cAMP/PKA-pCREB信号通路在早期康复训练改善脑梗死患者神经功能中的作用

目的 探讨cAMP/PKA-pCREB信号通路在早期康复训练改善脑梗死患者神经功能中的作用。方法 收集2020年3月至2022年3月间在遵化市人民医院接受治疗的脑梗死康复期患者228例作为研究对象,参照随机数表法将所有入组患者分为对照组、观察组各114例,对照组患者接受康复期常规药物干预,观察组患者在对照组药物使用基础上加入早期康复训练干预,持续干预8周后评估结果。对比两组患者的干预后简易Fugl-Meyer评分法(FMA)、改良Barthel指数(MBI),血清神经功能相关因子[神经元特异性烯醇化酶(NSE)、脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)]水平,外周血单个核细胞(PBMC)c AMP/PKA-pCREB信号通路相关分子(c AMP、PKA、pCREB)表达水平的差异。结果 干预8周后,观察组患者的FMA上肢评分、FMA下肢评分、MBI评分值高于对照组患者,差异有统计学意义(t=17.710、10.134、7.188,P<0.05);血清NSE水平低于对照组患者,BDNF、NGF水平高于对照组患者,差异有统计学意义(t=8.588、7.229、5.535,P<0.05);PBMC的cAMP、PKA、pCREB mRNA表达量高于对照组患者,差异均有统计学意义(t=4.996、1.868、3.320,P<0.05)。结论 早期康复训练可能通过激活cAMP/PKA-pCREB信号通路优化肢体功能、减轻脑损伤,是一种较为理想及必要的干预手段。

七氟醚-N2O麻醉对青年小鼠空间学习和记忆功能及pCREB和Egr1表达的影响

目的研究七氟醚-N2O麻醉后青年小鼠的空间学习和记忆能力以及海马磷酸化环腺苷酸应答元件结合蛋白(phosphorylated cyclic AMP response element-binding protein,pCREB)和早期生长反应因子1(early growth response factor 1,Egr1)的表达,并与老年小鼠进行比较。方法12只3月龄和12只18月龄小鼠随机分为对照组和实验组,每组各6只。48 h后进行为期6天的获得训练。获得训练结束后24 h进行空间探索实验,实验结束后15 min收集两组小鼠的海马组织,通过Western blot和实时定量PCR方法评估pCREB和Egr1的表达水平。结果未见麻醉损害青年小鼠的空间学习和记忆功能以及海马中pCREB和Egr1的表达水平,麻醉组与对照组比较差异均无统计学意义;而老年小鼠Sev+N2O组在麻醉后第4、5、6天逃逸潜伏期显著长于对照组(P<0.05),两组小鼠游泳速度差异无统计学意义;在空间探索实验中,Sev+N2O组目标象限路程百分比和时间百分比显著低于对照组(P<0.01);海马中pCREB和Egr1的表达水平均较对照组显著下降(P<0.05)。结论七氟醚-N2O麻醉对青年小鼠的空间学习记忆能力没有损害,也不影响海马中pCREB和Egr1的表达,但会对老年小鼠造成损害。

