肺癌细胞株表面PD-L1分子表达对Treg细胞分化增殖的影响

目的研究肺癌细胞株表面PD-L1分子表达水平及如何诱导Treg细胞分化生成,为肺癌患者的免疫治疗提供可靠依据。方法首先用流式细胞法测定肺癌细胞株表面的PD-L1蛋白分子表达水平。通过作图分析,选取PD-L1表达水平最高的肺癌细胞株X作为实验使用。通过常规分离Ficooll法分离人体外周静脉血单核细胞(PBMC)后再通过免疫磁珠法分选出来的T淋巴细胞经过不同浓度PHA(植物血凝素)活化后,得出最适即活化量最大的PHA浓度。加入最适浓度的、用于活化人体外周血Treg细胞的PHA,并将肺癌细胞株与人体外周血Treg细胞共同培养,对比观察PD-L1分子对Treg细胞影响分化程度水平。以TGF-β(转化生长因子-β)与PD-L1抑制素、TGF-β抑制素的存在与否设置实验组1、2、3,最后统计学分析。结果 SPCA-1、H1299、A549肺癌细胞株表面的PD-L1分子表达水平依次为(98.5±1.1)%、(91.0±3.2)%、(20.1±6.4)%,且两组互相相比有统计学差异(P<0.05),选取的肺癌细胞株X为SPCA-1,以此进行下一步实验。通过实验组1、2、3的肺癌细胞株与人体外周血Treg淋巴细胞共同培养后发现,Treg细胞活化比例大小依次为实验组2(19.7%)、实验组3(12.5%)、实验组1(6.2%),通过对比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论肺癌细胞株表面PD-L1分子表达水平会影响Treg细胞分化生成,PD-L1抑制剂应用于肺癌治疗中能提高患者免疫力同时清除肿瘤细胞,也降低了治疗的不良反应,是肺癌免疫治疗方法的可靠依据。

负性协同刺激分子PD-L1在EAE小鼠模型中的表达

目的:检测PD-L1分子在实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)中的表达,为进一步探讨PD-L1在EAE病理过程中的作用奠定基础。方法:用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG35-55)免疫C57BL/6J小鼠制备EAE模型,进行神经功能评分,对小鼠脊髓进行HE染色、Fast-Blue染色,免疫组化检测脊髓组织PD-L1的表达,并用流式细胞术、Western Blot检测两组动物脾细胞上PD-L1的表达。结果:免疫组化显示实EAE小鼠脊髓PD-L1的表达较对照组明显增加,免疫荧光标记、流式细胞仪计数、Western Blot检测显示实验组动物脾细胞上PD-L1的表达较对照组明显增加。结论:EAE实验组小鼠PD-L1的表达在脾细胞和脊髓都较对照组明显增加。

PD-L1分子在肿瘤相关巨噬细胞介导肺癌免疫逃逸中的作用

近年来,肿瘤免疫治疗的研究取得了很大进展。免疫系统具有监测和净化肿瘤细胞的功能,在肿瘤细胞的形成中起着重要作用。目前细胞、微酶和肿瘤滤过细胞,作为树突状细胞和巨噬细胞,肿瘤微生物的活性非常重要。包括细胞因子的负调节和免疫反应的抑制,肿瘤微环境中抑制受体的负调节和T细胞的代谢活性。研究结果表明,PD-L1是近年来发现的一种重要的免疫分子,PD-1/PD-L1信号转导途径是PD-1/PD-L1信号转导途径通路激活可抑制肿瘤微环境中CD4+T和CD8+T细胞的增殖和活化,降低免疫效果,它能介导肿瘤免疫逃逸,促进肿瘤生长。本文主要研究PD-L1在肿瘤微环境中的作用,目的探讨肿瘤细胞和免疫细胞蛋白表达的调控机制及其生物学意义,肺癌免疫逃逸的机制提供了新的证据。

体外沉默PD-L1在T淋巴细胞细胞毒作用中的影响

目的讨论PD-L1(程序性死亡配体1,programmed death ligand-1)在体外免疫效应细胞对靶细胞杀伤作用中的影响。方法提取人外周血单个核细胞与肿瘤靶细胞共培养,采用RNA干扰技术构建干扰PD-L1的发卡片段真核细胞表达重组质粒,和PD-L1过表达质粒转染细胞共培养体系降低和增加PD-L1的表达量。用WESTEN BLOTTING方法检测PD-L1的下调情况。用流式细胞术检测T淋巴细胞细胞毒标志物CD107A的表达量。结果无任何处理组、空质粒组和无关si RNA组WESTERN BLOTTING检测PD-L1表达无明显变化,RNA干扰组PD-L1表达明显下调,PD-L1过表达组,PD-L1表达上调。PD-L1siRNA组流式细胞术检测CD107A的表达量上升,荧光增强,波峰右移。其他组无明显变化。结论在体外细胞实验中沉默PD-L1可以增强T淋巴细胞对肿瘤靶细胞的细胞毒活性。

