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猪2型圆环病毒核酸疫苗免疫效应研究 被引量:13
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作者 宋云峰 肖少波 +2 位作者 金梅林 张松林 陈焕春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期1049-1054,共6页
PCR扩增PCV2 ORF2和BVP22基因。将ORF2基因克隆入真核表达载体pCDNA3.1(+),构建了pCORF2作为核酸疫苗免疫小白鼠。同时将具有蛋白转导功能的BVP22基因分别克隆到ORF2基因的上游和下游,使二者融合表达,命名为pCORF2BVP22和pCBVP22ORF2。... PCR扩增PCV2 ORF2和BVP22基因。将ORF2基因克隆入真核表达载体pCDNA3.1(+),构建了pCORF2作为核酸疫苗免疫小白鼠。同时将具有蛋白转导功能的BVP22基因分别克隆到ORF2基因的上游和下游,使二者融合表达,命名为pCORF2BVP22和pCBVP22ORF2。分4组肌肉免疫BALB/c小白鼠,分别注射pCD-NA3.1(+)、pCORF2、pCORF2BVP22和pCBVP22ORF2,共免疫2次,间隔2周,分别于首免后2周和二免后4周采血,ELISA法检测体液抗体。同时为在体外验证ORF2和BVP22基因的真核表达,将ORF2和BVP22基因分别克隆入pEGFP-N1载体,构建了pNORF2和pNBVP22,转染Hela细胞后在荧光显微镜下观察到了ORF2和BVP22在体外的瞬时高效表达。结果显示,通过两次免疫后,各疫苗组均产生了针对ORF2的体液抗体,同时证明BVP22可增强核酸疫苗的免疫效果,其中以BVP22在ORF2上游效果更好。本研究为防制猪2型圆环病毒感染提供了较为理想的侯选疫苗。 展开更多
关键词 2型圆病毒ORF2 BVP22 蛋白转导 核酸疫苗
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猪II型圆环病毒全基因组序列分析及其ORF1和ORF2基因的克隆与表达 被引量:16
2
作者 韩凌霞 陈艳 +3 位作者 崔尚金 王云峰 仇华吉 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期10-13,共4页
猪II型圆环病毒(PCV_2)的2个主要开放阅读框ORF1和ORF2分别编码病毒的复制酶Rep和结构蛋白Cap。本试验将分离株L株病毒感染PK15细胞系,提取总DNA并以其为模板,通过PCR分别扩增了全病毒基因组、完整的Rep和Cap基因,并克隆到pMD18T载体中... 猪II型圆环病毒(PCV_2)的2个主要开放阅读框ORF1和ORF2分别编码病毒的复制酶Rep和结构蛋白Cap。本试验将分离株L株病毒感染PK15细胞系,提取总DNA并以其为模板,通过PCR分别扩增了全病毒基因组、完整的Rep和Cap基因,并克隆到pMD18T载体中,进行了序列测定。将Rep和Cap基因亚克隆到大肠杆菌表达载体pPROEXTMHT中,以融合蛋白的形式表达了这两种蛋白。根据文献报道,致病性的PCV_2与无致病性的PCV1的型特异性抗原决定簇主要位于Cap基因的羧基端部分,本实验利用原核表达载体pGEX_6p_1融合表达了Cap基因羧基端423bp的片段。通过薄层扫描各重组菌诱导表达产物的SDS_PAGE结果,重组质粒pPRO_Cap和pPRO_Rep以及pGEX_ΔCap的外源基因表达量分别占总菌体总蛋白的15.1%、30.4%和19.6%。将表达的三种蛋白作为抗原,通过酶联免疫吸附试验分别与PCV_2阳性猪血清和SPF猪血清进行了反应,pGEX_ΔCap表达的蛋白(Cap蛋白的羧基端部分)抗原反应性最强,这表明截短的Cap蛋白羧基端部分将是一个良好的诊断PCV_2感染用候选抗原。 展开更多
关键词 pcv-2 诊断抗原 猪II型圆病毒 全基因组序列分析 ORFl基因 ORF2基因 基因克隆 基因表达
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猪2型圆环病毒ORF1基因的克隆及表达 被引量:9
3
作者 蒋智勇 宋长绪 +2 位作者 高向阳 王贵平 赵亚华 《中国兽医科技》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期3-7,共5页
