葱白提取物对高脂血症大鼠SREBP2/PCSK9信号通路和线粒体功能的影响

目的探讨葱白提取物(FOB)对高脂血症(HLP)大鼠固醇调节元件结合蛋白(SREBP)2/前蛋白转化酶枯草溶菌素(PCSK)9信号通路和线粒体功能的影响。方法脂肪乳灌胃法构建大鼠HLP模型并进行模型鉴定,将大鼠分为:正常组、模型组、FOB低、中、高剂量组、瑞舒伐他汀组。生化方法检测血清脂质含量,苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织形态变化,油红O染色观察脂质沉积情况,实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和Western印迹分别检测低密度脂蛋白受体(LDLR)、PCSK9和SREBP2 mRNA和蛋白表达水平,透射电镜观察肝组织线粒体,流式检测活性氧(ROS)及线粒体膜电位,qPCR检测线粒体DNA(mtDNA)拷贝数、线粒体融合蛋白(mfn)1、mfn2、神经萎缩蛋白(OPA)1、线粒体动力相关蛋白(Drp)1表达水平。结果与模型组比较,FOB能够显著降低血脂水平,减少脂质沉积,修复肝组织损伤,升高LDLR水平,降低PCSK9和SREBP2水平,缓解肝组织线粒体损伤,降低ROS水平,升高线粒体膜电位,升高mtDNA拷贝数、mfn1、mfn2、OPA1水平,降低Drp1蛋白水平。结论FOB能够降低血脂、改善线粒体功能,其机制可能与FOB调控SREBP2/PCSK9信号通路有关。

补骨脂素通过PCSK9/LDLR信号通路抗高脂饮食诱导的高脂血症研究

目的基于前蛋白转化酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9)探讨补骨脂素对高脂血症的影响及作用机制。方法首先使用分子对接法对补骨脂素与PCSK9蛋白结合能力进行预测。随后分别采用高脂饮食诱导的高脂血症小鼠模型和HepG2细胞红色荧光标记低密度脂蛋白(Dil-LDL)摄取法考察补骨脂素对模型小鼠血脂水平和HepG2细胞Dil-LDL摄取的影响。C57BL/6J 50只小鼠适应性喂养1周,未造模小鼠作为正常组,造模后的高脂血症小鼠随机分为模型组和20、40、80 mg/kg补骨脂素组,每组10只。全自动生化仪检测丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)和天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)水平,以及总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high densit lipoprotein cholesterol,HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)水平。20μg/mL Dil-LDL观察补骨脂素对HepG2细胞脂质摄取的影响,分为对照组和10、20、40、80μmol/L补骨脂素组。酶标仪检测各组荧光强度;Real-time PCR和Western blot法检测补骨脂素对PCSK9和低密度脂蛋白受体(low-density lipoprotein receptor,LDLR)基因和蛋白表达的影响。结果分子对接结果显示补骨脂素与PCSK9对接结合能为-6.04 kcal/mol,提示补骨脂素可能与PCSK9结合。进一步在在体动物模型验证中发现,与高脂饮食诱导的模型组相比,20 mg/kg补骨脂素可显著降低高脂血症小鼠血清中ALT、TC和LDL-C水平(P<0.05),40 mg/kg补骨脂素显著降低高脂血症小鼠血清ALT、AST、TC、TG和LDL-C水平(P<0.05或P<0.01)。细胞实验结果显示,与对照组相比,10μmol/L、20μmol/L和40μmol/L补骨脂素可显著增强HepG2细胞Dil-LDL摄取能力(P<0.01)。与对照组相比,40μmol/L补骨脂素可显著提高LDLR mRNA和蛋白表达(P<0.05),并降低PCSK9 mRNA和蛋白表达水平(P<0.01)。结论补骨脂素具有抗高脂饮食导致的高脂血症作用,机制可能与下调PCSK9/LDLR信号通路有关。

