AFLP-银染法检测植物基因组多态性

本文采用银染法代替同位素标记法,分别对玉米、菜花、番茄进行了AFLP分析。结果表明用银染法同样可得到清晰的AFLP指纹图谱,而且银染法具有无放射性,操作简便,实验成本低,实验周期短的优点。

改良W-S银染法与传统W-S银染法检测幽门螺杆菌的对比观察

目的对比观察改良W-S银染法与传统W-S银染法检测幽门螺杆菌的临床效果。方法对380例因消化道症状在本院就诊的患者采用改良W-S银染法与传统W-S银染法检测Hp,同时进行快速尿素酶试验(RUT)检查,RUT法和改良W-S法或传统W-S法之一同时阳性时诊断为标准Hp阳性。结果 380例患者中共318例检测出Hp感染,感染率为83.7%,其中消化性溃疡组的感染率最高,为98.1%,显著高于胃炎组和胃癌组的Hp感染率,差异有统计学意义(P<0.05);改良与传统W-S法检测Hp感染的阳性率分别为82.1%和79.2%,组间比较差异无统计学意义(P>0.05);改良W-S法的敏感性为98.1%,特异性为91.9%,符合率为97.1%;传统W-S法的敏感性为94.7%,特异性为85.5%,符合率为93.2%,组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论两种W-S银染法检测幽门螺杆菌的效果相近,与传统W-S银染法比较,改良W-S银染法试剂配制更为简便,组织着色牢固稳定,而且成本低廉,值得临床推广应用。

金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌

目的:建立金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌(土拉菌)的方法,评价其灵敏度、特异性、重复性及其应用。方法:以小鼠抗土拉菌脂多糖单克隆抗体作为捕获抗体包被硝酸纤维素膜、兔抗土拉菌多克隆抗体作为检测抗体标记胶体金,通过金标银染技术放大检测信号,建立金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌体系;评价该方法的灵敏度、特异性和重复性;以经荧光定量PCR定量的土拉弗朗西斯菌为检测对象,比较金标银染免疫渗滤法和免疫层析法。结果:金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌的最小检出量为1.0×103 CFU/mL,灵敏度高于免疫层析法;检测大肠杆菌、炭疽芽孢杆菌、布鲁菌和鼠疫耶尔森菌的结果均为阴性;密封保存的检测卡80 d内重复性良好,100 d后反应强度略有降低。结论:金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌敏感性高、特异性强、重复性好,且方便快捷,不需要仪器设备,可作为快速检测土拉弗朗西斯菌的首选方法。

影响家蚕AFLP-银染法的因素及其对策

AFLP(AmplifiedFragmentLengthPolymorphism)是一种新型的、有效的分子标记技术 ,近年来它与银染技术的结合进一步提高了它的实用性。作者根据长期的实验经验和教训 ,对影响AFLP-银染技术的一些因素如DNA的质量、酶切的效果、引物和接头的设计等进行了分析 ,初步总结出AFLP -银染技术关键之处在于模板DNA的准备和酶切以及引物的选择。PCR扩增、电泳和银染检测对图谱的清晰度和分辨率也有很大的影响。并针对这些因素进行了相应对策的初步探讨。

应用PCR－SSCP银染法检测结肠癌组织中p53基因突变

应用ＰＣＲ－单链构象多态分析（ＳＳＣＰ）银染技术分析了２１例结肠癌和正常结肠粘膜组织ｐ５３基因第五～第八外显子。发现了９例（４３％）的结肠癌组织出现了反映ｐ５３基因突变的异常条带。结果显示ｐ５３基因的突变与结肠癌的发生和发展有关。应用非同位素的银染方法，能简单、快速检测基因多态性，并避免同位素的危害。

六胺银滴染法在真菌检测中的应用

六胺银染色是特殊染色中常用的真菌检测方法之一,其敏感性高且能够清晰的显示真菌的形态,是组织病理学检测真菌的重要手段[1]。以往六胺银染色多采用高身5片立式染缸浸染法,但该方法浪费试剂,并且受染色缸清洁度的影响,易出现银镜反应和银沉淀污染[1-2]。本科室采用了一种滴染法,效果稳定,且可节省试剂,现介绍如下。

