、疑似非结核分枝杆菌感染肺病患者BALF标本采用PCR-反向点杂交技术和传统的改良罗氏培养法进行分枝杆菌菌种鉴定。结果 306例BALF标本PCR反向点杂交技术检测出分枝杆菌127例,阳性率为41.5%(127/306),其中结核分枝杆菌复合群(MTC)108例,占分枝杆菌的85.0%(108/127),非结核分枝杆菌(NTM)19例,占分枝杆菌的15.0%(19/127)。NTM中,6例脓肿分枝杆菌,10例胞内分枝杆菌,2例戈登分枝杆菌,1例瘰疬分枝杆菌;传统的改良罗氏培养法检测出分枝杆菌101例,阳性率33.0%(101/306),经菌种的初步鉴定,其中MTC89例,占分枝杆菌的88.1%(89/101),NTM12例,占分枝杆的11.9%(12/101)。结论 PCR反向点杂交技术能够快速鉴定BALF中分枝杆菌菌种,该方法简便、结果准确,具有良好的临床应用价值。 展开更多
关键词 分枝杆菌 菌种鉴定 聚合酶链反应 反向点杂交
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应用PCR-反向斑点杂交快速鉴定分枝杆菌菌种 被引量:6
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作者 张晓娟 《中国医药导报》 CAS 2010年第9期35-36,共2页
目的:应用聚合酶链反应-反向斑点杂交法(PCR-RDBHA)快速鉴定分枝杆菌至种的水平。方法:以分枝杆菌rpoβ基因编码序列为靶基因,应用PCR-RDBHA检测126株分枝杆菌临床分离株。以PCR-DNA测序为对照,对经PCR-RDBHA鉴定为非结核分枝杆菌(NTM)... 目的:应用聚合酶链反应-反向斑点杂交法(PCR-RDBHA)快速鉴定分枝杆菌至种的水平。方法:以分枝杆菌rpoβ基因编码序列为靶基因,应用PCR-RDBHA检测126株分枝杆菌临床分离株。以PCR-DNA测序为对照,对经PCR-RDBHA鉴定为非结核分枝杆菌(NTM)的临床分离株进行PCR-DNA测序。结果:126株临床分离株中,经鉴定115株(91.3%)为结核分枝杆菌复合群(MTC),11株(8.7%)为NTM。NTM中,4株胞内分枝杆菌,1株堪萨斯分枝杆菌,1株戈登分枝杆菌,2株瘰疬分枝杆菌,3株脓肿分枝杆菌。11株NTMPCR-RDBHA与PCR-DNA测序结果一致。结论:PCR-RDBHA能鉴定分枝杆菌临床分离株至种的水平,方法简便、快速,结果准确,具有良好的临床应用价值。 展开更多
关键词 分枝杆菌 菌种鉴定 聚合酶链反应 反向斑点杂交
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生物素标记寡核苷酸探针检测和鉴定单核细胞增多症李氏菌的研究
14
作者 杨百亮 丁伟 +3 位作者 马海利 周志江 徐克诚 张让堂 《华北农学报》 CSCD 北大核心 1994年第S1期71-74,共4页
采用寡核苷酸生物素探针进行了斑点杂交试验。结果表明,12株单核细胞增多症李氏菌均与探针呈杂交阳性,其它种李氏菌和细菌无一与探针杂交。探针检测靶DNA的敏感性为10ng,过夜增菌培养,可提高敏感性10~3~10~4倍,测出样品中少至150个细菌... 采用寡核苷酸生物素探针进行了斑点杂交试验。结果表明,12株单核细胞增多症李氏菌均与探针呈杂交阳性,其它种李氏菌和细菌无一与探针杂交。探针检测靶DNA的敏感性为10ng,过夜增菌培养,可提高敏感性10~3~10~4倍,测出样品中少至150个细菌,探针法检测市售猪肉和牛奶的阳性率高于分离培养法,具有推广应用价值。 展开更多
关键词 生物素 DNA探针 斑点杂交 单核细胞增多症李氏菌 检测 鉴定
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何首乌种特异DNA探针的筛选
15
作者 郑传进 陈念 赵树进 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第13期148-151,共4页
为筛选得到何首乌(Fallopia multiflora)种特异DNA探针,通过何首乌gDNA和其近缘植物毛脉蓼(F.multiflora var.cillinerve)gDNA之间的的抑制消减杂交(Suppression subtraction hybridization,SSH)得到何首乌的差减片段,再将标记的差减片... 为筛选得到何首乌(Fallopia multiflora)种特异DNA探针,通过何首乌gDNA和其近缘植物毛脉蓼(F.multiflora var.cillinerve)gDNA之间的的抑制消减杂交(Suppression subtraction hybridization,SSH)得到何首乌的差减片段,再将标记的差减片段和多物种gDNA阵列杂交筛选得到了4条何首乌DNA探针,探针通过反向斑点杂交检测,能很好地区分何首乌及其混伪品。获得的探针在中药鉴定基因芯片的制备及何首乌种质和生药鉴定方面具应用前景。 展开更多