非小细胞肺癌组织中PD-1/PD-L1的表达及临床意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中程序性死亡分子1及其配体(PD-1/PD-L1)的表达与NSCLC临床病理特征的关系。方法收集2016年1月至2017年6月经病理组织学确诊的NSCLC患者119例,采用免疫组化法检测PD-1/PD-L1的表达,分析其与NSCLC临床病理特征的关系。结果 NSCLC组织中PD-1的阳性表达率为67.2%(80/119), PD-L1的阳性表达率为62.2%(74/119)。PD-1表达与NSCLC患者的性别、吸烟、病理类型和K-Ras突变有关(P<0.05),而与年龄、TNM分期和表皮生长因子受体(EGFR)突变无关(P>0.05)。PD-L1表达与NSCLC患者的性别、年龄、吸烟、病理类型和EGFR突变有关(P<0.05),而与TNM分期和K-Ras突变无关(P>0.05)。结论 PD-1、PD-L1在EGFR突变和K-Ras突变的NSCLC组织中均表达升高。

程序性死亡分子-1抑制剂纳武利尤单抗治疗晚期肾癌的新进展

肾癌是成人泌尿系统最常见的肿瘤之一,现有分子靶向药物等治疗手段均存在缺陷。随着对肿瘤免疫学认识的不断加深,程序性死亡分子-1(programmed death-1,PD-1)和程序性死亡分子配体-1(programmed death-ligand 1,PD-L1)抑制剂为主的特异性靶向免疫治疗作为新的免疫疗法进入人们的视线。其中PD-1抑制剂代表药物纳武利尤单抗(Nivolumab)在肾癌的治疗研究中取得突破进展,其与分子靶向药物等的联合应用方案也在积极探索。本文从单药治疗、联合治疗等方面回顾了PD-1抑制剂Nivolumab在肾癌治疗中的研究进展,并对其进行综述。

食管鳞状细胞癌(ESCC)中PD-1/PD-L1/PD-L2的表达与临床因素及预后的相关性

目的检验程序性细胞死亡分子1(programmed cell death-1,PD-1)/PD配体1(PD ligand-1,PD-L1)/PD配体2(PD-L2)在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)患者中的表达,并评估其与临床特征及预后的关系。方法收集2007年1月至12月在复旦大学附属中山医院胸外科接受手术治疗的325例食管肿瘤患者的临床数据,通过免疫组织化学染色分析石蜡包埋的肿瘤样品及部分对应的癌旁组织中PD-1、PD-L1和PD-L2的表达,用免疫反应评分并分析其与临床特征及预后的关系。结果 PD-1、PD-L1、PD-L2三者阳性表达率分别为12.0%、52.6%、32.9%,PD-L(P<0.001)、PD-L1(P<0.001)、PD-L2(P=0.023)在癌旁组织和癌组织中的表达有差别。PD-L1的阳性表达与T分期(P<0.001)、术后分期(P=0.006)相关,PD-L2的阳性表达与T分期(P<0.001)、术后分期(P=0.002)及淋巴结转移(P=0.044)相关,与其他临床因素的相关性无统计学意义。PD-1(P=0.500)、PD-L1(P=0.058)、PD-L2(P=0.096)单阳性与患者生存状况均无明显关联。但三者表达均阴性的患者预后要显著优于仅其中一个因子表达阳性(HR=1.669)或二个以上因子表达阳性的患者(HR=1.606)。结论 PD-L1和PD-L2与ESCC患者的多个临床特征有关。虽然PD-1、PD-L1、PD-L2各自与患者预后之间无统计学意义关联,但表达均阴性的患者预后相对较好。

PD-1/PD-L1信号通路在不同组织来源间充质干细胞中免疫调节作用的研究进展

间充质干细胞(MSCs)是一类具有自我更新、多向分化、免疫调节功能的干细胞,能够从骨髓、脂肪、脐血等组织中分离得到。程序性死亡分子1(PD-1)/程序性死亡分子1配体(PD-L1)信号通路在免疫反应的负性调控和维持外周免疫耐受中发挥着重要作用。近年来,PD-1/PD-L1信号通路在MSCs中的作用逐渐受到重视。本文就PD-1/PD-L1通路在不同组织来源MSCs中免疫调节作用的研究现状进行综述。