根据GenBank中猪圆环病毒 2型 (PCV 2 )的ORF1基因序列 ,设计合成了 1对引物 ,对PCV 2广东株 (GD)ORF1基因进行PCR扩增 ,将扩增的ORF1基因克隆入 pMD 18 T载体 ,获得的重组质粒命名为 pMD ORF1。将ORF1的KpnⅠ和XbaⅠ双酶切产物插入原... 根据GenBank中猪圆环病毒 2型 (PCV 2 )的ORF1基因序列 ,设计合成了 1对引物 ,对PCV 2广东株 (GD)ORF1基因进行PCR扩增 ,将扩增的ORF1基因克隆入 pMD 18 T载体 ,获得的重组质粒命名为 pMD ORF1。将ORF1的KpnⅠ和XbaⅠ双酶切产物插入原核表达载体pBAD/ gⅢC得到重组子 ,命名为 pBAD/ gⅢ ORF1。序列分析表明 ,克隆的ORF1与德国分离株AF2 0 1897核苷酸序列的同源性高达 99.5 % ;与其他PCV 2株的核苷酸序列同源性为 92 .1%~99.9% ,推导的氨基酸序列同源性为 90 .2 %~ 99.5 %。同时 ,测序结果表明 ,克隆的ORF1准确插入了 pBAD/ gⅢC的多克隆位点 ,未改变读码框。用L 阿拉伯糖诱导表达 ,收集菌液进行SDS PAGE和Western blotting分析 ,结果表明PCV 2ORF1在pBAD/ gⅢC中获得了高效融合表达 ,其表达蛋白的分子质量约为 4 1ku。 展开更多
关键词 2型圆病毒 ORF1基因 克隆 表达 蛋白 分子质量
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猪2型圆环病毒核酸疫苗的构建、鉴定和表达 被引量:9
4
作者 秦晓冰 金宁一 +4 位作者 付明山 马鸣潇 尹革芬 金扩世 李昌 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期465-467,共3页
以pVAX1为真核表达载体,以猪白介素18基因、猪2型圆环病毒内蒙古株的衣壳蛋白和复制蛋白基因为目的基因,构建了pVAX1-ORF2、pVAX1-IL18-ORF2、pVAX1-ORF2-ORF1和pVAX1-IL18-ORF2-ORF1等4个重组质粒作为核酸疫苗。将这4个重组核酸质粒分... 以pVAX1为真核表达载体,以猪白介素18基因、猪2型圆环病毒内蒙古株的衣壳蛋白和复制蛋白基因为目的基因,构建了pVAX1-ORF2、pVAX1-IL18-ORF2、pVAX1-ORF2-ORF1和pVAX1-IL18-ORF2-ORF1等4个重组质粒作为核酸疫苗。将这4个重组核酸质粒分别酶切鉴定后,转染BHK-21和PK-15细胞进行RT-PCR、间接免疫荧光和Western blotting检测。结果表明,重组核酸质粒构建正确,并能进行表达。 展开更多
关键词 2型圆病毒 核酸疫苗 RT-PCR 间接免疫荧光
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表达猪2型圆环病毒ORF2基因的重组伪狂犬病病毒的构建及鉴定 被引量:7
5
作者 琚春梅 陈焕春 +2 位作者 郗鑫 刘正飞 曹胜波 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期1716-1722,共7页
目的以伪狂犬病病毒为载体,构建表达猪2型圆环病毒ORF2基因的重组病毒,并研究其生物学特性。方法将猪2型圆环病毒ORF2基因插入到伪狂犬病病毒gG缺失通用转移载体中,构建猪2型圆环病毒-伪狂犬病病毒重组中间转移质粒,然后将该质粒与伪狂... 目的以伪狂犬病病毒为载体,构建表达猪2型圆环病毒ORF2基因的重组病毒,并研究其生物学特性。方法将猪2型圆环病毒ORF2基因插入到伪狂犬病病毒gG缺失通用转移载体中,构建猪2型圆环病毒-伪狂犬病病毒重组中间转移质粒,然后将该质粒与伪狂犬病病毒TK-/gG-/LacZ+基因组共转染IBRS-2细胞,待发生细胞病变后收集病毒液进行重组病毒的筛选及生物学特性测定。结果利用检测PCV2ORF2基因和LacZ基因的PCR方法筛选到重组病毒TK-/gG-/ORF2+,同时用Southernblotting证实外源基因PCV2ORF2已成功插入到TK-/gG-/LacZ+亲本株的基因组中。间接免疫荧光试验(IFA)和Westernblotting结果显示重组病毒中PCV2ORF2基因获得了成功表达。对重组病毒的生物学特性研究表明,重组病毒与其亲本株在不同细胞上的增殖滴度相当,且重组病毒对小鼠无致病性,免疫小鼠后可诱导机体产生抗ORF2蛋白的特异性抗体。结论重组伪狂犬病毒构建成功,且表达的ORF2蛋白具有免疫原性。 展开更多
关键词 2型圆病毒 ORF2基因 伪狂犬病毒 TK^-/gG^-/ORF2^+ 鉴定