cAMP/PKA⁃pCREB信号通路在早期康复训练改善脑卒中患者神经功能中的作用

目的研究环腺苷酸(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)⁃磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(pCREB)信号通路在早期康复训练改善脑卒中患者神经功能中的作用。方法将缺血性脑卒中患者分为进行早期康复训练的观察组、常规康复训练的对照组,干预前及干预后1周时采用简易智能精神状态检查量表(MMSE)、蒙特利尔认知评估量表(MoCA)、Fugl⁃Meyer运动功能量表(FMA)、Berg平衡量表(BBS)评价神经功能,检测血清cAMP、PKA、肿瘤坏死因子⁃α(TNF⁃α)、白介素⁃1β(IL⁃1β)、白介素⁃6(IL⁃6)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化力(TAOC)、B淋巴细胞瘤⁃2(Bcl⁃2)、Bcl⁃2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶⁃3(Caspase⁃3)含量及外周血pCREB表达水平。结果两组干预后的MMSE、MoCA、FMA、BBS评分均高于组内干预前且观察组高于对照组,差异有统计学意义(t=5.099、3.778、2.658、3.502,P<0.05),血清cAMP、PKA及外周血pCREB表达水平均高于组内干预前且观察组高于对照组,差异有统计学意义(t=3.858、3.958、8.815,P<0.05),血清TNF⁃α、IL⁃1β、IL⁃6含量均低于组内干预前且观察组低于对照组,差异有统计学意义(t=10.338、9.395、5.936,P<0.05),血清MDA含量低于组内干预前且观察组低于对照组、SOD及TAOC含量高于组内干预前且观察组高于对照组,差异有统计学意义(t=5.272、3.714、4.753,P<0.05),血清Bax及Caspase⁃3均低于组内干预前且观察组低于对照组,Bcl⁃2含量高于组内干预前且观察组高于对照组,差异有统计学意义(t=18.669、11.346、9.903,P<0.05)。结论早期康复训练改善脑卒中患者神经功能的作用与激活cAMP/PKA⁃pCREB信号通路并抑制炎症反应、氧化应激、细胞凋亡有关。

慢性吗啡处理对大鼠交感神经节pCREB和CREB mRNA表达的影响

目的观察慢性吗啡(Mor)处理对大鼠交感神经节-颈上神经节(SCG)环腺苷酸反应元件结合蛋白(cAMP responseelement binding protein,CREB)磷酸化和mRNA表达的影响。方法 Wistar大鼠随机分成4组(正常对照组、吗啡急性给药组、吗啡依赖组、吗啡戒断组),免疫组织化学方法及RT-PCR法分别检测磷酸化的CREB(phosphorylated CREB,pCREB)和CREB mRNA在SCG中的表达。结果 (1)与正常对照组相比,吗啡急性给药组大鼠SCG中pCREB含量明显降低(P<0.05);(2)吗啡依赖组大鼠SCG中pCREB含量回到正常对照组水平,并有增高趋势(与正常对照组比较,P>0.05;与吗啡急性给药组比较,P<0.01);(3)吗啡戒断组大鼠SCG中pCREB含量明显高于正常对照组(P<0.01);(4)各组大鼠SCG的CREBmRNA表达无差异(P>0.05)。结论慢性吗啡处理大鼠交感神经节CREB磷酸化水平存在适应性上调现象。

MicroRNA-134/CREB/pCREB通路在癫痫中的表达及意义

目的探讨miR-134、CREB、pCREB在癫痫大鼠海马及难治性癫痫患者颞叶脑组织中的表达及意义。方法难治性癫痫患者及非癫痫对照组颞叶组织、氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠及空白对照组海马组织中,应用实时荧光定量PCR技术检测microRNA-134(miR-134)的表达,用Western blot方法检测CREB及p CREB的表达,用免疫组织化学方法检测人脑颞叶皮质及大鼠海马区CREB、p CREB的表达。结果与对照组相比miR-134表达在难治性癫痫患者中明显降低(P<0.05),在癫痫模型组中点燃后3、7、14、60 d明显降低(P<0.05),1 d与30 d表达降低较对照组差异无显著性(P>0.05);癫痫模型组CREB在3、7、14、60 d时间点明显升高(P<0.05)、pCREB各时间点表达均高于空白对照组(P<0.05)。结论难治性癫痫患者颞叶皮质及癫痫动物海马中miR-134表达下降,CREB、pCREB表达升高,提示其可能在癫痫发生发展机制中起重要作用。

