中国莱姆病螺旋体PD91外膜蛋白C表达载体的构建及序列分析

目的 构建莱姆病螺旋体PD91菌株外膜蛋白C(OspC)的表达载体 ,克隆表达OspC以便用于莱姆病诊断研究。方法 设计引物 ,用PCR从PD91扩增出ospC基因 ,定向克隆到表达载体PGEX - 5X - 1,构建重组质粒。通过PCR、酶切分析及序列测定等方法鉴定重组质粒。结果 ospC基因被正确克隆到表达载体PGEX - 5X - 1中。序列测定结果证实与国外已报道的ospC基因序列同源性在 6 5 %～ 92 %。 结论 OspC的编码基因在不同菌株间的同源性存在较大的差异。PGEX -5X - 1-ospC重组质粒的成功构建 ,为我国莱姆病特异性诊断试剂的研究奠定了基础。

中国莱姆病螺旋体PD91重组外膜蛋白A的动物免疫效果分析

目的观察重组中国莱姆病螺旋体Borrelia garinii基因型外膜蛋白A(rOspA)的动物免疫效果。方法采用纯化的rOspA作抗原,以新西兰家兔、绵羊和犬为试验动物,分不同剂量组和对照组进行免疫,用间接免疫荧光法(IFA)检测其血清特异性抗体(IgG),并进行体外中和试验。结果用rOspA免疫新西兰家兔、绵羊和犬后,其血清抗体(IgG)效价较免疫前均显著升高,其几何平均滴度为1∶169,体外中和试验表明,每毫升兔抗rOspA血清可杀灭1.0×105个莱姆病螺旋体;绵羊和犬的抗rOspA血清杀菌能力因免疫剂量的不同而不同,每毫升绵羊和犬抗rOspA血清最高可杀灭1.0×106个莱姆病螺旋体。结论rOspA有较好的免疫原性,可作为中国莱姆病rOspA亚单位疫苗的一种有效成分。

中国莱姆病螺旋体伽氏疏螺旋体PD91鞭毛蛋白的基因克隆和表达

目的 对中国莱姆病螺旋体伽氏疏螺旋体基因种参照菌株PD91的鞭毛蛋白编码基因进行克隆表达与基因序列分析。方法 设计引物,用聚合酶链反应(PCR)技术获得PD91的鞭毛蛋白编码基因片段,经酶切、连接,插入质粒pET-11d中,构成重组质粒pET11d-fla,转化致大肠埃希菌BL21,提取质粒进行酶切、DNA测序和氨基酸序列分析鉴定,诱导表达,筛选高效表达株,应用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(WB)方法,鉴定重组蛋白及其抗原性。结果成功地获得了鞭毛蛋白的编码基因片段和基因重组,重组蛋白在宿主菌BL21中高效表达。WB结果显示重组鞭毛蛋白与PD91的鞭毛蛋白具有相同的抗原性。经测序显示该鞭毛蛋白的基因片段长度为1011bp,与北美莱姆病螺旋体标准株B31的DNA碱基序列及氨基酸序列比较分析,同源性分别为94.70％、95.85％。结论 在国内首次成功地对中国莱姆病螺旋体伽氏疏螺旋体基因种的鞭毛蛋白基因进行了克隆表达,并证实具有良好的抗原性,为莱姆病血清学诊断研究提供了较好的基础。

中国莱姆病螺旋体PD91重组OspC的鉴定和抗原性检测

目的 重组中国莱姆病螺旋体PD91外膜蛋白C(OspC)并在大肠埃希菌中表达 ,用于早期莱姆病诊断的研究。方法 用聚合酶链反应 (PCR)扩增出PD91外膜蛋白C基因 ,定向克隆到表达载体PET 11D ,构建重组质粒PET 11D ospC。用PCR、限制性内切酶分析及序列测定等方法鉴定重组质粒。用WesternBlot检测其抗原性。结果 OspC基因被正确克隆到表达载体PET 11D中。序列测定结果证实与国外已报道的序列存在一定的差异。OspC具有强抗原性。