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猪II型圆环病毒四川分离株鉴定及其ORF2基因序列分析 被引量:6
6
作者 王新 郭万柱 +6 位作者 朱玲 徐志文 颜其贵 王印 王小玉 罗燕 周婷 《中国病毒学》 CSCD 2005年第4期438-440,共3页
The PCV-2 positive tissues by PCR-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) were inoculated to the PK-15 cells not contaminated by PCV. The viral particles were observed in the infected PK-15 cells by eletro... The PCV-2 positive tissues by PCR-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) were inoculated to the PK-15 cells not contaminated by PCV. The viral particles were observed in the infected PK-15 cells by eletronmicroscope .It was concluded that the isolate was PCV-2 and was named SCH-A strain.The capsid protein gene(cp) in ORF2 was amplified from PK-15 cell line infected with SCH-A strain by PCR, and was cloned and sequenced.The nucleotide sequences of ORF2 gene of the SCH-A strain was compared with other porcine circovirus isolates.The results showed that the homologies of nucleotides were between 90.5% and 96.7% in comparision with the PCV-2 reference strains,but the homologies of nucleotides were only about 67% with the PCV-1 reference strains. SCH-A strain displayed the highest nucleotide homology((96.7)%) with the reference strain Hunan .Phylogenetic tree analysis showed ORF2 gene of the SCH-A isolate belongs to PCV-2 . 展开更多
关键词 猪Ⅱ型圆病毒(pcv-2) 分离 ORF2基因 序列分析
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猪2型圆环病毒核酸疫苗的研制及其对小白鼠的免疫效果 被引量:5
7
作者 尹业师 黄伟坚 +4 位作者 刘海鹏 冯建远 谢丽华 温荣辉 李军 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期155-159,共5页
为研制猪2型圆环病毒(PCV2)新型核酸疫苗,以pcDNA3为载体,与PCV2的ORF2及其高变区V1、V2、V3、V1-V2连接,分别成功构建了真核表达质粒pcDNA3-ORF2、pcDNA3-V1、pcDNA3-V2、pcDNA3-V3和pcDNA3-V1-V2。对阳性真核表达质粒大量生产并纯化后... 为研制猪2型圆环病毒(PCV2)新型核酸疫苗,以pcDNA3为载体,与PCV2的ORF2及其高变区V1、V2、V3、V1-V2连接,分别成功构建了真核表达质粒pcDNA3-ORF2、pcDNA3-V1、pcDNA3-V2、pcDNA3-V3和pcDNA3-V1-V2。对阳性真核表达质粒大量生产并纯化后,以每只小白鼠0.2 mg免疫5周龄左右的雌性小白鼠,然后用ELISA检测免疫小白鼠血清中抗体的产生情况。结果显示,这5种真核表达质粒均能刺激小白鼠产生特异性抗体,但相比之下,真核表达质粒pcDNA3-V1-V2诱导小白鼠产生的抗体水平更高,维持的时间更久。表明质粒pcDNA3-V1-V2的免疫效果较好,有望成为防制猪2型圆环病毒的候选疫苗。 展开更多