PCSK9抑制剂的应用与消化道肿瘤之间的因果关系:一项药物靶向孟德尔随机化研究

目的使用药物靶向孟德尔随机化的方法探索前蛋白转换酶枯草溶菌素9(PCSK9)抑制剂的应用与消化道肿瘤发生风险的因果关系。方法应用药物靶向孟德尔随机化分析,探讨PCSK9抑制剂的应用对消化道肿瘤(包括食管癌、胃癌和结直肠癌)发病率的因果关系。进行两样本孟德尔随机化研究,评估脂质[包括低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、载脂蛋白(Apo)A-1和ApoB]与消化道肿瘤发病率之间的潜在关系,并以此判断PCSK9抑制剂抑癌作用的途径。结果通过药物靶向孟德尔随机化的方法,结果发现PCSK9抑制剂的应用与胃癌风险的下降显著相关(OR=0.36,95%CI:0.18~0.72,P=0.004),未发现PCSK9抑制剂与其他类型癌症之间存在显著的因果关系。单因素两样本孟德尔随机化分析未发现脂质成分的变化与胃癌发生率之间存在显著因果关系的关联,而多因素孟德尔随机化分析表明ApoB的水平下降与胃癌发生率的升高存在弱的因果关系关联(P=0.03,β=0.17,95%CI:0.01~0.32)。结论PCSK9抑制剂的应用有助于降低患者罹患胃癌的风险。然而,这种保护作用独立于PCSK9抑制剂的降脂作用,单纯的血脂下降无法降低胃癌的发生风险。本研究观测到的抑癌作用可能归因于PCSK9抑制剂除降脂作用外的其他机制。

PCSK9和MIF在乳腺癌中的水平及其临床意义

目的:探讨PCSK9和MIF在乳腺癌中的水平及其临床意义。方法:选取从2021年1月至2022年12月在我院就诊的139例乳腺癌患者和125健康体检人员。测定血清及组织PCSK9和MIF水平,分析在乳腺癌中的相关性。结果:乳腺癌患者的血清PCSK9和MIF水平明显高于对照组(P Objective: To investigate the relationship between the level of PCSK9 and MIF and breast cancer. Methods: From January 2021 to December 2022, 139 breast cancer patients after surgery and 125 health people as control group were elected. The levels of propotein convertase subtilisin/kexin 9 (PCSK9) and macrophage migration inhibitory factors (MIF) were measured, and analyzed the relationship in breast cancer. Results: The serum levels of PCSK9 and MIF in breast cancer patients was significantly higher than the control group (P < 0.05). The tissue levels of PCSK9 and MIF in breast cancer patients was significantly higher than breast fibroma patients, but the difference was not statistically significant. PCSK9 levels correlated positively with MIF levels in breast cancer tissue. Conclusion: The levels of PCSK9 and MIF were related to breast cancer, and PCSK9 levels correlated positively with serum MIF levels. Through monitoring the levels of PCSK9 and MIF, the methods should provide a new theoretical basis for early diagnosis and screening of breast cancer and accurate treatment.