薰衣草精油对抑郁症大鼠海马、杏仁核pCREB及c-fos表达影响的研究

目的探讨薰衣草精油对抑郁大鼠海马及杏仁核pCREB及c-fos的表达的影响及其对抑郁行为及学习记忆能力的改善作用。方法24只SD大鼠随机分为空白对照组(n=8)、抑郁对照组(n=8)、抑郁香薰组(n=8)。抑郁对照组和抑郁香薰组采用孤养加慢性不可预见性的温和应激(Chronic Unpredictable Mild Stress,CUMS)诱导抑郁症模型,造模后抑郁香薰组给持续吸入雾化薰衣草精油水溶液1 h,每天3次,持续28 d;抑郁对照组及空白对照组给吸入雾化的蒸馏水1 h,每天3次,持续28 d。采用旷场实验、糖水偏爱百分比及体质量及摄食量测定大鼠抑郁行为,采用Morris水迷宫测试记录大鼠学习记忆能力。采用免疫组化检测脑组织c-fos和pCREB的表达。结果(1)各组大鼠造模前糖水消耗百分比、水平运动及垂直活动得分差异无统计学意义(P>0.05)。造模后,抑郁对照组和抑郁香薰组大鼠糖水消耗百分比、水平活动得分和垂直活动得分均明显降低(P<0.05),各组大鼠造模前摄食量差异无统计学意义(P>0.05),造模后抑郁对照组及抑郁香薰组摄食量低于造模前(P<0.05),雾化后4周抑郁对照组摄食量同造模后比较差异无统计学意义(P>0.05),雾化后第3周及第4周抑郁香薰组摄食量高于造模后(P<0.05),但仍低于造模前(P<0.05)。雾化后第3周及第4周抑郁香薰组大鼠摄食量高于抑郁对照组(P<0.05)。各组造模前定位巡航潜伏期差异无统计学意义(P>0.05),造模后抑郁对照组及香薰对照组潜伏期延长(P<0.05),雾化吸入后4周抑郁香薰组级抑郁对照组潜伏期较造模后减少(P<0.05),但仍长于造模前(P<0.05),且抑郁对照组长于抑郁香薰组(P<0.05)。抑郁对照组及抑郁香薰组造模后第三象限路程百分比、第三象限时间百分比及穿越平台次数均减少(P<0.05),抑郁对照组及抑郁香薰组间差异无统计学意义(P>0.05),雾化吸入4周后抑郁对照组及抑郁香薰组第三象限路程百分比、第三象限时间百分比及穿越平台次数较造模后均有提高(P<0.05),且抑郁香薰组高于抑郁对照组(P<0.05)。(2)与空白对照组相比,抑郁对照组海马及杏仁核区pCREB表达均明显减弱,差异有显著统计学意义(P<0.01);与抑郁对照组相比,抑郁香薰组海马及杏仁核区pCREB的表达均明显增加,差异有显著统计学意义(P<0.05);与空白对照组相比,抑郁对照组海马及杏仁核区c-fos表达均明显减弱差异有统计学意义(P<0.05);与抑郁对照组相比,抑郁香薰组杏仁核区c-fos表达高于抑郁对照组,差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论薰衣草精油芳香疗法能够上调抑郁症模型大鼠海马和杏仁体pCREB及c-fos的表达,并改善大鼠学习记忆能力。

奥曲肽对福尔马林诱导的大鼠痛反应和脊髓背角pCREB表达的抑制作用

目的:本研究旨在观察局部应用奥曲肽对福尔马林诱发的痛反应以及脊髓背角磷酸化的c AMP反应元件结合蛋白(phosphorylated c AMP response element binding protein,p CREB)表达的影响。方法:实验采用行为学观察和外周神经单纤维记录的方法,研究足底注射2.5%福尔马林50μl诱发的SD大鼠痛反应;同时采用免疫组织化学染色观察脊髓背角p CREB的表达。结果:福尔马林足底注射可以引起大鼠典型的双相性痛行为,敏化C和Aδ类初级传入单位,包括机械阈值的下降和传入放电率的增加(P<0.001);同时福尔马林注射还可以明显增加双侧脊髓背角p CREB的表达,以注射侧最为显著(P<0.05和P<0.01)。足底注射生长抑素类似物奥曲肽(20μmol/L,50μl)可明显降低福尔马林诱发的第二相特异性伤害行为评分,减少C和Aδ类单位的传入放电率;同时局部应用奥曲肽还可以部分抑制福尔马林诱发的脊髓背角p CREB表达增加。结论:结果提示,局部应用奥曲肽可以显著抑制福尔马林诱发的痛反应,脊髓背角p CREB参与了此过程。

