基于病菌孢子捕捉和real-time PCR技术的田间空气中小麦白粉病菌孢子动态监测及病情估计模型研究

利用Burkard定容式孢子捕捉器结合real-time PCR定量技术,分别对种植高抗、中感和高感白粉病小麦品种的田间空气中白粉病菌分生孢子浓度进行监测,结果表明,real-time PCR定量与传统的显微观察计数两种方法测得的孢子浓度呈显著正相关(P≤0.01),且两种病菌孢子计数方法在同一抗性品种上监测到的孢子浓度动态相近。此外,两种方法测得的孢子浓度与各气象因子的相关性分析结果一致,空气中的白粉病菌孢子浓度主要与空气相对湿度显著正相关。在此基础上,利用两种方法测定的田间空气中白粉病菌孢子浓度分别建立了基于累积孢子浓度的田间病情估计模型。分析发现,基于两种孢子浓度测定方法建立的病情估计模型间无显著性差异,表明real-time PCR定量技术测定的孢子浓度在构建白粉病病情估计模型上具有一定可行性。该结果为real-time PCR定量技术与病菌孢子捕捉技术相结合用于小麦白粉病的监测和预测提供理论依据。

宫颈癌组织中端粒酶活性测定

目的 探讨端粒酶活性在子宫颈癌组织发生发展中的作用及临床应用价值 .方法 采用 PCR- TRAP微孔杂交法检测 45例子宫颈癌组织标本和 8例正常的子宫颈组织的端粒酶活性 .结果 45例宫颈癌组织中端粒酶阳性表达率为86 .6 % ,其中宫颈癌 期 2 7例 ,阳性率 77.7% ,宫颈癌 期12例 ,阳性率 10 0 % ,宫颈癌 期 6例 ,阳性率 10 0 % . 8例正常宫颈组织中未检测出端粒酶阳性者 .结论 端粒酶活性表达在子宫颈癌的发生发展中起重要的作用 ,端粒酶活性检测对指导宫颈癌的诊断和治疗具有重要意义 .

端粒酶活性在卵巢肿瘤组织中表达的临床意义

目的 :研究测定端粒酶活性在诊断和预测卵巢肿瘤方面的意义。方法 :应用PCR -TRAP法检测 30例卵巢肿瘤组织 (良性组织 8例 ,交界性或低度恶性肿瘤 7例 ,恶性肿瘤 15例 )的端粒酶活性。结果 :8例卵巢良性组织中均未测出端粒酶活性 ,7例卵巢交界性或低度恶性肿瘤组织中 ,4例 (5 7% )端粒酶活性阳性表达 ,15例卵巢恶性肿瘤组织中 ,14例 (93.3% )端粒酶活性阳性表达。卵巢上皮性恶性肿瘤组织中 ,在组织类型、组织学分级及肿瘤分期之间无显著性差异。结论 :端粒酶活性的检测不仅有助于卵巢肿瘤的诊断和鉴别诊断 ,且有助于预测患者的预后。

大剂量孕激素治疗对子宫内膜腺癌端粒酶活性的影响

目的:探讨大剂量孕激素治疗对子宫内膜腺癌端粒酶活性的影响。方法:应用大剂量孕激素的治疗作用对子宫内膜腺癌患者20例,用端粒酶PCR-TRAP ELISA方法检测治疗前、后癌组织端粒酶活性的变化。结果:孕激素治疗前、后子宫内膜腺癌组织端粒酶活性均值分别为0.3636(0～1.11)、0.1134(0～0.556),治疗后子宫内膜腺癌端粒酶活性显著降低(P<0.01)。结论:大剂量孕激素治疗子宫内膜腺癌的作用与癌组织端粒酶活性降低有关。

头颈部恶性肿瘤的端粒酶活性检测

目的 检测头颈部恶性肿瘤组织端粒酶活性的阳性表达率 ,分析其与临床分期、病理类型、分化程度等临床因素的关系。方法 用改良的 PCR- TRAP法对 36例头颈部肿瘤组织、正常组织和癌旁组织分别进行端粒酶活性检测。结果 定性分析发现 36例头颈部恶性肿瘤组织中有 88.89%的阳性表达 ,癌旁组织有 13.89%的阳性表达 ,正常组织为 2 .78%。肿瘤组织与其对照的组织间端粒酶阳性表达率有显著差异 (P<0 .0 1) ;对 30例磷癌不同临床分期、病理类型和分化程度的肿瘤组织进行端粒酶活性检测 ,其阳性表达虽然存在差异 ,但无统计学意义(P>0 .0 5 )。结论 端粒酶的激活与头颈部恶性肿瘤的发生、发展可能密切相关 ;