关键词 2型圆病毒 核酸疫苗 免疫效果
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陕西7个地区猪2型圆环病毒(PCV2)感染的血清学调查 被引量:8
8
作者 祝卫国 党如意 +2 位作者 杨增岐 王建华 王旭荣 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2007年第7期37-38,共2页
关键词 血清学调查 2型圆病毒 陕西省 感染 间接ELISA方法 PCV2 发生情况 PMWS
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猪2型圆环病毒SYBR Green荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:5
9
作者 郭慧娟 李秀丽 +4 位作者 张国伟 鄢明华 王利丽 张莉 孙英峰 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2014年第3期68-73,共6页
通过对荧光定量PCR反应条件的优化,建立了一种检测PCV2的SYBR Green荧光定量PCR方法。试验结果表明,该方法特异性强,与猪1型圆环病毒、猪流感病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒等均无交叉反应。该方法最低可检测到10拷贝/μL... 通过对荧光定量PCR反应条件的优化,建立了一种检测PCV2的SYBR Green荧光定量PCR方法。试验结果表明,该方法特异性强,与猪1型圆环病毒、猪流感病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒等均无交叉反应。该方法最低可检测到10拷贝/μL的DNA,比PCR检测方法敏感性高1 000倍;其标准曲线线性范围是6.84×102~6.84×107拷贝,且具有良好的重复性。 展开更多
关键词 2型圆病毒 SYBR Green 荧光定量PCR 标准曲线
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猪2型圆环病毒Cap蛋白在伪狂犬病病毒中的表达 被引量:4
10
作者 宋云峰 肖少波 +3 位作者 曹胜波 张松林 陈焕春 金梅林 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期155-158,共4页
用EcoR酶切伪狂犬病病毒疫苗株Tk-/gE-/LacZ+基因组,与含有猪2型圆环病毒(PCV2)ORF2基因的重组转移载体pIEORF2共转染IBRS-2细胞。收集病变细胞,经空斑纯化和PCR鉴定,获得了新的重组病毒Tk-/gE-/ORF2+。用Southern blot杂交证明该重组... 用EcoR酶切伪狂犬病病毒疫苗株Tk-/gE-/LacZ+基因组,与含有猪2型圆环病毒(PCV2)ORF2基因的重组转移载体pIEORF2共转染IBRS-2细胞。收集病变细胞,经空斑纯化和PCR鉴定,获得了新的重组病毒Tk-/gE-/ORF2+。用Southern blot杂交证明该重组病毒构建正确,用间接免疫荧光法和Western blot证明该重组病毒可表达PCV2的主要免疫原性蛋白Cap蛋白。重组病毒在IBRS-2细胞上连续传15代后,遗传稳定。该重组病毒在IBRS-2细胞上增殖滴度为10-7.1TCID50/0.1mL,在鸡胚成纤维细胞上增殖滴度为10-4.8TCID50/0.1mL,在Marc-145细胞上增殖滴度为10-6.8TCID50/0.1mL。 展开更多
关键词 2型圆病毒(PCV2) CAP蛋白 ORF2基因 疫苗
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猪Ⅱ型圆环病毒ORF1、ORF2基因串联重组腺病毒的构建及其免疫效果 被引量:2
11
作者 祝卫国 王旭荣 +4 位作者 宋长绪 杨增岐 王建华 张春红 黄忠 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2008年第3期75-79,84,共6页