地奥心血康联合辛伐他汀对动脉粥样硬化小鼠的影响及机制研究

目的探讨地奥心血康(以下简称心血康)联合辛伐他汀对动脉粥样硬化(AS)小鼠的影响及机制。方法将8只C57BL/6J小鼠作为对照组,将32只ApoE^(-/-)小鼠随机分为模型组、心血康组(160 mg·kg^(-1))、辛伐他汀组(1.3 mg·kg^(-1))及联合治疗组(心血康160 mg·kg^(-1)+辛伐他汀1.3 mg·kg^(-1)),每组8只。对照组给予常规饲料喂养,其余4组均给予高脂饲料喂养。同时,各给药组均按照上述剂量灌胃给药,灌胃体积为10 mL·kg^(-1),每天1次,持续18周。给药结束后,检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;采用油红O染色法观察小鼠主动脉斑块形成及肝脏脂质聚集情况;ELISA法检测血清前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)水平;qRT-PCR及Western Blot法检测肝脏组织LDLR、HNF1α、SREBP2 mRNA及蛋白表达水平。结果(1)与对照组比较,模型组小鼠的血清TC、TG、LDL-C水平显著升高(P<0.01),HDL-C水平显著降低(P<0.01);主动脉根斑块面积百分比、主动脉全体斑块面积百分比、肝脏脂滴面积百分比均显著升高(P<0.01);肝脏组织中LDLR mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.01),血清PCSK9水平显著升高(P<0.01);肝脏组织中HNF1α、SREBP2 mRNA及蛋白表达水平均明显升高(P<0.05,P<0.01)。(2)与模型组比较,心血康组及联合治疗组小鼠的血清TC、TG、LDL-C水平明显降低(P<0.05,P<0.01),HDL-C水平明显升高(P<0.05);辛伐他汀组小鼠血清LDL-C水平显著降低(P<0.01);心血康组及联合治疗组小鼠的主动脉根斑块面积百分比、主动脉全体斑块面积百分比明显降低(P<0.05,P<0.01),各给药组小鼠的肝脏脂滴面积百分比均显著降低(P<0.01);心血康组及联合治疗组小鼠肝脏组织中LDLR蛋白表达水平明显升高(P<0.05),血清PCSK9水平明显降低(P<0.05,P<0.01),肝脏组织中HNF1α、SREBP2 mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.05,P<0.01)。(3)与辛伐他汀组比较,联合治疗组小鼠血清HDL-C水平明显升高(P<0.05);主动脉根斑块面积百分比、肝脏脂滴面积百分比均明显降低(P<0.05,P<0.01);肝脏组织中LDLR蛋白表达水平显著升高(P<0.01),血清PCSK9水平显著降低(P<0.01);肝脏组织中HNF1α蛋白及SREBP2 mRNA表达水平均明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论心血康可能通过抑制SREBP2及HNF1α表达,调节PCSK9/LDLR信号途径,从而发挥对辛伐他汀降脂及抗AS作用的协同增效作用。

新型降脂药物PCSK9抑制剂临床疗效研究进展

PCSK9抑制剂作为一类新型降脂药,可显著降低低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,且在他汀类药物治疗基础上可进一步降低心肌梗死率,使主要不良心血管事件风险下降。本研究主要总结了Alirocumab(阿利西尤单抗)和Evolocumab(依伏库单抗)这两种已在我国上市并纳入医保,且临床上逐渐得到广泛应用的PCSK9抑制剂的相关研究进展,对两者的降脂疗效与安全性、有效性等进行了综述与对比,旨在为高脂血症患者提供更好的治疗与临床服务。相关文献汇总的结果表明,Alirocumab、Evolocumab的降脂疗效均较好,尤其适用于不适合使用其他降脂药物的人群,或使用常用治疗方法无法达到降脂目标的人群。但在降脂的达标率上,Alirocumab优于Evolocumab。在临床综合评价上,安全性、有效性、适宜性等方面Alirocumab优于Evolocumab(但仍需要进一步的研究来证实)。Alirocumab、Evolocumab作为PCSK9抑制剂中单克隆抗体的代表药,其临床疗效确切,安全性较好。

早期启用前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin 9抑制剂对急诊冠状动脉介入中长期预后的影响

目的:探讨早期启用前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin 9型(proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 serine protease,PCSK9)抑制剂治疗急诊冠状动脉介入患者的临床疗效和安全性。方法:选取2021年6月至2022年6月,我院心血管内科收治的急诊冠状动脉介入患者128例,随机分为观察组和对照组,每组各64例。观察组患者入院后手术前即开始启用PCSK9抑制剂,此后每次75mg皮下注射,每2周1次;对照组,按照指南推荐,待6周后评估LDL-C或非HDL-C水平后,评估是否加用依折麦布或启用PCSK9抑制剂。随访时间为12个月。评估发病6周、6个月及12个月后血脂水平及达标情况及主要心血管不良事件(main adverse cardiovascular events,MACE),包括全因死亡、急性心肌梗死、不稳定性心绞痛、心源性猝死及缺血性卒中,和药物不良事件,包括谷丙转氨酶升高超过正常值上限的3倍以上、肌痛。结果:与对照组相比,观察组治疗6周、6个月及12个月时血清TC、TG、LDL-C改善更为显著(P<0.05)。使用PCSK9抑制剂强化降脂治疗6周后,观察组LDL-C达标率为98.4%,高于对照组的56.3%(P<0.001)。治疗12个月后,两组间血脂达标率,差异有统计学意义(100.0%vs.84.3%,P=0.001),观察组的MACE显著减少(20.3%vs.10.9%,P=0.04)。两组药物不良反应事件差异无统计学意义(P>0.05)。结论:急性冠状动脉综合征发病后早期启用PCSK9抑制剂可以及早使血脂管理达标,改善急诊冠状动脉介入患者中长期预后,安全性较好。