端粒酶检测在31例胸腹水诊断中的意义探讨

目的 探讨端粒酶检测在胸腹水脱落细胞诊断中的临床意义。方法 采用聚合酶链反应 端粒末端重复序列 (PCR TRAP)技术结合ELISA法检测胸腹水脱落细胞的端粒酶。结果 在恶性胸腹水中端粒酶阳性率显著高于染色体多倍体检查的阳性率 (P <0 0 1)。结论 胸腹水端粒酶检测可提高单纯细胞学检查的敏感性、特异性 ,在恶性肿瘤的诊断上为临床提供依据。

宫颈上皮内瘤样病变中端粒酶活性的表达及意义

目的 :探讨宫颈上皮内瘤样病变中端粒酶活性表达及意义。方法 :采用PCR -TRAP方法检测 2 3例CIN和 2 0例正常宫颈组织的端粒酶活性。结果 :在 2 3例CIN中 ,10例端粒酶表达阳性 ,2 0例正常宫颈组织中无 1例有端粒酶表达。两组间比较 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。结论 :端粒酶激活与CIN发生发展密切相关 ,并且可能成为CIN预后的标记物。

鼻咽脱落细胞端粒酶活性的检测在鼻咽癌诊断中的价值

目的:探讨检测鼻咽脱落细胞的端粒酶活性在鼻咽癌诊断中的价值。方法:采用PCR-TRAP方法检测60例鼻咽癌组织及其鼻咽脱落细胞的端粒酶活性。结果:60例经病理确诊的鼻咽癌组织有51例端粒酶阳性,其脱落细胞有49例端粒酶阳性,阳性率分别分别为85%(51/60)和82%(49/60),二者比较无显著差异(P>0.05)。鼻咽癌组织及其脱落细胞端粒酶活性的阳性率与鼻咽癌的临床分期无关。鼻咽脱落细胞的端粒酶活性检测结果与脱落细胞学检查结果比较表明,60例鼻咽癌患者其脱落细胞学检查只有5例阳性,而端粒酶活性检测有49例呈阳性,而且脱落细胞学阳性者的端粒酶活性检测均为阳性。结论:采用PCR-TRAP方法可以检测鼻咽癌脱落细胞标本中的端粒酶活性,鼻咽部脱落细胞端粒酶活性的检测在鼻咽癌诊断中有重要的辅助价值。

端粒酶反义寡核苷酸对体外培养ACC-M细胞的影响

目的 研究端粒酶反义寡核苷酸 (AS ODN)对体外培养人涎腺高肺转移性腺样囊性癌 (ACC M)细胞的影响。方法 采用细胞形态学观察及PCR TRAP端粒酶活性检测法来观察其形态学和端粒酶活性的变化。结果 反义寡核苷酸在转染ACC M细胞后 72小时内 ,其形态学改变不明显 ,其端粒酶活性明显受到抑制 (P <0 .0 1)。结论 AS ODN可显著抑制ACC M的端粒酶活性 ,提示AS ODN可抑制ACC M细胞的生长 ,抑制效果可能与AS ODN的剂量、转染效率等因素有关。

人肿瘤细胞株端粒酶催化亚基表达的检测

:目的 大量研究表明 ,端粒酶与肿瘤的发生发展密切相关 .因此 ,端粒酶有望作为肿瘤诊断和预后的标志物 .目前端粒酶活性检测普遍采用经典的端粒重复扩增法 (TRAP) .但TRAP法操作较繁 ,难于临床推广使用 .端粒酶催化亚基hTERT于 1997年被克隆 ,发现hTERTmRNA表达水平与端粒酶活性呈正相关 .并证实 ,hTERT是端粒酶活性不可或缺的核心部分 .因此 ,作者着重探讨检测hTERTmRNA表达水平以诊断肿瘤的可行性 .方法 培养收集 13种肿瘤细胞株 ,采集 1例正常人外周血样本 ,分别提取总RNA .取一定量总RNA ,采用RT PCR法进行hTERTmRNA表达分析 .结果 13种肿瘤细胞株hTERTmRNA表达均呈阳性 .而正常人血液细胞则无hTERTmRNA表达 .与TRAP法分析结果一致 .结论 RT PCR比TRAP法更具有灵敏、简便、需样本量少的特点 .可望成为恶性肿瘤辅助诊断工具 .