【目的】构建含PCV2ORF1和ORF2基因的串联重组腺病毒,并对其免疫效果进行评价。【方法】扩增PCV2的ORF1和ORF2基因,串联克隆入pMD18-T载体后亚克隆入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,阳性穿梭质粒经PmeⅠ酶线性化后与骨架载体pAdeasy-1在... 【目的】构建含PCV2ORF1和ORF2基因的串联重组腺病毒,并对其免疫效果进行评价。【方法】扩增PCV2的ORF1和ORF2基因,串联克隆入pMD18-T载体后亚克隆入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,阳性穿梭质粒经PmeⅠ酶线性化后与骨架载体pAdeasy-1在细菌BJ5183内完成重组,获得重组腺病毒质粒。将重组腺病毒质粒用PacⅠ酶线性化后转染293细胞,包装成重组腺病毒,然后从致细胞病变、荧光检测及PCR检测等方面对该重组腺病毒进行了鉴定。以该重组腺病毒免疫小鼠,对免疫鼠血清中PCV2的特异性抗体进行检测。【结果】得到了PCV2的ORF1和ORF2基因,pMD18-ORF1-ORF2和pAdCMV-ORF1-ORF2载体构建成功,获得了含有PCV2ORF1和ORF2基因的重组腺病毒。该重组腺病毒免疫小鼠后,在小鼠血清中可检测到PCV2的特异性抗体。【结论】成功构建了含PCV2ORF1和ORF2基因的重组腺病毒,此腺病毒可诱导机体产生针对PCV2的特异性抗体。 展开更多
关键词 猪Ⅱ型圆病毒 ORF1 ORF2基因 重组腺病毒 免疫效果
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猪2型圆环病毒核酸疫苗的接种Balb/c小鼠实验免疫研究 被引量:14
12
作者 金宁一 秦晓冰 +4 位作者 郑敏 鲁会军 张洪勇 尹革芬 葛淑敏 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期76-79,共4页
为了筛选得到较理想的核酸疫苗,用pVAX1真核表达载体,以猪白介素18基因、猪2型圆环病毒内蒙株的衣壳蛋白和与复制相关蛋白基因为目的基因,构建了4个重组质粒,分别是pVAX1-ORF2、pVAX1-UL18ORF2、pVAX1-ORF2ORF1和pVAX1-IL18ORF2ORF1。... 为了筛选得到较理想的核酸疫苗,用pVAX1真核表达载体,以猪白介素18基因、猪2型圆环病毒内蒙株的衣壳蛋白和与复制相关蛋白基因为目的基因,构建了4个重组质粒,分别是pVAX1-ORF2、pVAX1-UL18ORF2、pVAX1-ORF2ORF1和pVAX1-IL18ORF2ORF1。用它们免疫6-8周龄Balb/c小鼠,进小鼠后一周首免,每隔19d免1次,共免3次;每10d采血1次,三免后10d杀鼠取脾。用ELISA方法检测小鼠血清抗体效价,流式细胞仪检测脾T淋巴细胞亚类CD4+、CD8+数量。统计学分析发现:4个核酸疫苗实验免疫组均是从最后一次采集的小鼠血清中,获得最高的抗体效价,与对照组PBS和空载体pVAX1相比都能产生一定的体液免疫反应,且以pVAx1-IL18ORF2ORF1核酸疫苗免疫小鼠产生的血清抗体效价最高;脾T淋巴细胞亚类数量测定发现,免疫实验组的CD4+与CD8+的T细胞亚类总数显著高于对照组(P<0.05),并以pVAX-1-IL18ORF2ORF1数值较高。结论是核酸疫苗pVAX1-IL18ORF2ORF1既能较好地刺激细胞免疫又能产生一定的体液免疫反应,相对较好,将作为候选核酸疫苗进行下一步本体动物免疫实验研究。 展开更多
关键词 BALB/C小鼠 2型圆病毒 核酸疫苗 免疫研究 血清抗体效价 淋巴细胞亚类 体液免疫反应 ELISA方法 接种 真核表达载体 流式细胞仪 统计学分析 目的基因 蛋白基因 衣壳蛋白 重组质粒 免疫小鼠 数量测定 免疫实验 细胞免疫
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猪2型圆环病毒ORF1与ORF2基因和伪狂犬病毒基因的重组与表达的研究 被引量:14
13
作者 琚春梅 陈焕春 +2 位作者 樊惠英 刘正飞 曹胜波 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期370-374,共5页