大鼠局灶性脑缺血后LMO4和pCREB的表达

目的探讨大鼠脑缺血再灌注后核转录因子LMO4和pCREB在缺血半暗带的表达规律及与凋亡抗原的共表达。方法将雄性SD大鼠随机分为假手术组及缺血再灌注1h、3h、6h、12h、24h、48h组,线栓法制备局灶性大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,缺血2h后恢复再灌住,采用Western blot法、免疫荧光法检测LMO4、pCREB在缺血半暗带的表达变化,免疫荧光双标观察LMO4、pCREB的表达定位及与TUNEL阳性细胞之间的共表达情况。结果与假手术组比较,缺血侧半暗带皮层组织LMO4蛋白水平再灌后3h开始升高,24h达高峰,48h明显下降,pCREB蛋白水平6h开始升高,24h达高峰,48h逐渐下降(P<0.05或P<0.01);LMO4、pCREB阳性细胞数再灌后6h开始升高,24h达高峰,48h显著下降(P<0.05或P<0.01);免疫荧光双标显示LMO4和pCREB仅表达于神经元,LMO4主要表达于细胞核,少量位于细胞浆,pCREB仅表达于细胞核;LMO4与pCREB完全共表达;LMO4、pCREB均与TUNEL阳性细胞呈分离表达。结论脑缺血再灌后诱导LMO4、pCREB表达升高,并呈动态变化趋势,可能为神经细胞对缺血再灌注损伤的一种内部适应性保护机制。

强迫游泳后大鼠杏仁体中谷氨酸神经元中的pCREB水平显著上调(英文)

杏仁体在情绪性学习记忆及情绪行为中起关键性作用,而这些功能是由杏仁体的三个主要亚核(外侧核、基底外侧核和中央核)执行完成,并与一种转录因子-环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)密切相关。CREB在多种神经活动中都会被激活成为磷酸化的CREB(pCREB)。为探讨杏仁体中哪种神经元表达pCREB以及在情绪性应激刺激后不同时间段内杏仁体中pCREB水平的变化,本试验对大鼠用强迫游泳作为情绪性应激刺激;以抗pCREB、抗谷氨酸(Glu)和抗小清蛋白(PV)抗体标记了杏仁体中的神经元;用Westernblot法测定了杏仁体中的pCREB蛋白水平。结果显示,pCREB表达于谷氨酸免疫阳性神经元中,而不在含小清蛋白的神经元中表达;而pCREB的表达水平在强迫游泳后显著提升。本结果提示,pCREB是通过谷氨酸神经元行使其对情绪过程的调解功能;情绪性刺激后pCREB的表达水平显著提升以应对应激性刺激。

培养大鼠海马脑片模拟痫性发作后pCREB在细胞凋亡中的作用的初步研究

目的:观察痫性发作对体外培养海马脑片的损伤作用,研究细胞磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(Phosphorylated cAMP response element-binding protein,pCREB)对损伤海马神经元的作用。方法:以培养11 d的海马脑片为研究对象,随机分为3组:(1)正常对照组:正常海马脑片培养液培养至14 d。(2)痫性发作模型组:正常海马脑片培养液培养至14 d,更换为含匹罗卡品(0.5 mmol/L)的完全培养液作用1 h后终止培养。(3)抗pCREB抗体干预组:用含pCREB抗体的海马脑片培养液(pCREB抗体终浓度为5μg/ml)预培养3 d,换为含匹罗卡品(0.5 mmol/L)的完全培养液作用1 h后终止培养。采用TUNEL原位末端标记法检测各组培养海马脑片凋亡细胞;免疫组化染色观察海马脑片神经元内pCREB蛋白的表达变化。结果:(1)痫性发作模型组:海马脑片CA1区发生凋亡的细胞(95.44±14.30)显著多于对照组(41.30±9.30)(P<0.05);pCREB表达(201.36±19.31)较对照组(75.12±13.71)显著升高(P<0.05)。(2)抗pCREB抗体干预组:海马脑片CA1区发生凋亡的细胞(140.88±18.32)较痫性发作模型组显著增多(P<0.05);pCREB表达(172.60±17.68)较对照组显著升高、较模型组显著降低(P<0.05)。结论:(1)痫性发作可以增加体外培养海马脑片神经细胞凋亡发生,加重神经元损伤。(2)痫性发作后海马脑片神经细胞CREB的磷酸化增强,阻断CREB的磷酸化可导致神经细胞凋亡加重。