关键词 何首乌 DNA探针 物种鉴定 反向斑点杂交
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重组细粒棘球蚴(中国大陆株)线粒体苹果酸脱氢酶的表达、复性及鉴定
16
作者 王玉姣 王浩 +4 位作者 赵嘉庆 何鑫 王程铖 王强 赵巍 《宁夏医科大学学报》 2014年第4期409-413,F0004,共6页
目的通过原核表达细粒棘球蚴(中国大陆株)线粒体苹果酸脱氢酶(EgmMDH),获取高纯度的可溶性的重组细粒棘球蚴线粒体苹果酸脱氢酶(rEgmMDH)。方法从细粒棘球蚴(中国大陆株)中获得基因mdh并克隆到原核表达载体pET28a;通过IPTG诱导表达线粒... 目的通过原核表达细粒棘球蚴(中国大陆株)线粒体苹果酸脱氢酶(EgmMDH),获取高纯度的可溶性的重组细粒棘球蚴线粒体苹果酸脱氢酶(rEgmMDH)。方法从细粒棘球蚴(中国大陆株)中获得基因mdh并克隆到原核表达载体pET28a;通过IPTG诱导表达线粒体苹果酸脱氢酶(mMDH),进而采用亲和层析的方法纯化该包涵体目的蛋白并复性,获得可溶性目的蛋白rEgmMDH;利用细粒棘球蚴(中国大陆株)攻击感染家兔后获得血清;分别采用抗原头蚴兔血清和抗His-Tag鼠单克隆抗体对可溶性rEgmMDH进行Western blot鉴定。结果①成功构建原核表达载体pET28a-mMDH/BL21;②通过亲和层析及复性,获得高纯度可溶性目的蛋白rEgmMDH;③Western blot结果表明,抗原头蚴兔血清和抗His-Tag鼠单克隆抗体可分别特异性鉴定该复性可溶性rEgmMDH。结论通过本研究获得高纯度可溶性rEgmMDH,为进一步研究其在细粒棘球蚴感染宿主过程中的作用奠定基础。 展开更多
关键词 细粒棘球蚴 重组细粒棘球蚴(中国大陆株)线粒体苹果酸脱氢酶 蛋白纯化 WESTERN blot鉴定
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南瓜子房注射法遗传转化的研究 被引量:5
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作者 张言朝 葛宇 +4 位作者 于杨 徐文龙 白玉娇 崔崇士 屈淑平 《中国蔬菜》 北大核心 2012年第08X期27-31,共5页
以南瓜品种银辉1号为受体材料,用子房注射法对148个南瓜子房进行aiiA基因的遗传转化处理,共收获115个单瓜,结实率为77.7%。随机抽取56个单瓜,经0.2%Basta水溶液筛选和PCR鉴定,鉴定出7株阳性植株,均来自1个单瓜。再经PCR-Southern Blot鉴... 以南瓜品种银辉1号为受体材料,用子房注射法对148个南瓜子房进行aiiA基因的遗传转化处理,共收获115个单瓜,结实率为77.7%。随机抽取56个单瓜,经0.2%Basta水溶液筛选和PCR鉴定,鉴定出7株阳性植株,均来自1个单瓜。再经PCR-Southern Blot鉴定,结果显示均有杂交信号,表明aiiA基因已经整合到银辉1号南瓜基因组DNA中,转化率为0.25%,单瓜转化率为6.36%。 展开更多
关键词 南瓜 子房注射 pcr-southern blot鉴定 转基因
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日本血吸虫大陆株14-3-3信号转导蛋白epsilon亚型基因的表达及鉴定
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作者 唐小牛 汪学龙 沈继龙 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 2003年第6期358-361,共4页