根据GenBank发布的猪2型圆环病毒(PCV2 )序列(AY0 35 82 0 ) ,设计两对特异性引物,采用PCR方法,分别扩增了猪2型圆环病毒ORF1和ORF2基因。将ORF1和ORF2基因的PCR产物回收并酶切后,依次插入到伪狂犬病毒gE gI双缺失通用转移载体pIECMV中... 根据GenBank发布的猪2型圆环病毒(PCV2 )序列(AY0 35 82 0 ) ,设计两对特异性引物,采用PCR方法,分别扩增了猪2型圆环病毒ORF1和ORF2基因。将ORF1和ORF2基因的PCR产物回收并酶切后,依次插入到伪狂犬病毒gE gI双缺失通用转移载体pIECMV中,构建了猪2型圆环病毒_伪狂犬病毒重组中间转移质粒pIEORF1_ORF2。采用脂质体介导法,将重组中间转移质粒pIEORF1_ORF2与伪狂犬病毒TK- gE- LacZ+ 基因组共转染IBRS_2细胞,待发生细胞病变后收集病毒液进行空斑纯化,利用检测PCV2ORF1基因和ORF2基因的PCR方法筛选重组病毒TK- gE- gI- ORF1-ORF2 + ,用Southernblotting鉴定重组病毒,并用Westernblotting检测ORF1_ORF2融合蛋白的表达情况,在此基础上也测定了重组病毒在不同细胞上的增殖滴度。结果表明,外源基因ORF1和ORF2已成功插入到TK- gE- LacZ+ 亲本株的基因组中,并获得了表达,表达的蛋白可与PCV2阳性血清发生反应。同时发现ORF1和ORF2基因的插入不影响重组病毒的增殖特性,其毒力与亲本株相当。 展开更多
关键词 2型圆病毒 ORF1基因 ORF2基因 伪狂犬病毒 TK^-/gE^-/gI^-/ORF1-ORF2^+
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猪Ⅱ型圆环病毒-伪狂犬重组病毒活疫苗SA215(C)株的构建(初报) 被引量:2
14
作者 王印 郭万柱 +3 位作者 王新 徐志文 朱玲 王小玉 《四川农业大学学报》 CSCD 2006年第2期125-129,共5页
根据GenBank发表的PCV2序列设计一对特异性引物,采用PCR方法,扩增PCV2 ORF2基因,将ORF2基因插入到含有EGFP报告基因的转移载体质粒pPI-2.EGFP,获得重组中间转移质粒pPI-2.EGFP-ORF2。采用脂质体介导法,将重组中间转移载体pPI-2.EGFP-ORF... 根据GenBank发表的PCV2序列设计一对特异性引物,采用PCR方法,扩增PCV2 ORF2基因,将ORF2基因插入到含有EGFP报告基因的转移载体质粒pPI-2.EGFP,获得重组中间转移质粒pPI-2.EGFP-ORF2。采用脂质体介导法,将重组中间转移载体pPI-2.EGFP-ORF2与伪狂犬病毒SA215株基因组共转染真核ST细胞,通过空斑纯化得到了表达猪Ⅱ型圆环病毒ORF2基因和绿色荧光蛋白基因的重组伪狂犬病毒SA215(C)。经检测,重组病毒能表达具有生物活性的ORF2基因蛋白和绿色荧光蛋白。并且重组病毒及亲本株在同一细胞上的增殖滴度基本相同,表明EGFP和PCV2 ORF2基因的插入不影响PRV SA215的增殖。该重组病毒可作为猪Ⅱ型圆环病毒和伪狂犬病毒候选疫苗毒株。 展开更多
关键词 猪Ⅱ型圆病毒 ORF2基因 伪狂犬病毒 重组病毒
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16株猪2型圆环病毒全基因组克隆及序列分析 被引量:4
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作者 莫敏 王静梅 +2 位作者 李劼 王忠山 剡根强 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2012年第1期37-42,共6页
采用猪2型圆环病毒(PCV2)型特异性引物,通过PCR方法直接从疑似PMWS病猪肺、淋巴结病料中扩增出16株PCV2的全基因组序列,将扩增产物回收连接到pMD19-T,转化到DH5α后进行克隆测序。结果显示:16株PCV2中,有12株基因组全长为1767bp,1株全长... 采用猪2型圆环病毒(PCV2)型特异性引物,通过PCR方法直接从疑似PMWS病猪肺、淋巴结病料中扩增出16株PCV2的全基因组序列,将扩增产物回收连接到pMD19-T,转化到DH5α后进行克隆测序。结果显示:16株PCV2中,有12株基因组全长为1767bp,1株全长为1766bp,3株PCV2的基因组全长为1778bp。同源性分析结果表明,16株PCV2之间的核苷酸同源性为95.7%~100%,与GenBank已发表的9株PCV2分离株基因组同源性为94.3%~99.9%,与2株PCV1分离株基因组的同源性为76.6%~77.3%;遗传进化树显示16株PCV2主要分为2种基因型,其中134-ZF1、134-ZF2、134-ZF3、141-ZF1、141-ZF2、141-ZF3、142-TL1、142-TL2、142-TL3、142-TL4、142-TL5和148-ZF3这12株与AF055394(法国株)同属于PCV2b亚型,亲缘关系较近;133-ZF1、143-2-15、148-ZF1和WJQ001与AY181946(中国株)同属于PCV2d亚型,组成一个分支。所得的16株PCV2的ORF2核苷酸及其所推导的氨基酸序列与参考株同源性分别为90.2%~99.9%和92.1%~100.0%,存在较大的变异。 展开更多