PCSK9抑制剂早期应用对非ST段抬高型急性冠脉综合征患者的疗效研究

目的 旨在观察PCSK9抑制剂早期内应用对非ST段抬高型急性冠脉综合征患者的疗效。方法 选取2021年12月—2022年11月于山西白求恩医院心内科治疗的80例非ST段抬高型急性冠脉综合征患者,将其随机分为观察组(n=37)和对照组(n=43)。记录患者入院及治疗6个月后的血脂、炎症因子和血管内皮功能指标及主要不良心血管事件发生率。结果 治疗6个月后,与对照组相比,观察组的总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、高敏C反应蛋白、IL-6水平明显下降(均P<0.05)。与对照组相比,观察组的血清内皮素1降低,一氧化氮水平升高(均P<0.05)。随访6个月内,观察组的不良心血管事件发生略低于对照组(P<0.05)。结论 在非ST段抬高型急性冠脉综合征患者中,早期应用PCSK9抑制剂能够迅速降低血脂水平,减轻炎症反应,改善血管内皮功能,并降低主要不良心血管事件的风险。

PCSK9抑制剂预防高胆固醇血症患者心血管疾病的药物经济学评价系统综述

目的系统评价前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)抑制剂预防高胆固醇血症患者心血管疾病的药物经济学评价研究,为优化临床治疗方案、制定相关政策及开展后续药物经济学评价研究提供参考。方法检索PubMed、中国知网等中英文数据库,收集建库至2023年10月8日发表的PCSK9抑制剂(依洛尤单抗、阿利西尤单抗)预防高胆固醇血症患者心血管疾病的药物经济学评价文献,使用2022版卫生经济学评价报告标准共识(CHEERS2022)量表进行文献质量评价,对纳入文献的基本信息、模型结构及相关参数、敏感性分析、结果等进行描述性分析。结果与结论共纳入29篇文献,总体质量较好。研究视角包括卫生体系、支付方、全社会等,均采用了Markov模型;效果和效用值数据主要来自既往研究,成本主要测算了直接成本,贴现率为每年1.5%~5.0%,意愿支付阈值多设定为1~3倍人均国内生产总值,健康产出指标大部分采用生存年和质量调整生命年;大部分研究的敏感性分析显示,基础评价结果具有稳健性,主要影响因素为药品价格。大部分的中国研究发现,急性冠脉综合征、心肌梗死、动脉粥样硬化性心血管疾病患者使用PCSK9抑制剂预防心血管疾病不具有经济学优势,仅部分特定群体(如三支病变患者、新发急性冠脉综合征且低密度脂蛋白胆固醇≥100 mg/dL的患者等)使用PCSK9抑制剂预防心血管疾病有经济性。建议后续研究参考CHEERS2022量表完善设计方案,尽量选择本土大样本、高质量数据,以提高报告质量和卫生决策的透明度,从而更准确地评价PCSK9抑制剂的经济性。

严重高脂血症继发血色病1例报道及相关文献复习

目的:报道高脂血症继发血色病1例,总结患者临床资料,探讨该类疾病临床特征及诊疗要点。方法:收集1例反复严重脂代谢紊乱导致肝脏铁沉积的继发性血色病患者临床资料,并对相关文献进行复习。结果:患者老年男性,以纳差、乏力、恶心为主要临床表现。实验室检查示,血脂异常(以甘油三酯极重度升高及重度高胆固醇血症为主)、重度肝功能异常、铁蛋白升高、血糖升高,上腹部MR检查示肝脏铁沉积,给予调脂及护肝治疗后,患者血脂、铁蛋白水平改善不理想。8个月后患者再次出现重度血脂代谢紊乱、肝功能异常及铁蛋白升高,上腹部MRI检查仍显示肝脏铁沉积。基因全外显子测序发现PCSK9基因3号外显子存在c.503C > T (p.Ala168Val)错义变异,加用阿利西尤单抗调脂治疗。7月后复查肝功能、血脂、铁代谢指标恢复正常,铁沉积不显著。结论:严重高脂血症继发血色病,遗传学分析有助于指导临床精准治疗。