PD-1/PD-L1的糖基化修饰对肿瘤免疫治疗影响的研究进展

糖基化修饰是一种重要的蛋白质翻译后修饰,程序性细胞死亡分子1(programmed cell death-1,PD-1)/程序性细胞死亡分子配体1(programmed cell death ligand-1,PD-L1)存在多个N-糖基化位点,其糖基化修饰显著影响免疫治疗的疗效。PD-1共有4个N-糖基化位点,分别为N49、N58、N74和N116。核心岩藻糖基转移酶8(fucosyltransferase 8,FUT8)可催化PD-1的核心岩藻糖基化。一些针对PD-1的N58位点糖基化修饰的单克隆抗体可以有效阻断PD-1/PD-L1相互作用。此外,阻断嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T-cell,CART)PD-1的N74糖基化修饰可以增强其杀伤效应。PD-L1同样含有4个糖基化位点,分别为N35、N192、N200和N219。一些重要的调控分子可以抑制或促进PD-L1的糖基化修饰,产生一定生物学效应。本文通过综述糖基化修饰对PD-1/PD-L1分子表达及功能的影响,期望为提高肿瘤免疫治疗的疗效提供基于糖基化修饰的新策略。

PD-L1和CD147在口腔鳞癌中的表达与临床意义

目的:探讨口腔鳞癌组织中免疫共刺激分子PD-L1与细胞外基质蛋白酶诱导因子CD147的表达、两者的相关性及临床意义。方法:应用免疫组化技术检测66例口腔鳞癌组织及36例正常口腔黏膜组织中PD-L1和CD147的表达,分析PD-L1、CD147表达的相关性及二者与口腔鳞癌临床病理参数的关系。结果:PD-L1在口腔鳞癌组织中表达阳性率为68.18%(45/66),正常口腔黏膜组织中表达阳性率仅为16.67%(6/36);CD147在口腔鳞癌组织中表达阳性率为74.24%(49/66),明显高于其在正常口腔黏膜组织中的表达13.88%(5/36)。PD-L1和CD147两者在口腔鳞癌组织中阳性表达率与口腔黏膜组织相比均明显升高(P<0.01)。统计学分析显示,PD-L1和CD147在口腔鳞癌组织中的高表达与患者的性别年龄、吸烟史及肿瘤的体积等因素无明显相关,但与TNM分期及鳞癌的组织分化程度紧密相关。口腔鳞癌组织中PD-L1与CD147两者相关性分析r=0.342,P值小于0.01,说明二者的表达呈显著正相关。结论:口腔鳞癌组织中PD-L1与CD147均呈高表达,并且二者的过度表达可能与口腔鳞癌的发生、发展关系密切,合并检测二者可能为OSCC的诊疗及预后指明新的方向,为口腔鳞癌的靶向治疗提供新的靶点。

临床与病理视角解读精准医学时代下免疫治疗靶标现状

近年来,以免疫检查点抑制剂为核心的肿瘤免疫治疗在实体瘤中取得了重大进展,如何筛选优势人群以及如何优化免疫联合策略,是现阶段免疫治疗的两大主题。现代病理学快速发展为实现精准免疫治疗提供了坚实的基础,本文将从临床以及病理视角解读目前免疫治疗的相关靶标,包括程序性死亡分子配体1、错配修复蛋白、肿瘤突变负荷以及组织/液态检测如何应用。

PD-1/PD-L1抑制剂的临床研究进展

继手术、化疗、放疗和靶向治疗之后,肿瘤免疫疗法现已广泛应用于临床。针对免疫检查点的单抗在抗癌治疗中取得了非常好的成绩,其中靶向PD-1/PD-L1的单抗显示出高效、低毒的优势。本文概述PD-1及其配体、PD-1/PD-L1信号通路及其靶向药物的临床研究进展。

CMTM6与PD-L1在宫颈鳞癌组织中的表达及意义

通过实验研究CMTM6与PD-L1在宫颈鳞癌病理标本中的表达情况,探讨CMTM6、PD-L1与宫颈鳞癌的临床组织学特性(发病年龄、手术病理分期和组织学分级)及与该病发生和发展的关系,为宫颈癌的临床治疗提供新思路。方法:标本选取时间范围为2017 年10月至2019 年10月在黑龙江省佳木斯大学附属第一医院妇科住院行手术治疗的宫颈鳞状细胞癌、宫颈鳞状上皮内病变、因子宫肌瘤行全切手术患者的正常宫颈组织标本。采用免疫组化法检测CMTM6、PD-L1在各组织间的蛋白表达情况。结果:CMTM6与PD-L1蛋白在宫颈鳞癌组织中明显高表达,在正常宫颈组织中极少有明显表达,而在宫颈鳞状上皮内病变组织中的蛋白表达率介于二者之间。研究表明CMTM6与PD-L1的表达呈正相关(r =0.552,P<0.05)。结论:1.CMTM6与PD-L1在正常宫颈组织中低表达,在宫颈上皮内病变组织及宫颈鳞癌中表达逐渐增强,且差异具有统计学意义,说明二者参与了宫颈鳞癌的发生发展。2.CMTM6与PD-L1在宫颈鳞癌中的表达呈正相关,说明其二者在宫颈鳞癌的侵袭、进展中存在协同作用。3.PD-L1目前作为治疗恶性肿瘤的免疫药物之一,已经允许上市并且在进一步临床研究,对PD-1/PD-L1通路有协同作用的CMTM6也可能成为宫颈鳞癌的免疫治疗的新靶点。