不同频率电项针对AD模型大鼠空间记忆能力及海马区pCREB1和BDNF的影响

目的:探讨不同频率电项针对AD模型大鼠学习记忆影响的机制。方法:50只雄性SD大鼠随机分为5组:空白组、假损伤组、模型组、2 Hz治疗组和50 Hz治疗组,每组10只。通过胃饲AlCl3和腹腔注射D-半乳糖制备模型。2 Hz治疗组和50 Hz治疗组选取风池、供血两穴,频率分别为2 Hz治疗和50 Hz治疗,疗程4周。以Morris水迷宫检测各组大鼠的空间学习记忆能力及免疫组化检测海马区pCREB1和BDNF的表达。结果:与模型组比较,2 Hz治疗组和50 Hz治疗组大鼠空间学习记忆能力明显改善(P<0.05),海马区pCREB1和BDNF阳性表达增强(P<0.05)。结论:不同频率电项针均能增加pCREB1和BDNF的阳性表达,从而改善AD空间记忆能力。

鞘内应用氯胺酮对吗啡耐受大鼠脊髓pCREB表达的影响

目的探讨鞘内注射氯胺酮对吗啡耐受大鼠脊髓pCREB表达的影响。方法24只雄性SD大鼠,随机均分成4组：C组（对照组）,鞘内注射0.9%生理盐水10μL;M组（吗啡组）,吗啡10μg;MK组（吗啡加氯胺酮组）,吗啡10μg加氯胺酮25μg;K组（氯胺酮组）,氯胺酮25μg。每日给药2次,连续8 d。用药前和用药后30 min通过甩尾实验观察各组热痛阈的变化。最后一次给药后次日处死动物,取L4～5脊髓,免疫组织化学染色,检测pCREB在大鼠脊髓背角的表达。结果随着用药天数增加,M组对吗啡逐渐耐受,到第7 d与C组比较无统计学差异（P〉0.05）。MK组最大镇痛效应百分比（MPE%）逐渐降低,但始终高于M组,尤其是用药后4～8 d（P〈0.01）。MK组与C组和K组在任何时点都有差异。M组脊髓背角pCREB蛋白表达明显高于其他组（P〈0.01）,MK组与C组比较升高不明显（P〉0.05）。结论氯胺酮有延缓吗啡耐受作用,机制与其抑制pCREB蛋白上调有关。

Ⅰ组代谢型谷氨酸受体拮抗药AIDA对吗啡耐受大鼠脊髓pCREB表达的影响

目的观察I组代谢型谷氨酸受体拮抗药AIDA对吗啡耐受大鼠脊髓背角磷酸化环腺苷酸反应元件结合蛋白(pCREB)表达的影响。方法24只雄性SD大鼠,随机均分为四组:吗啡耐受组(M组)、AIDA组(A组)、吗啡加AIDA组(MA组)和对照组(C组)。每组连续给药8d,每天2次。行为学上测定大鼠甩尾潜伏期(TFL)观察大鼠吗啡耐受情况,根据公式计算最大镇痛效应百分比(MPE%)。8d后处死动物,采用Westernblot方法测定并比较每组脊髓背角蛋白pCREB表达量。结果第1、2天M组和MA组MPE%明显高于C组(P<0·01),但随着用药天数增加,M组的MPE%逐渐下降,第7天后与C组比较差异无统计学意义。用药后第3至第8天MA组MPE%显著高于M组(P<0·01)。MA组各时点MPE%均显著高于A组和C组(P<0·01)。M组脊髓背角pCREB表达量明显高于其他三组(P<0·01)。MA组pCREB表达量亦较C组和A组升高(P<0·05)。结论吗啡耐受时pCREB表达上调。AIDA可以延缓吗啡耐受形成,其机制与抑制pCREB表达有关。