PCSK9抑制剂依洛尤单抗对冠心病大鼠血脂、血管内皮功能损伤及炎性因子的影响

目的:探究前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin 9型(PCSK9)抑制剂依洛尤单抗对冠心病(CHD)大鼠血脂、血管内皮功能损伤及炎性因子的影响。方法:通过高脂饮食构建CHD大鼠模型,建模成功的45只大鼠随机分为CHD组、依洛尤单抗20组和依洛尤单抗40组,每组15只;15只正常大鼠作为对照组。依洛尤单抗20组和依洛尤单抗40组分别皮下注射依洛尤单抗20 mg/kg与40 mg/kg。2周后检测各组心肌组织、血脂指标、血管内皮功能指标和炎性因子水平。结果:与对照组大鼠比较,CHD组大鼠心肌组织损伤、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1β、内皮素(ET)-1水平显著升高,一氧化氮水平显著降低(P<0.05)。依洛尤单抗20组和依洛尤单抗40组一氧化氮显著高于CHD组,其余指标均低于CHD组(P<0.05)。依洛尤单抗40组的一氧化氮水平高于依洛尤单抗20组,其余指标均低于依洛尤单抗20组(P<0.05)。结论:依洛尤单抗可抑制血脂和胆固醇水平,保护CHD大鼠心肌组织,并抑制炎症反应,保护血管内皮细胞功能。

PCSK9转录后表达调控抑制剂的发现及活性研究

目的建立PCSK9转录后表达调控抑制剂高通量筛选模型筛选获得靶向PCSK9转录后水平的小分子抑制剂,通过其活性研究发现具有潜在降脂活性的PCSK9抑制剂。方法将PCSK9 mRNA的3'UTR区连接至荧光素酶报告基因下游以构建PCSK9转录后调控抑制剂高通量筛选模型,并对其进行优化与评价。应用该模型进行大规模筛选,进而利用荧光定量PCR、Western blot、流式细胞检测等方法对活性化合物调控PCSK9的表达及其介导的低密度脂蛋白受体(LDLR)的表达水平和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)摄取作用的变化进行检测。结果利用上述模型筛选获得6个活性化合物,并对其量效关系进行分析,结果显示这些化合物均可呈剂量依赖性下调筛选模型荧光素酶活性;利用HepG2细胞对其调控PCSK9的表达水平进行检测,结果显示化合物IMB-57可显著抑制PCSK9基因mRNA水平和蛋白水平;进而对LDLR表达水平及摄取功能进行检测,结果显示IMB-57可显著增加细胞LDLR蛋白水平及其介导的细胞对LDL-C的摄取作用;初步分子机制分析结果证实IMB-57通过影响PCSK9基因mRNA的稳定性从而抑制其表达。结论活性化合物IMB-57具有显著的PCSK9抑制活性且可显著增加肝细胞LDL-C的摄取,有望发展为潜在的具有降脂活性的PCSK9小分子抑制剂,同时也证实本工作构建模型的可靠性,可用于具有全新机制的PCSK9抑制剂的发现。

