原发性胆汁性肝硬化HLA-A* 0201限制性PDC-E2特异性CTL功能分析

目的:探讨原发性胆汁性肝硬化(PBC)中HLA-A* 0201限制的PDC-E2159-167特异性CTL与PDC-E2165-174特异性CTL功能。方法:分析15例HLA-A*0201阳性(A2+)PBC患者抗原肽PDC-E2159-167、PDC-E2165-174诱导的CTL对以表达HLA-A* 0201分子的T2细胞作为靶细胞的细胞毒性作用,并利用四聚体技术结合细胞内因子染色研究PDC-E2159-167特异性CTL与PDC-E2165-174特异性CTL分泌细胞因子(IFN-γ、IL-4和TNF-α)情况。结果:15例A2+PBC患者中,12例PDC-E2159-167诱导的CTL和10例PDC-E2165-174诱导的CTL对负载相应抗原肽的靶细胞特异杀伤活性大于10%(E∶T=40∶1),而对照组则均小于10%;15例A2+PBC患者从PBMC诱导的PDC-E2159-167特异性CTL和PDC-E2165-174特异性CTL中分泌IFN-γ细胞比值分别为0.33%±0.24%(0%～0.86%)、0.27%±0.24%(0%～0.75%),未检测到分泌TNF-α或IL-4的PDC-E2159-167或PDC-E2165-174特异性CTL。结论:结果表明,大部分PBC患者中HLA-A* 0201限制性PDC-E2159-167特异性CTL和PDC-E2165-174特异性CTL具有特异杀伤活性,HLA-A* 0201限制性PDC-E2特异性CTL主要分泌IFN-γ并非IL-4、TNF-α。

猪圆环病毒2型鸡痘病毒活载体疫苗诱导的CTL杀伤活性检测

通过基因工程的方法获得猪圆环病毒2型(PCV-2)二联重组鸡痘活载体疫苗vUTAL-P1-ORF2ORF1和核酸疫苗pVAX1IL-18ORF2ORF1。将采取不同的免疫方案接种本体动物猪,在二免后15 d分别采猪抗凝血,用淋巴细胞分离液处理,得到淋巴细胞作为效应细胞;构建重组质粒p Display-ORF2,并转染PK-15传代细胞,用G418多次筛选得到靶细胞。借助CytoTox 96 Non-Radioactive Cytotoxicity Assay试剂盒从细胞免疫水平的特异性细胞毒性T淋巴细胞杀伤活性评价该重组鸡痘活载体疫苗的免疫效果。结果表明,采用"Pri me pVAX1-ORF2ORF1,boost vPUTAL-P1-ORF2ORF1"的免疫方案所获得的杀伤活性最高达66.005%±2.671%(效靶比50∶1)和38.870%±2.883%(效靶比25∶1),显著高于对照组(P<0.01)。说明vUTA-P1-ORF2ORF1可以诱导猪产生高水平的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性,且以核酸疫苗首免,重组鸡痘活载体疫苗追加免疫的接种方案最优,为PCV-2基因工程疫苗的进一步研究奠定基础。

原发性胆汁性肝硬化PDC-E2特异性T细胞拮抗性模拟肽的筛选

目的筛选可拮抗原发性胆汁性肝硬化(PBC)中PDC-E2_(165-174)特异性CTL功能的模拟肽。方法以自身抗原表位PDC-E2_(165-174)(LLAEIETDKA)为原型肽,采用丙氨酸突变扫描法,通过亲和力分析及其对PDC-E2_(165-174)特异性CTL细胞毒性和分泌细胞因子等功能的抑制效应,从中筛选拮抗性模拟肽。结果8条模拟肽中,5号位突变的模拟肽(I5A)显示与HLA-A*0201分子高亲和力,5名PBC患者PDc-E2 特异性CTL对其负载的T2细胞的杀伤率均小于10％,并且I5A也未能诱导PBC患者PDC-E2特异性CTL 产生IFN-γ。在原型肽的存在下,I5A可抑制PDC-E2_(165-174)CTL细胞毒性和分泌IFN-γ,随着模拟肽浓度增加,抑制效应越强,在10 μmol／L浓度时可以明显抑制PDC-E2_(165-174)CTL的细胞毒活性和分泌IFN-γ的能力。结论模拟肽I5A(LLAEAETDKA)可能是PDC-E2_(165-174)特异性CTL的一个拮抗性多肽,其抑制效应并不是其能竞争结合靶细胞上的HLA-A*0201分子,而是对TCR的一种拮抗作用,为将来设计以TCR为基础的特异性免疫治疗提供实验依据。

HBV特异性T淋巴细胞输注治疗慢性乙型肝炎临床研究

目的 :为探讨HBV特异性T淋巴细胞疗法的抗病毒疗效。方法 :应用此疗法治疗慢性乙型肝炎 15例 ,观察治疗后肝功能、乙肝病毒标记物 (HBVM)、细胞免疫、可溶性白细胞介素 2受体 (sIL - 2R)水平变化 ,并追踪随访 1年。结果 :经该疗法治疗后患者HBsAg、HBeAg、HBVDNA滴度均有下降 ,以随访 6个月时最明显 (P <0 .0 5 )。随访 12个月时HBeAg转阴 6例(4 0 .0 0 % ) ,HBVDNA转阴 6例 (4 0 .0 0 % )。治疗后CD8明显升高 (P <0 .0 5 ) ,完全反应者 ,sIL - 2R水平明显升高 (P <0 .0 5 )。结论 :HBV特异性T淋巴细胞输注疗法有抗病毒作用及近期疗效。