奥曲肽在蜜蜂毒疼痛模型中的抗伤害感受作用及对背根神经节pCREB表达的影响

目的利用伤害感受敏感型DA大鼠研究奥曲肽(OCT)在蜜蜂毒(BV)疼痛模型中的抗伤害感受作用以及背根神经节(DRG)内磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(pCREB)表达的变化,为生长抑素受体(SSTR)的外周镇痛作用提供理论依据。方法于DA大鼠右爪足底中间部位,用50μl微量注射器皮下注射BV(0.1 mg/50μl)建立BV疼痛模型。成年雄性DA大鼠随机分为5组:对照组、BV组、OCT组、对侧OCT组和环生长抑素(c-SOM)组。分别用秒表和计数器记录大鼠注射BV后抬/舔爪时间和自发性缩足反射次数等伤害感受行为。大鼠机械敏感性阈值用up-down法测定,用50%机械缩爪阈值(PWMT)表示,分别于注射前1 h和注射后1.5 h测量。热刺激反应用热缩爪潜伏期(PWTL)表示,于注射前30 min和注射后2 h测量。采用免疫组织化学方法观察pCREB在DRG表达的变化。结果在DA大鼠足底注射BV后1 h内,OCT组比BV组的抬/舔爪持续时间均缩短(P<0.05);OCT组PWMT较BV组升高,但这两组间PWTL差异无统计学意义。注射BV后BV组同侧DRG中pCREB阳性细胞百分数较对照组明显增加(P<0.05),局部OCT预处理明显减少pCREB阳性细胞百分数(P<0.05)。结论足底注射OCT抑制BV导致的自发性伤害感受行为和机械痛敏,并伴有同侧DRG内pCREB表达降低,这一作用可能是OCT通过激活外周局部SSTR导致的。

鞘内注射布托啡诺对福尔马林炎性痛大鼠脊髓背角PKA和pCREB表达的影响

目的观察鞘内注射布托啡诺对福尔马林炎性痛大鼠脊髓背角PKA和pCREB表达的影响。方法 18只鞘内置管的雄性SD大鼠,随机分为3组:生理盐水组(NS);低剂量布托啡诺组(LB);高剂量布托啡诺组(HB),n=6。鞘内置管后5d,在各组大鼠的左后足掌面皮下注射5%福尔马林50μL,致痛前30 min,3组大鼠鞘内分别预先注射生理盐水、布托啡诺12.5μg、25.0μg,采用疼痛加权评分法评价疼痛行为学,所有大鼠福尔马林注射2h后处死,取大鼠脊髓L5节段标本,用免疫组化方法测定脊髓背角PKA和pCREB的表达。结果 HB组大鼠疼痛较NS组减轻,其脊髓背角PKA和pCREB表达弱于NS组(P<0.01),且呈正相关,r=0.940。结论在大鼠福尔马林炎性痛模型中,鞘内注射布托啡诺25.0μg可产生明显的镇痛作用,其镇痛机制与下调PKA、CREB表达有关。

皮质酮复合丙泊酚对大鼠pCREB表达的影响

目的探讨皮质酮复合丙泊酚对大鼠pCREB表达的影响。方法将24只21 d龄的Wistar大鼠随机分为4组(=6):对照组(Ⅰ组)、丙泊酚组(Ⅱ组)、皮质酮组(Ⅲ组)及丙泊酚+皮质酮组(Ⅳ组),分别以0.9%氯化钠注射液10 ml/kg、丙泊酚100 mg/kg、皮质酮10 mg/kg、丙泊酚100 mg/kg+皮质酮10 mg/kg腹腔注射,连续用药7d后,以免疫组织化学法检测前额叶皮质pCREB的表达。结果与Ⅰ组比较,Ⅱ组、Ⅲ组及Ⅳ组pCREB表达下调(均<0.05);与Ⅱ组、Ⅲ组比较,Ⅳ组pCREB表达减少(均<0.05)。结论 100 mg/kg丙泊酚或10 mg/kg皮质酮多次重复应用,大鼠pCREB的表达减少,两药复合应用时抑制作用增强。