超声应变技术评估PCSK9基因敲除对肥胖小鼠心肌功能的影响

目的应用超声应变技术评估PCSK9基因敲除对肥胖小鼠心肌功能的影响,并探讨其机制。材料与方法选取6周龄野生型C57BL/6雄性小鼠20只,随机分为正常组和肥胖组,各10只;选取6周龄PCSK9^(-/-)C57BL/6雄性小鼠10只为PCSK9^(-/-)组。肥胖组和PCSK9^(-/-)组给予高脂饲料造模,正常组给予普通饲料,12周后从肥胖组和PCSK9^(-/-)组中选取造模成功小鼠,3组小鼠行心脏超声、透射电镜及免疫荧光染色进行观察。结果肥胖组、正常组和PCSK9^(-/-)组小鼠室间隔舒张末期厚度分别为(0.98±0.13)mm、(0.77±0.07)mm、(0.78±0.13)mm,差异有统计学意义(F=5.10,P=0.02),肥胖组较正常组增厚(t=2.73,P<0.05),PCSK9^(-/-)组较肥胖组变薄(t=-2.92,P<0.05)。3组左心室整体纵向应变及整体圆周应变差异有统计学意义(F=7.44、15.40,P<0.05),其中肥胖组较正常组整体纵向应变和整体圆周应变减低(t=3.79、5.50,P<0.05),PCSK9^(-/-)组较肥胖组整体纵向应变和整体圆周应变升高(t=-2.53、-3.37,P<0.05)。电镜及免疫荧光结果显示,肥胖组心肌超微结构受损,NLRP3及Caspase-1表达较正常组增多(t=12.53、-4.73,P<0.05),PCSK9^(-/-)组心肌超微结构受损明显改善,NLRP3及Caspase-1表达较肥胖组减少(t=-6.23、2.05,P<0.05)。结论超声应变技术较常规心脏超声参数能更敏感地发现PCSK9基因敲除肥胖小鼠心肌功能的改变;PCSK9基因敲除后可能通过抑制NLRP3及Caspase-1表达改善肥胖小鼠心肌功能。

基于FAERS数据库的PCSK9抑制剂和他汀类药物的高血糖不良反应分析

目的:基于FDA不良事件报告系统(FDA Adverse Events Reporting System,FAERS),比较PCSK9抑制剂和他汀类药物引起高血糖的风险。方法:利用FAERS数据库,收集2016年至2023年第3季度,首要怀疑药物为阿利西尤单抗、依洛尤单抗、阿托伐他汀、瑞舒伐他汀,不良事件为高血糖的报告,采用报告比值比法(ROR)评价PCSK9抑制剂和他汀类药物导致高血糖的风险大小。结果:根据FAERS数据库,与阿托伐他汀及瑞舒伐他汀相比,阿利西尤单抗发生高血糖的ROR(95%CI)分别为0.628(0.545,0.724)和0.307(0.263,0.357);依洛尤单抗发生高血糖的ROR(95%CI)分别为0.817(0.750,0.889)和0.399(0.361,0.441),均未产生不良反应信号。与其他所有药物相比,阿利西尤单抗和依洛尤单抗发生高血糖的ROR(95%CI)分别为1.488(1.315,1.682)和1.934(1.845,2.027),均产生不良反应信号。结论:基于FAERS数据库,PCSK9抑制剂较他汀类药物引起高血糖的风险低,值得引起临床关注。

PCSK9在PCI术后支架内再狭窄中的作用及机制

前蛋白转化酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9)是一种由肝细胞合成和分泌的蛋白质,其可通过促进肝细胞表面低密度脂蛋白受体(LDLR)降解来减少LDL内化和清除。随着PCSK9抑制剂的逐步推广和使用,越来越多研究者发现PCSK9可以调控动脉粥样硬化形成、血小板活化和血栓形成、炎症反应以及糖脂代谢,而这些均为经皮冠状动脉介入治疗(percutaneous coronary intervention, PCI)术后支架内再狭窄(in-stent restenosis, ISR)的主要诱因。该文就PCSK9在ISR中的作用机制研究进展进行综述,并对其作为冠心病药物治疗靶点的应用作初步展望。

