人程序性死亡配体2基因真核表达载体的构建及其在L929细胞株中的表达

目的：构建人程序性死亡配体2（PD-L2）基因的真核表达载体，并通过转染获得稳定表达该分子的L929基因转染细胞株。方法获取人外周血单个核细胞，通过RT-PCR方法获取PD-L2基因全长序列。并与pIRES2真核表达载体连接，通过脂质体方法转染L929细胞，经G418筛选获得稳定表达该基因的细胞株。流式细胞术鉴定PD-L2基因的表达。结果成功构建了真核表达载体pIRES2/PD-L2，建立了稳定转染该基因的L929细胞株。结论稳定表达PD-L2分子的基因转染细胞株为进一步研究该分子的生物学功能提供了物质基础。

猪PD-1分子及其配体的实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

根据猪程序性死亡因子PD-1及其配体PD-L1和PD-L2的基因序列,分别设计了特异性引物和TaqMan探针,以10倍系列稀释的重组质粒pMD-PD-1、pMD-PD-L1和pMD-PD-L2为标准品,对实时荧光定量PCR的条件进行优化,以建立定量检测这3个基因的方法。结果表明,建立的方法在1×10^2-1×10^8copies/μL模板范围内具有良好的线性关系（r^2〉0.99）,扩增效率均高于96%,可检测至少100 copies的阳性标准品。利用该方法对猪外周血单核细胞中这3个基因的表达情况进行了检测,结果也表明该方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,可应用于临床样品的检测。