关键词 2型圆病毒 基因克隆 序列分析 ORF2
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猪2型圆环病毒ORF2基因在塞姆利基森林病毒RNA复制子衍生的新型真核表达载体中的表达 被引量:1
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作者 罗玉子 仇华吉 +4 位作者 刘建华 韩凌霞 李娜 张守发 童光志 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期948-952,共5页
猪 2型圆环病毒 (porcinecircovirus 2 ,PCV2 )是断乳仔猪多系统衰竭综合征 (postweaningmultisystemicwastingsyndrome,PMWS)的原发性病原。PCV2的ORF2编码病毒唯一的结构蛋白Cap。根据GenBank中公布的PCV2JXL株的序列设计一对引物 ,应... 猪 2型圆环病毒 (porcinecircovirus 2 ,PCV2 )是断乳仔猪多系统衰竭综合征 (postweaningmultisystemicwastingsyndrome,PMWS)的原发性病原。PCV2的ORF2编码病毒唯一的结构蛋白Cap。根据GenBank中公布的PCV2JXL株的序列设计一对引物 ,应用PCR方法从该毒株感染的PK 15细胞中扩增出完整的ORF2基因 ,将此基因克隆于本实验室此前构建的塞姆利基森林病毒 (SemlikiForestvirus,SFV)RNA复制子衍生的新型真核表达载体pSFV1CS中的BamHⅠ位点 ,获得重组质粒pSFV1CS Cap。用pSFV1CS Cap分别转染BHK 2 1细胞和 2 93T细胞 ,经间接免疫荧光试验检测表明 ,PCV2ORF2基因在转染细胞中得到表达。小鼠接种试验表明 。 展开更多
关键词 断乳仔猪多系统衰竭综合征 2型圆病毒 塞姆利基森林病毒 RNA复制子
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三株猪2型圆环病毒甘肃分离株的全基因组序列分析 被引量:1
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作者 马友记 柳纪省 +4 位作者 李志勇 殷相平 杨彬 李发弟 张利 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2007年第3期1-6,共6页
根据GenBank中发表的猪2型圆环病毒(PCV2)全基因组序列,设计合成了2对引物,采用PCR方法对来自甘肃不同猪场的3份病料中的PCV2进行基因的扩增、克隆和测序,得到全基因组长度为1 768 bp的PCV2Ww株(登录号DQ322701)以及全基因组长度为1... 根据GenBank中发表的猪2型圆环病毒(PCV2)全基因组序列,设计合成了2对引物,采用PCR方法对来自甘肃不同猪场的3份病料中的PCV2进行基因的扩增、克隆和测序,得到全基因组长度为1 768 bp的PCV2Ww株(登录号DQ322701)以及全基因组长度为1 767 bp的PCV2 LZ株和TS株(登录号DQ363860和DQ355153).应用DNAstar软件序列分析可得,3个分离株全基因组与国内外参考毒株核苷酸序列同源性在94.8%~99.4%,3个分离株之间的核苷酸序列同源性为96.4%~99.4%;PCV2分离株与PCV1分离株核苷酸序列同源性为69.0%~70.0%;ORF1和ORF2所编码的氨基酸序列与国内外PCV2毒株比较,同源性也很高,分别为99.0%~99.4%和92.7%~98.7%.进化树分析表明,PCV2分离毒株在进化上存在地域上的相关性. 展开更多
关键词 2型圆病毒 基因组 ORF1 ORF2 序列分析
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猪Ⅱ型圆环病毒ORF2基因的克隆及其序列分析 被引量:1
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作者 蒋智勇 宋长绪 +2 位作者 王贵平 高向阳 赵亚华 《动物医学进展》 CSCD 2005年第3期63-66,共4页