PCSK9通过溶酶体稳态-自噬途径调控心肌缺氧再复氧损伤

目的:研究前蛋白转化酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9)在心肌缺氧再复氧(hypoxia-reoxygenation,H/R)损伤中的作用及机制。方法:C57BL/6乳鼠原代心肌细胞,随机分为4组:空白对照组(Control组)、缺氧/复氧组(H/R组)、阴性腺相关病毒组(H/R+Scramble组)、AAV9-shPCSK9重组腺相关病毒组(H/R+shPCSK9组)。建立H/R模型(缺氧2 h,复氧4 h),使用CCK-8检测各组细胞活力的变化,LDH试剂盒检测细胞损伤程度,白光显微镜观察心肌细胞形态变化,共聚焦显微镜观察细胞内染色质凝集、自噬小体、溶酶体数量和形态等超微结构变化,western blot检测PCSK9、LC3Ⅱ、P62、LAMP2、Cathepsin B等蛋白表达变化。结果:H/R组和H/R+Scramble组较Control组的心肌细胞活力明显降低,LDH水平显著升高,PCSK9、LC3Ⅱ、P62、Cathepsin B蛋白显著升高,而LAMP2蛋白明显降低(P<0.05),这些变化在H/R+shPCSK9组则被逆转。此外,与H/R+Scramble组相比,白光显微镜下H/R+shPCKS9组的部分心肌细胞形态明显较为正常,部分细胞亦有缩短、肿胀以及成团状,但心肌细胞数量仍较多,同时共聚焦显微镜下H/R+shPCKS9组溶酶体数量及比例明显升高,而自噬小体数量虽增加但所占比例显著降低。结论:PCSK9通过破坏溶酶体稳态引起自噬通路受阻,导致自噬小体聚集以及自噬性死亡,进而加剧了心肌缺氧再复氧损伤,而下调PCSK9可通过维持溶酶体稳态,促进自噬通量,从而减轻H/R所导致的心肌细胞损伤。

基于CRISPR/Cas9技术PCSK9基因敲除小鼠模型的构建及表型验证

目的基于CRISPR/Cas9技术构建前枯草杆菌蛋白原转换酶9(Preprotein convertase subtilisin/kexin type9,PCSK9)基因敲除小鼠模型并对其表型进行初步验证。方法利用非同源末端连接(NHEJ)修复引入突变的方式,针对PCSK9基因靶序列设计单链向导RNA(sgRNA),将sgRNA和Cas9 mRNA显微注射到C57BL/6J小鼠受精卵,获得F0代敲除小鼠,通过繁育及基因型鉴定获得PCSK9基因敲除(PCSK9 KO)纯合子小鼠。采用PCR方法对PCSK9 KO小鼠进行基因鉴定,Western Blot检测肝组织PCSK9及低密度脂蛋白受体(LDL-R)蛋白的表达,同时检测心、脑、肾、脂肪组织中的PCSK9蛋白表达水平,q-PCR检测PCSK9的mRNA表达水平。采用酶法检测血清中总胆固醇(TC)及甘油三酯(TG)水平。结果PCR产物凝胶电泳以及PCSK9蛋白及mRNA表达结果表明成功获得全身性PCSK9基因敲除小鼠,肝组织LDL-R(3.42±0.56)蛋白表达显著增高。与WT组相比,PCSK9小鼠血清TC(90.75±17.81 mg/dL vs 54.19±2.42 mg/dL)、TG(81.26±11.98 mg/dL vs 50.92±11.93 mg/dL)显著降低(P<0.001)。结论基于CRISPR/Cas9技术成功构建获得PCSK9基因敲除小鼠,敲除PCSK9基因通过上调肝脏LDL-R蛋白显著降低血脂水平。

PCSK9抑制剂在冠脉多支病变PCI术后疗效的临床分析

目的探讨前蛋白转化酶枯草杆菌9(PCSK9)抑制剂在冠脉多支病变经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后患者中的应用效果。方法选择2023年1月至2024年1月在我院接受PCI术的80例冠脉多支病变患者,根据随机数表法将其分为对照组和实验组,每组40例。对照组规律服用双联抗血小板聚集治疗及负荷剂量他汀类调脂药(瑞舒伐他汀钙片20 mg/d),实验组在规律服用双联抗血小板聚集治疗及中等剂量他汀类调脂药(瑞舒伐他汀钙片10 mg/d)的同时按照每2周1次,每次140 mg进行依洛尤单抗注射液治疗,两组持续治疗时间均为3个月,随访6个月。观察两组治疗前、治疗3个月后的血脂水平、心功能水平及斑块变化,统计其随访期间支架内再狭窄(ISR),心血管不良事件发生情况。结果两组治疗后的甘油三酯及低密度脂蛋白胆固醇水平与治疗前相比均更低,且实验组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组治疗后的左室舒张末期内径均低于治疗前,左室射血分数与治疗前相比均更高,且实验组左室舒张末期内径水平低于对照组,左室射血分数水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);与治疗前相比,两组治疗3个月后的颈动脉内膜中层厚度(IMT)、斑块面积及平均斑块数均更低,且实验组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);实验组随访期间ISR发生率稍低于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05);实验组不良心血管事件总发生率较对照组低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PCSK9抑制剂治疗可改善冠脉多支病变PCI术后患者血脂水平及心功能水平,减少斑块,同时有助于降低心血管不良事件发生风险。