基于胃癌组织端粒酶活性检测的临床病理分析

目的通过检测胃癌组织中端粒酶活性,探讨端粒酶与胃癌的临床病理关系。方法选取2012年10月至2013年11月来我院治疗的60例胃癌患者为研究对象,采用PCR-TRAP方法检测胃癌组织及癌旁组织中端粒酶活性。结果胃癌组织中的端粒酶表达阳性率显著高于癌旁组织(P<0.05),胃癌不同分期之间端粒酶活性阳性率比较无统计学差异(P>0.05),低分化胃癌组织端粒酶活性阳性率明显高于高度分化和中度分化胃癌组织(P<0.05)。结论端粒酶活性上调可能参与胃癌的病理过程,端粒酶活性与胃癌临床病理分化程度有关。

电离辐射对肿瘤细胞端粒酶抑制作用的研究

运用多聚酶链扩增反应（PCR）及瑞粒重复扩增方法（TRAP）法检测肿瘤细胞Hela、A431和KB在电离辐射后hEST2功能区片段表达和瑞粒酶活性的变化。结果表明：肿瘤细胞hEST2功能区片段表达和端粒酶活性呈剂量依赖性下降；hEST2功能区片段的PCR法测定结果与TRAP法相符合；提示电离辐射对瑞粒酶活性的抑制是肿瘤放射治疗的重要机制之一。端粒酶活性检则可能成为评估电离辐射对肿瘤杀伤作用的新指标。

肺癌组织端粒酶活性的定量研究及其临床意义

目的 研究肺癌组织中端粒酶活性的表达及其临床意义。方法 采用定量放射端粒重复序列扩增法 (TRAP)检测 74例肺组织中 ( 4 5例为NSCLC ,15例SCLC ,结核 7例 ,炎性假瘤 7例 )端粒酶的活性。结果 NSCLC端粒酶阳性率为 73 .3 % ,且活性较弱 ( 172TPG) ,SCLC端粒酶的阳性率为 93 .3 % ,且活性较强 ( 2 88TPG)。结核与炎性假瘤端粒酶活性全为阴性。SCLC端粒酶活性显著高于NSCLC(P <0 .0 5 ) ,且酶的活性水平与肺癌组织分化程度、肿瘤大小、淋巴结转移及临床分期有密切关系 (P <0 .0 5 )。结论 端粒酶可能是判断肺癌预后不良的指标之一。

子宫颈癌端粒酶活性研究

:目的 探讨端粒酶活性与宫颈癌的相关性以及与其发生发展的关系。方法 采用改良的银染端粒重复序列扩增方法 (TRAP)对 2 8份子宫颈癌组织、8份相关淋巴结组织、10份正常子宫颈组织、6份宫颈不典型增生组织的端粒酶进行检测。结果 10份正常子宫颈组织中均未检测出端粒酶活性 ,6份宫颈不典型增生组织中 4份端粒酶活性表达阳性 ,2 8份子宫颈癌组织中 2 6份有端粒酶活性表达。结论 端粒酶的激活在宫颈癌起源过程中可能是较早的事件 ,并且和其发生发展有关 。

胸腺瘤组织中端粒酶活性检测的意义

目的:观察胸腺瘤组织及瘤旁组织端粒酶的活性,探讨其临床意义。方法:用改良的TRAP法检测18例侵袭性胸腺瘤、39例非侵袭性胸腺瘤和瘤旁组织以及20例正常胸腺组织端粒酶活性,用Tecan酶免分析仪连续测定其450-630nm的OD值。结果:18例侵袭性胸腺瘤及其瘤旁组织端粒酶阳性率及活性强度OD明显高于非侵袭性胸腺瘤。结论:端粒酶的检测有可能作为判别胸腺瘤良、恶性的新指标。

端粒酶活性在肺癌患者痰液脱落细胞中表达的临床价值研究

目的 探讨端粒酶活性在肺癌患者痰液中表达的临床意义。方法 运用端粒酶PCR 酶联免疫吸附测定法 (ELISA)检测了 45例肺癌、2 5例肺部良性疾病及 2例转移性肺癌患者痰液标本中的端粒酶活性。结果 肺癌患者痰液标本中端粒酶活性阳性率为 55.6 % (2 5/ 4 5) ,肺部良性疾病患者的痰液标本中端粒酶活性阳性率为 2 8.0 % (7/ 2 5) ,二者经统计学处理有显著性差异 (χ2 =5 .62 8,P <0 .0 5)。结论 检测肺癌患者痰液中端粒酶活性检测有助于肺部良恶性疾病的诊断和鉴别诊断。