目的 构建日本血吸虫大陆株 14 3 3信号转导蛋白epsilon亚型基因真核表达重组质粒pBK Sj14 3 3 ,并进一步在大肠杆菌中表达和鉴定 ,为其进一步保护性免疫的研究提供条件。 方法 根据日本血吸虫 14 3 3蛋白的核苷酸序列 ,设计合... 目的 构建日本血吸虫大陆株 14 3 3信号转导蛋白epsilon亚型基因真核表达重组质粒pBK Sj14 3 3 ,并进一步在大肠杆菌中表达和鉴定 ,为其进一步保护性免疫的研究提供条件。 方法 根据日本血吸虫 14 3 3蛋白的核苷酸序列 ,设计合成 1对引物 ,以日本血吸虫大陆株成虫总RNA为模板 ,用RT PCR法合成日本血吸虫大陆株 14 3 3蛋白epsilon亚型基因cDNA片段。将其克隆入pGEM T载体 ,经双酶切及PCR鉴定后 ,再亚克隆入 pBK CMV真核表达质粒 ,构建重组质粒pBK Sj14 3 3 ,转染到大肠杆菌BL2 1,双酶切鉴定后 ,通过IPTG的诱导在大肠杆菌BL2 1中进行表达及Western blot鉴定。 结果 RT PCR产物、pGEM T Sj14 3 3及pBK Sj14 3 3分别经双酶切均获得一特异性基因片段 ,其表达产物经SDS PAGE及Western blot鉴定后其分子质量为 3 2ku ,并能被抗 14 3 3多克隆抗体识别。 结论真核表达重组质粒 pBK Sj14 3 3在大肠杆菌中的表达产物是一分子质量为 3 2ku融合蛋白 ,并能被抗 14 3 3多克隆抗体识别。 展开更多
关键词 日本血吸虫 epsilon亚型 基因表达 Western-blot鉴定 大肠杆菌
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利用鱼抗血清及鼠抗血清分析鱼肠道弧菌全菌蛋白抗原性 被引量:2
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作者 张铭伟 唐小千 +2 位作者 绳秀珍 邢婧 战文斌 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期24-31,共8页
从患腹水症牙鲆脾脏组织中分离得到一株优势菌株CD86,经人工感染实验证实菌株CD86对牙鲆有较高的致病力,其半致死浓度为1.8×105 CFU/尾。通过生理生化特征测定和16SrDNA基因序列分析,判定菌株CD86为鱼肠道弧菌(Vibrio ichthyoente... 从患腹水症牙鲆脾脏组织中分离得到一株优势菌株CD86,经人工感染实验证实菌株CD86对牙鲆有较高的致病力,其半致死浓度为1.8×105 CFU/尾。通过生理生化特征测定和16SrDNA基因序列分析,判定菌株CD86为鱼肠道弧菌(Vibrio ichthyoenteri)。以福尔马林灭活的菌株CD86全菌分别免疫健康的小鼠和牙鲆,ELISA测定鼠抗血清和牙鲆抗血清效价分别为12 800和1 200。利用间接免疫荧光技术检测2种抗血清与菌株CD86的结合活性,结果显示,2种血清均可同菌体发生阳性反应,其中鼠抗血清阳性反应信号明显强于鱼抗血清。同时,利用Western blotting分析了菌株CD86全菌蛋白的抗原性,结果显示分子量为27、30和37kDa的菌体蛋白条带与2种血清均发生阳性反应;分子量为19、25、28、29和35kDa的菌体蛋白条带仅与鼠抗血清发生阳性反应;分子量为45kDa的菌体蛋白条带只与鱼抗血清发生阳性反应。研究结果表明,牙鲆对菌体抗原产生的抗体应答与小鼠存在明显差异,该发现对研筛鱼用高效的鱼肠道弧菌亚单位疫苗具有重要的参考价值。 展开更多
关键词 鱼肠道弧菌 分离鉴定 ELISA Western blotTING 抗原性分析 抗血清
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简单差示蛋白获取法鉴别2种海蛇的应用
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作者 曾洪辉 杨燕军 +1 位作者 何雅军 吴谦 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 2006年第2期120-122,共3页
目的建立简单差示蛋白法,获取两种海蛇的特征蛋白用作专属鉴别。方法采用SDS-PAGE与West-ern-blot结合分析并取差示蛋白直接测序。结果确认1号海蛇的特征蛋白为14.6kD及8.7kD两个组分,2号海蛇的特征蛋白为16.7kD及10.2kD两个组分,并完成... 目的建立简单差示蛋白法,获取两种海蛇的特征蛋白用作专属鉴别。方法采用SDS-PAGE与West-ern-blot结合分析并取差示蛋白直接测序。结果确认1号海蛇的特征蛋白为14.6kD及8.7kD两个组分,2号海蛇的特征蛋白为16.7kD及10.2kD两个组分,并完成14.6kD及10.2kD氨基酸测序。结论采用一维电泳结合抗原分析,方法简单,可以获取差示蛋白用于中药材基原鉴别。 展开更多
关键词 海蛇 鉴别 差示蛋白显示 种属特征蛋白 Western—blot
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