PCSK9抑制剂对ST段抬高型急性心肌梗死PCI后炎症水平和心室重构的影响

目的探讨PCSK9抑制剂对急性ST段抬高型心肌梗死经皮冠状动脉介入治疗术(PCI)后心室重构及炎症因子的影响。方法选择2021年4月至2023年7月在青岛市中心医院急救中心就诊的行经皮冠脉介入手术治疗的220例急性ST段抬高型心肌梗死患者随机分为两组,对照组110例采取常规治疗,PCSK9i组110例在常规治疗基础上应用PCSK9抑制剂,比较治疗前后左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期内径(LVEDD)及左室射血分数(LVEF)和甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、总胆固醇(TC)、C反应蛋白(CRP)、白细胞介素6(IL-6),肿瘤坏死因子α(TNF-α)。比较主要不良心血管事件(MACE)(包括再次心肌梗死发生率、严重心律失常率、再度心衰发生率、心血管死亡发生率)。结果两组经过6个月的治疗及随访,PCSK9i组治疗后LVEDD(mm)、LVESD(mm)和TG(mmol/L)、TC(mmol/L)、LDL-C(mmol/L)、CRP(mg/L)、TNF-α(pg/mL)、JL-6(ng/mL)均低于对照组,差异有统计学意义[(51.32±5.84)vs.(54.43±2.91);(34.88±2.69)vs.(36.96±3.19);(1.41±0.61)vs.(2.13±1.26);(3.53±1.06)vs.(3.98±0.93);(0.95±0.36)vs.(1.79±0.27);(5.18±1.92)vs.(7.69±2.61);(36.43±9.41)vs.(57.79±14.43);(17.4±6.68)vs.(28.55±8.92),均P<0.01],PCSK9i组LVEF(%)、HDL-C(mmol/L)高于对照组,差异有统计学意义[(46.69±3.63)vs.(41.34±3.42),P<0.05;(1.35±0.29)vs.(1.29±0.27),P<0.01]。PCSK9i组MACE发生率明显低于对照组(5.2%vs.13.6%,P<0.05)。结论ST段抬高型急性心肌梗死患者PCI后应用PCSK9抑制剂可以更好的降低血脂,稳定冠状动脉斑块,减轻心肌梗死后的局部及循环炎症反应,改善心肌梗死后心室不良重构、抑制心室重构、降低主要MACE总发生率,值得推广使用。

PCSK9抑制剂联合他汀治疗对冠心病患者血脂、颈动脉斑块及炎症因子的影响

目的分析PCSK9抑制剂联合他汀治疗在冠心病患者中对血脂、炎症因子和颈动脉斑块的影响。方法应用前瞻性随机对照研究,纳入2022年9月-2022年12月期间在玉溪市人民医院心内科诊断为冠心病合并高脂血症的101例患者,随机分为2组,观察组50例,使用阿利西尤单抗加他汀类药物治疗,对照组51例,使用他汀类药物治疗,持续治疗6个月。对比2组患者治疗6个月后血脂、炎症指标、颈部血管斑块Crouse积分的变化情况;比较整个随访阶段2组患者不良心血管事件及不良反应的发生情况。结果治疗6个月后,观察组的TC、TG、LDL-C、ApoB、Lp(a)、hs-CRP、IL-6、PLR、NLR水平及颈动脉斑块的Crouse积分均较治疗前下降,降幅明显高于对照组,HDL-C升幅及LDL-C达标率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);2组不良反应和心血管不良事件发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论PCSK9抑制剂联合他汀治疗可在短期内可以快速改善冠心病患者血脂水平、体内炎症反应和斑块稳定性,在短期应用中安全性良好。