骨癌痛大鼠脊髓背角pCREB表达的变化

目的：观察脊髓背角磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（pCREB,phosphorylated cAMP re-sponse element binding protein）在骨癌痛大鼠中的表达变化,探讨其在骨癌痛中枢敏化中的作用。方法：雌性SD大鼠32只,随机分为4组（n=8）,分别为对照组,骨癌痛6d、12d、18d组。对照组和骨癌痛各组分别于左胫骨上端注射Hank＇s液和Walker256肿瘤细胞5μl。分别于术前（基础值）、术后6d、12d、18d测定机械性痛阈值。对照组于术后18d,其余三组在各时点测定机械性痛阈值后立即处死大鼠,取L4~L6脊髓组织,采用免疫组化法计数pCREB免疫反应阳性细胞数量。结果：骨癌痛术后6d、12d、18d组机械性痛阈值进行性下降（P〈0.01）,对照组差异无统计学意义（P〉0.05）;与对照组比较,骨癌痛术后6d、12d、18d组脊髓pCREB免疫反应阳性细胞数逐渐增多（P〈0.01）。结论：骨癌痛大鼠脊髓背角pCREB表达的增加,可能是产生中枢敏化的机制之一。

电针结合经颅磁刺激对局灶性脑缺血大鼠pCREB表达的影响

目的:探讨电针结合经颅磁刺激(rTMS)对局灶性脑缺血大鼠磷酸化环腺苷酸反应元件结合蛋白(pCREB)表达的影响及其治疗缺血性脑损伤的机制。方法:Wistar大鼠75只,随机分为A、B、C、D及E组各15只,A组为正常对照,B、C、D及E组大鼠采用线栓法制备局灶性脑缺血模型,术后A、B组不实施处理,C组进行电针治疗,D组给予rTMS治疗,E组给予电针及rTMS联合治疗。通过Western blot检测脑缺血后第7、14及28 d 3个不同时相大鼠海马胞核内pCREB的表达,并观测神经功能缺损程度评分的变化。结果:脑缺血后不同时相点缺血侧海马pCREB阳性表达和灰度值,B组在7 d时高于A组,28 d时低于A组(P<0.05),14 d时与A组比较差异无显著性意义;C、D组和E组各时相点均高于B组,7及14 d时高于A组(均P<0.05),28 d时与A组比较无差异;E组7及14 d时相点均高于C及D组(P<0.05);C与D组各时相点均无差异。各时相点神经功能缺损评分C、D组和E组均较B组下降(P<0.01),尤以E组为明显。结论:电针结合rTMS对脑卒中后神经功能的恢复有显著的促进作用,pCREB的表达增强可能是其治疗缺血性脑卒中的机制之一。

鞘内注射HPPE修饰的HEK293对骨癌痛大鼠脊髓背角pCREB表达的影响

目的观察鞘内注射HPPE基因修饰的HEK293重组细胞(pLV-UbC-HPPE/HEK293),对骨癌痛大鼠行为学和脊髓背角pCREB表达的影响,探讨该重组细胞对大鼠骨癌痛的镇痛作用。方法雌性SD大鼠48只,随机分成两组,假手术(SHAM,12只)组和骨癌痛(CIBP,36只)组。大鼠左后肢胫骨打孔,SHA组大鼠注射生理盐水5ul,CIBP组大鼠注射MADB-106癌细胞5ul。于术前1d,术后7、14、21d分别测缩足反射潜伏期(PWL)X线下观察造模部位。将CIBP组随机分为CIBP′,CIBP′+GH,CIBP′+HH组,均12只。行鞘内穿刺并留置导管,分别注射PBS,GH和HH细胞悬液各20ul,隔天,共3次,测定PWL。CIBP′+HH组腹腔注射纳洛酮,再测PWL。实验结束后处死大鼠,取L4～L6脊髓,采用免疫组化法计数pCREB免疫反应阳性细胞数量。结果 (1)CIBP组术后7、14、21dPWL进行性下降(P<0.05),X线显示逐渐骨破坏;SHAM组差异无统计学意义(。2)CIBP′+HH组鞘内注射HH细胞后,PWL增高至(11.68±1.04)s,(P<0.05)(。3)CIBP′+HH组腹腔注射纳洛酮后PWL值降至(9.37±1.14)s,具有统计学意义(P<0.05),镇痛效应可被拮抗(。4)pCREB表达量:与CIBP′组相比,CIBP′+HH组降至(38.73±3.92),具有统计学意义(P<0.05)。结论鞘内注射HPPE基因修饰的HEK293细胞后,大鼠行为学变化和脊髓背角pCREB表达降低,表明该重组细胞对大鼠骨癌痛有镇痛效果。