根据GenBank中猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)ORF2基因序列,设计一对引物,应用PCR从疑似断奶仔猪多系统消耗综合征(PMWS)的死亡仔猪组织病料中扩增出ORF2基因(702 bp).将此基因片段克隆入pMD 18-T载体,筛选获得重组质粒pMD-ORF2并对其测序,结果... 根据GenBank中猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)ORF2基因序列,设计一对引物,应用PCR从疑似断奶仔猪多系统消耗综合征(PMWS)的死亡仔猪组织病料中扩增出ORF2基因(702 bp).将此基因片段克隆入pMD 18-T载体,筛选获得重组质粒pMD-ORF2并对其测序,结果表明所克隆的ORF2基因与德国分离株AF201897核苷酸序列同源性为99.5%.与其它PCV-2的ORF2核苷酸序列同源性在92.1%~99.9%之间,推导的氨基酸序列同源性在90.2%~99.5%之间. 展开更多
关键词 ORF2 猪Ⅱ型圆病毒 同源性 PCV 病料 多系统消耗综合征 猪圆病毒 基因 克隆 核苷酸序列
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猪2型圆环病毒石河子流行株全基因组的克隆和序列分析 被引量:1
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作者 张再超 乔军 +3 位作者 蔡扩军 陈创夫 孟庆玲 李劼 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2011年第6期696-699,共4页
根据已发表的猪2型圆环病毒(Porcine circovirus type 2,PCV-2)全基因组序列设计2对引物,用PCR的方法分2段克隆圆环病毒的基因,测序后拼接得到该圆环病毒的基因组。序列分析结果表明,PCV-SHZ基因组全长为1767bp(Genbank登录号:JF718784)... 根据已发表的猪2型圆环病毒(Porcine circovirus type 2,PCV-2)全基因组序列设计2对引物,用PCR的方法分2段克隆圆环病毒的基因,测序后拼接得到该圆环病毒的基因组。序列分析结果表明,PCV-SHZ基因组全长为1767bp(Genbank登录号:JF718784),基因型为PCV-2a。用DNAMAN软件将此株病毒基因组与国内其它12个省市PCV-2参考株的基因组核苷酸序列进行同源性比较,同源率为95.25%~99.55%。用MEGA软件分别对该病毒和参考株的全基因组、ORF1和ORF2进行进化树分析,结果表明PCV-2流行株在进化上存在地域上的相关性。 展开更多
关键词 2型圆病毒 基因组 序列分析
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上海地区猪2型圆环病毒病的流行病学调查和病毒基因型分析 被引量:2
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作者 孙泉云 刘键 +2 位作者 鞠厚斌 夏炉明 卢军 《畜禽业》 2015年第5期68-69,共2页
为了解上海地区猪2型圆环病毒病的流行现状,于2010-2014年间开展了流行病学调查和分离毒株的基因型分析,结果表明发病场户构成比例中,规模猪场占62.1%,专业养猪户占37.9%;PCV2引发的临床病症中,PMWS比例最高,占58.6%;PDNS次之,占24.1%,... 为了解上海地区猪2型圆环病毒病的流行现状,于2010-2014年间开展了流行病学调查和分离毒株的基因型分析,结果表明发病场户构成比例中,规模猪场占62.1%,专业养猪户占37.9%;PCV2引发的临床病症中,PMWS比例最高,占58.6%;PDNS次之,占24.1%,其它病症占17.2%;经对不同季节发病情况的统计,冬季发病比例最高,达44.8%,夏季次之,占27.6%,春季和秋季则分别占17.2%和10.4%。经对29个PCV2感染病例的病原学检测结果分析,平均混合感染率达到53.1%。经对病原学阳性样本的基因型分析,以PCV-2b感染为主,所占比例为93.1%;其次为PCV-2a,占6.9%。 展开更多
关键词 2型圆病毒 流行病学调查 基因型分析
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