PD-118057药物拯救负显性机制E637K-hERG通道的研究

目的探讨PD-118057对于纠正负显性机制E637K-hERG蛋白转运障碍的作用。方法全细胞膜片钳技术检测PD-118057干扰各种细胞模型前后hERG编码的快速激活延迟整流性钾电流(IKr)变化;采用Western blot分析PD-118057负显性机制E637K-hERG蛋白转运障碍。结果 PD-118057干扰WT-hERG后,激活电流和尾电流的电流幅度都较干扰前明显增大,但不改变通道电流的特性,只加速了通道电流的稳态失活速度。而PD-118057干扰WT/E637K-hERG前后电流幅度和通道特性都没有明显变化。Western blot结果与膜片钳结果相符合。结论 PD-118057不能纠正负显性机制E637K-hERG通道功能。

PD-118057对抗低钾或药物所致豚鼠心肌细胞动作电位时程延长的影响

目的探讨PD-118057对hERG电流抑制的对抗作用及对不同情况导致的豚鼠心肌细胞动作电位时程(APD)延长的影响。方法利用膜片钳技术,在稳态转染hERG基因的HEK-293细胞上,分别在常规方波和动作电位钳制下观察PD-118057对多菲利特(Dof)和莫西沙星(Mox)抑制电流的逆转情况;采用酶法急性分离豚鼠的心室肌细胞,采用穿孔膜片钳技术记录豚鼠心肌细胞的动作电位,观察PD-118057对IKr抑制剂Dof和Mox、IKs抑制剂chromanol 293B以及低钾灌流情况下引起的APD延长的影响。结果在HEK-293细胞上,10μmol·L-1PD-118057能对抗Dof(15 nmol·L-1)、Mox(100μmol·L-1)对hERG电流的抑制,明显增加了激活电流和尾电流;以心室肌动作电位诱发出hERG电流,电流形状呈"驼峰"样波形,PD-118057能逆转Dof(10 nmol·L-1)和Mox(100μmol·L-1)引起的峰值降低,但不改变电流形状和峰值的位置。在豚鼠心室肌细胞上,10μmol·L-1PD-118057能逆转Dof(15 nmol·L-1)、Mox(100μmol·L-1)、chromanol 293B(20μmol·L-1)和低钾(2.1 mmol·L-1)灌流引起的APD延长。结论 PD-118057可有效地逆转心室肌细胞APD的延长。