1例猪圆环病毒1型和巴氏杆菌混合感染的诊治

江苏淮安某猪场出现疫情,通过临床检查、PCR病毒鉴定及实验室细菌检测,确诊为猪圆环病毒1型和多杀性巴氏杆菌混合感染。借助药敏试验,筛选出青霉素、氯霉素、氟苯尼考等敏感药物,经过采取有针对性的综合防治措施,有效控制了疫情。

猪圆环病毒1型和2型a与b基因型三重PCR鉴别方法的建立及应用

根据PCV-1、PCV-2a和PCV-2b差异序列,设计了3对特异性引物,通过优化反应条件,建立了可以用于PCV检测及PCV-1、PCV-2a和PCV-2b分型的PCR方法。结果表明,三重PCR检测的最低敏感度可达4.87×107 copies/μL(PCV-1)、2.83×107 copies/μL(PCV-2a)和2.96×106 copies/μL(PCV-2b)。引物特异性良好,各引物之间没有交叉反应,对伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)检测均为阴性。应用该方法对采自陕西省的56份样品进行检测,PCV-1检出率57.14%(32/56),PCV-2a检出率1.78%(1/56),PCV-2b检出率42.86%(24/56),多重PCR检测结果与单PCR检测结果的符合率达99%以上,可用于猪圆环病毒的临床检测及流行病学监测等。

猪圆环病毒1型衣壳蛋白基因启动子增强人类免疫缺陷病毒1型质粒疫苗的抗原表达和免疫原性的研究

开发人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）和其他人类病原体的疫苗有希望的途径之一是基于质粒的DNA疫苗的使用。但是,注射相对大剂量的质粒只能产生相对弱的反应。猪圆环病毒1型（PCV-1）是一种致病的小ssDNA病毒,本试验旨在研究其基因元件在小剂量注射质粒疫苗时是否对质粒有增强表达的作用。将线性化的PCV-1基因组插入HIV-1质粒疫苗pTHgrttnC的CMV启动子5′端,与10倍剂量未修饰的pTHgrttnC相比,能使多抗原的表达增加2倍,小鼠体内的CTL反应提高3倍。PCV-1衣壳蛋白基因启动子（Pcap）也有同样的效果。增强作用可能是由于圆环病毒上一个假定的复合宿主转录因子结合位点和一个尚未鉴别的转录增强序列。研究发现PCV-1基因组源的增强子序列能显著增加HIV-1C亚型疫苗质粒pTHgrttnC在体外的抗原表达,且能增强其在小鼠体内的免疫原性。这将显著降低本疫苗或其他基于质粒的疫苗的免疫剂量,或增强其免疫应答。同时,本研究还报道了其他圆环病毒源的序列在这方面应用的潜力。

猪圆环病毒1型衣壳蛋白基因启动子增强人类免疫缺陷病毒1型质粒疫苗的抗原表达和免疫原性的研究

开发人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)和其他人类病原体的疫苗有希望的途径之一是基于质粒的DNA疫苗的使用。但是,注射相对大剂量的质粒只能产生相对弱的反应。猪圆环病毒1型(PCV-1)是一种致病的小ssDNA病毒,本试验旨在研究其基因元件在小剂量注射质粒疫苗时是否对质粒有增强表达的作用。将线性化的PCV-1基因组插入HIV-1质粒疫苗pTHgrttnC的CMV启动子5′端,与10倍剂量未修饰的pTHgrttnC相比,能使抗原的表达增加2倍,小鼠体内的CTL反应提高3倍。PCV-1衣壳蛋白基因启动子(Pcap)也有同样的效果。增强作用可能是由于圆环病毒上一个假定的复合宿主转录因子结合位点和一个尚未鉴别的转录增强序列。研究发现PCV-1基因组源的增强子序列能显著增加HIV-1C亚型疫苗质粒pTHgrttnC在体外的抗原表达,且能增强其在小鼠体内的免疫原性。这将显著降低本疫苗或其他基于质粒的疫苗的免疫剂量,或增强其免疫应答。同时,本研究还报道了其他圆环病毒源的序列在这方面应用的潜力。

猪圆环病毒Ⅰ型TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

为了建立一种用于检测猪圆环病毒Ⅰ型(PCV-1)的Taq Man荧光定量PCR检测方法,试验以PCV-1 ORF1为靶基因,以PCV-1全基因质粒为标准品,同时还对该方法进行了特异性、敏感性、重复性试验以及临床样品检测。结果表明:该方法检测灵敏度可达5.12拷贝/μL,比常规PCR方法高10倍;线性相关系数(R2)为0.997,扩增效率为104.92%,显示出良好的线性关系和扩增效率;重复性试验的变异系数小于2%,与其他病毒无交叉反应;临床样品检测显示,该方法的检测灵敏度高于普通PCR。说明新建立的方法敏感性高、特异性强,可用于PCV-1检测。