利用正交设计对简易银染法的优化研究

用正交设计研究了DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)凝胶的简易银染中各因素对银染效果的影响,通过PCR技术扩增了山西白猪第六世代15个耳组织基因组的两条微卫星DNA序列,这些序列经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离和500ladder Marker标记跑板后,利用正交法设计简易银染法各因素的组合,对凝胶进行染色。试验结果表明,染色液用AgNO3浓度0.10%、显色用含NaOH1.50%、甲醛0.40%混合液、水温30℃时对PAGE凝胶染色的效果最好。

PAGE银染法显示变形链球菌AP-PCR指纹图的可行性研究

目的 :探讨PAGE银染法显示变形链球菌的AP PCR指纹图的可行性。方法 :将 2 0 0个临床分离株的AP PCR扩增产物分别进行PAGE银染和琼脂糖凝胶电泳EB染色 ,比较 2种图象的清晰度和对基因型的分辨能力 ,计算结果一致性的Kappa值。 结果 :结果一致性的Kappa值为 1,表明PAGE银染和琼脂糖凝胶电泳EB染色一样可显示变形链球菌的AP PCR指纹。而且PAGE由于可显示多个细小的条带 ,较琼脂糖凝胶电泳EB染色有更高的清晰度 ,可更为清晰地显示出变形链球菌的AP PCR指纹图。结论 :PAGE银染法可以显示变形链球菌的AP PCR指纹图。

一种显示肾组织结构的新染色法——酸性复红银染法

对肾小球和其他肾脏疾病的诊断,主要依赖于对活检标本的光镜、电镜观察,或利用免疫细胞化学技术进行诊断,但电镜及免疫组化方法并非在所有病理实验室都可施行,大部分诊断仍需依赖常规福尔马林固定、石蜡包埋组织进行普通染色和一系列特殊染色.如过碘酸雪夫氏反应,Masson染色法、地衣红弹性蛋白染色和银染法等.许多肾小球的异常取决于光镜的鉴别,因此,肾组织各种结构的清晰显示与分辨至关重要,我们将常规染色与一些特殊染色相结合,建立一种显示肾组织各种结构的染色方法.

用PCR-SSCP-银染法检测苯丙酮尿症PAH基因外显子11的点突变

目的：研究内蒙古地区经典型苯丙酮尿症(PKU)苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因突变的特点和频率，以提高该地区苯丙酮尿症(PKU)的基因诊断率。方法：应用PCR-SSCP-银染法和DNA直接测序的方法，对22例内蒙古地区PKU患者苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因外显子11进行了检测。结果：检出一种已知突变Y356X(TAC-TAA)，突变频率为13．6％。结论：内蒙古地区PKU患者PAH基因外显子11的突变频率均高于我国的其它北方人群，也高于云南PKU患者的突变频率，这为内蒙古地区PKU患者PAH基因分析和产前诊断提供了科学依据。

银染法观察甲状腺激素人工神经促进周围神经再生的研究

目的 用Bielschowsky神经纤维银染法观察再生有髓神经通过PDLLA T3 支架材料的情况及大鼠有髓再生神经纤维的数量。方法 SD大鼠 5 4只 ,分成PDLLA T3 、PDLLA组和自体移植组 3组 ,同只大鼠右侧坐骨神经为正常对照。培养新生大鼠坐骨神经的雪旺细胞 ,将其种植在PDLLA T3 和PDLLA材料上备用 ,每只大鼠左侧坐骨神经经手术造成 1cm缺损 ,然后分别用以上 3组材料进行移植修复 ,在伤后 2周、1个月、2个月 3个时相点收集标本进行神经银染 ,染色结果通过图象分析仪进行分析 ,统计数据行t检验。结果 伤后 2周时各组均见新生的神经纤维通过神经移植段 ,各组之间无显著性差异 ,直到伤后 1个月 ,2个月后 ,PDLLA T3 组好于PDLLA组 ,差异有显著性 ,P <0 .0 5。自体移植组髓神经增加明显 ,高于其他 2组 ,差异有显著性 ,P <0 .0 5 ,但低于正常值。结论 Bielschowsky神经纤维银染法观察大鼠神经再生效果满意 ,新生的神经纤维可以通过PDLLA T3 ,效果好于PDLLA。