植物基因启动子的克隆方法及其应用

植物基因的表达调控已成为分子生物学研究热点,启动子是基因表达调控的重要顺式元件,启动子的克隆对于研究基因表达调控、构建基因工程载体、表达目的蛋白有着重要的意义。启动子克隆的方法很多,从常用的启动子陷阱技术筛选启动子到PCR方法的应用,此后相继问世的一些基于PCR的克隆启动子技术,如载体锚定PCR、反向PCR、接头PCR、交错热不对称PCR等,为克隆启动子提供了更可靠,更合理的方法。本文着重介绍了几种植物基因启动子的克隆方法,分析了它们的优缺点,并展望了今后的研究前景。

细胞端粒酶活性的定性及定量分析

对Ｋｉｍ等的端粒重复序列ＰＣＲ扩增法加以改进，用ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ染色代替ＥＢ染色，建立了细胞端粒酶活性的ＰＣＲ－ＴＲＡＰ定性分析法；同时，用γ－３２Ｐ－ＡＴＰ标记ＴＳ引物，加入内对照ＴＳＫ１，建立了ＰＣＲ－ＴＲＡＰ定量分析法。利用上述方法，对１２株人肿瘤或非肿瘤细胞株进行端粒酶活性分析，结果发现，所有被检细胞株均呈端粒酶阳性，但其活性水平在不同细胞株间有较大差异（２３～６５２ＴＰＧｕｎｉｔｓ）。作者认为，细胞端粒酶活性ＰＣＲ－ＴＲＡＰ分析法，特别是定量分析法的建立，为我们真实准确地了解细胞端粒酶活性水平提供了可能，亦为下一步通过抑制端粒酶活性诱迫肿瘤细胞进入程序性死亡的肿瘤基因治疗研究奠定了基础。

TRAP—PCR ELISA及银染法检测肺刷落细胞中端粒酶活性

以非同位素法检测肺刷落细胞中端粒酶活性及在肺癌中的诊断价值。方法采用端粒酶重复放大程序ＴＲＡＰ（ＴｅｌｏｍｅｒａｓｅＲｅｐｅａｔＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎＰｒｏｔｏｃｏｌ）ＰＣＲＥＬＩＳＡ法及聚丙烯酸胺凝胶电泳一银染法，对８０例支气管肺刷落细胞样本进行定性及定量端粒酶活性检测。结果肺癌患者患侧端粒酶定性检测阳性率为８８．６％，其对侧部位为２２．７％，肺炎阳性率为１１．８％。定量法检测肺癌病人的端粒酶活性水平（中位ＯＤ值：０．０８９）明显高于其对侧肺部（中位ＯＤ值：０．０２８）及肺炎组（中位ＯＤ值：０．０１４）。另外病理发现不典型增生者６例中有５例端粒酶阳性。结论应用该方法对肺刷落细胞中端粒酶活性的测定可以作为肺部恶性肿瘤诊断有效而敏感的手段之一。

膀胱癌组织中端粒酶活性检测的意义

目的探讨膀胱癌组织端粒酶活性与膀胱癌病理参数的关系及其临床意义。方法应用改良的TRAP法对40例膀胱癌组织、20例膀胱癌癌旁2cm膀胱组织和10例正常膀胱组织进行端粒酶活性的检测,用Yecan酶免分析仪连续测定其450～630nm的OD值。结果40例膀胱癌组织端粒酶活性强度OD值为0.567±0.251。正常膀胱组织无端粒酶活性存在。癌组织端粒酶活性强度OD值高于癌旁组织OD值(P<0.01)。端粒酶活性强度OD值Ⅲ级>Ⅱ级>Ⅰ级(P<0.05),OD 值在膀胱癌中随分级的增加呈上升趋势。浸润性膀胱癌端粒酶活性OD值明显高于浅表性膀胱癌端粒酶活性OD值(P<0.01)。淋巴结转移的膀胱癌端粒酶活性OD值明显高于无淋巴结转移的膀胱癌端粒酶活性OD值(P<0.05)。复发膀胱癌端粒酶活性OD值明显高于原发膀胱癌端粒酶活性OD 值(P<0.05)。结论膀胱癌组织中端粒酶阳性率及端粒酶活性强度OD值显著高于正常膀胱组织。端粒酶阳性率与膀胱癌病理分级、临床分期、淋巴结是否转移以及是否复发无关。但端粒醇活性强度OD值与膀胱癌的分级、分期、淋巴结转移以及复发有关。膀胱癌各病理参数中端粒酶阳性率经统计学比较差异无显著性,用端粒酶活性强度OD值作为比较可能更能显示其真正的临床意义。