PCR-SSCP银染法在检测错配修复基因突变中的应用

目的建立稳定、有效地检测错配修复(Mismatch Repair,MMR)基因突变的方法。方法对30例肠癌及癌旁正常组织标本分别提取DNA,设计错配修复基因hMSH1引物,应用聚合酶链式反应进行PCR扩增,10%聚丙稀酰胺凝胶电泳PCR产物,银染等技术检测分析错配修复基因hMSH1突变;hMSH1抗体为一抗,免疫组化法检测30例肠癌及例癌旁正常组织石蜡切片中hMSH1蛋白的表达。结果30例肠癌组织中发生错配修复基因hMSH1突变4例(发生率13.3%),10例癌旁正常组织中无一例发生错配修复基因hMSH1突变;免疫组化检测到30例肠癌组织中有6例hMSH1蛋白表达阴性,其中hMSH1基因突变的组织hMSH1蛋白均未表达,正常组织中hMSH1蛋白表达正常。结论PCR-SSCP银染法是检测错配修复基因突变的简捷、稳定、有效的方法之一。可成为早期诊断肿瘤发生的分子手段。在肿瘤的早期治疗中具有重要作用。

显示小脑普肯耶细胞的染色法

①目的 探讨显示小脑普肯耶细胞形态结构的染色方法。②方法 Golgi镀银法显示普肯耶细胞 ,并与常规的苏木精 伊红染色法相比较。③结果 采用Golgi镀银制片法 ,能够显示出小脑普肯耶细胞的胞体、树突、轴突及树突棘的特殊形态结构 ,普肯耶细胞呈扇形 ,其形态结构十分典型 ,清晰可见。而常规的苏木精 伊红染色只能显示普肯耶细胞的胞体。④结论 Golgi镀银法是显示小脑普肯耶细胞形态结构的理想染色方法。

幽门螺杆菌感染三种检测方法评价

目的 探讨酶免疫测定法检测幽门螺杆菌粪便抗原 ( HPSA)在诊断 ( HP)感染中的价值。方法 对 89例患者用快速尿素酶试验及组织学 Warthin- Starry银染法检测 ,同时用酶免疫测定法检粪便标本HPSA,对三种方法进行初步评价。结果 粪便酶联免疫法的敏感性为 96.7% ,特异性为 96.4% ,阳性预测值为 98.3% ,均高于组织学方法。结论 酶联免疫法检测粪便中 HPSA敏感性、特异性高 ,检测方法简单 ,取材方便 ,适合幽门螺杆菌感染的筛选与诊断 ,也可用于抗 HP治疗后疗效的监测及流行病学调查。

印迹基因PEG10在胃癌中的表达及其与幽门螺杆菌感染的关系

目的探讨印迹基因PEG10在胃癌组织中的表达特点及其与幽门螺杆菌(Hp)感染的关系。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测40例胃癌、癌旁组织中印迹基因PEG10的mRNA水平;采用免疫组织化学染色技术及Warthin-Starry银染法检测42例胃癌、癌旁组织及6例正常胃组织中PEG10蛋白的表达及Hp感染情况。结果RT-PCR结果显示20例胃癌组织中9例(45.0%)PEG10mRNA表达,对应的癌旁组织仅有2例(10%)表达;免疫组织化学染色结果显示42例胃癌组织中22例(52.38%)PEG10蛋白表达阳性,对应的癌旁组织仅有5例(11.90%)PEG10蛋白表达阳性,正常胃组织无PEG10蛋白表达;Hp银染法结果显示42例胃癌组织中25例(59.52%)为Hp感染阳性,癌旁组织20例(47.62%)Hp感染阳性;22例PEG10阳性表达胃癌组织中20例Hp感染阳性。结论PT-PCR结果与免疫组织化学染色结果具有一致性,即PEG10mRNA及蛋白在胃癌组织和癌旁组织中的表达率比较差异有显著性(P<0.05);PEG10在胃癌组织中的表达与Hp感染呈正相关(P<0.05)。

中国鲤科鱼类染色体核仁组织区进化的异质性及特殊性

核仁组织区（NORs）是具有重要功能的染色体区域.NORs的经典显示方法是硝酸银染色。但是硝酸银染色的一个缺陷是不能显示失活的NORs。最近国外许多学者的研究表明,GC碱基特异性DNA结合荧光染料色霉素A?