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薏苡丙酮酸脱羧酶1(PDC1)基因片段cDNA克隆与分析 被引量:2
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作者 陈双建 陈大清 李亚男 《湖北农业科学》 北大核心 2009年第7期1543-1545,共3页
参考水稻、玉米的PDC1蛋白保守序列以及甘蔗的PDC基因片段,设计1对简并引物,从薏苡中克隆了PDC基因片段。经测序和在NCBI数据库进行序列相似性搜索,结果表明,该序列与甘蔗PDC基因同源性为96%,与玉米PDC3和水稻PDC2同源性分别为94%和90%... 参考水稻、玉米的PDC1蛋白保守序列以及甘蔗的PDC基因片段,设计1对简并引物,从薏苡中克隆了PDC基因片段。经测序和在NCBI数据库进行序列相似性搜索,结果表明,该序列与甘蔗PDC基因同源性为96%,与玉米PDC3和水稻PDC2同源性分别为94%和90%,推测该序列为薏苡PDC1基因片段。 展开更多
关键词 薏苡 丙酮酸脱羧酶1(pdc1) 基因克隆 生物信息学分析
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酿酒酵母PDC1基因过表达菌株的构建 被引量:1
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作者 柯崇榕 吴毕莎 +2 位作者 邵庆伟 杨威 黄建忠 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期704-708,共5页
扩增PDC1全长和Kan基因,构建带有Kanr和Ampr的整合表达载体pSH-PDC1,线性化后LiAc/SS Carrier DNA/PEG法高效转化酿酒酵母YS2-△adh2-△ald6.G418结合PCR筛选获得阳性转化子,然后转入pSH65质粒,半乳糖诱导表达Cre酶切除Kan基因,获得PDC... 扩增PDC1全长和Kan基因,构建带有Kanr和Ampr的整合表达载体pSH-PDC1,线性化后LiAc/SS Carrier DNA/PEG法高效转化酿酒酵母YS2-△adh2-△ald6.G418结合PCR筛选获得阳性转化子,然后转入pSH65质粒,半乳糖诱导表达Cre酶切除Kan基因,获得PDC1过表达菌株.荧光定量PCR分析表明过表达菌株PDC1的mRNA表达量是出发菌株的2.078倍,遗传性能稳定,生长情况与出发菌株无明显差异.发酵试验显示过表达菌株蔗糖消耗速率较出发菌株缓慢,乙醇最大积累量为72 h的12.03%,提高了5.62%.利用同源重组原理和Cre-LoxP系统,成功构建PDC1基因过表达突变株并提高了乙醇产量. 展开更多
关键词 酿酒酵母 pdc1 基因过表达 荧光定量PCR 乙醇发酵
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恒河猴外周血pDC1/pDC2的形态学研究
3
作者 张临友 郭晓彤 +4 位作者 边晓燕 张学峰 王俊峰 姚志发 夏求明 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第8期736-737,共2页
目的 研究恒河猴外周血pDC1和pDC2的形态学特征。方法 采集健康、SIV阴性的恒河猴外周血,用Ficoll-Hypaque梯度离心法提取外周血单核细胞(PBMC),利用与恒河猴有交叉反应的人单克隆抗体以及三色流式细胞仪分离pDC1和pDC2。新鲜分离和经CD... 目的 研究恒河猴外周血pDC1和pDC2的形态学特征。方法 采集健康、SIV阴性的恒河猴外周血,用Ficoll-Hypaque梯度离心法提取外周血单核细胞(PBMC),利用与恒河猴有交叉反应的人单克隆抗体以及三色流式细胞仪分离pDC1和pDC2。新鲜分离和经CD_(40)L培养的pDC1进行形态学观察。新鲜分离和经 CD_(40)L、rhIL-3和 rhGM-CSF培养的pDC2进行形态学观察。结果 恒河猴外周血树突状细胞(DC)具有较大不规则偏心的细胞核,其细胞表面有大量典型的树突状突起。结论 本研究为pDC1和pDC2作为抗原递呈细胞(APC)在排斥反应中的免疫调整功能奠定基础。 展开更多
关键词 恒河猴 外周血 pdc1/pDC2 形态学 扫描电镜 单核细胞 树突状细胞
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弱化乙醇途径关键酶活性减少酿酒酵母在丙酮酸发酵过程中副产物乙醇的积累 被引量:2
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作者 吴满珍 李鹏越 +2 位作者 苏珂 徐国强 蒋伶活 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期7-12,共6页
C4二元羧酸广泛应用于食品、医药和化工等产业。酿酒酵母被认为是生产C4二元羧酸的潜在最适微生物,但在高糖浓度及有氧条件下,它会产生大量的乙醇,对于以C4二元羧酸为目标产物来说,这会导致碳代谢流和辅助因子的损失。通过敲除PDC1和ADH... C4二元羧酸广泛应用于食品、医药和化工等产业。酿酒酵母被认为是生产C4二元羧酸的潜在最适微生物,但在高糖浓度及有氧条件下,它会产生大量的乙醇,对于以C4二元羧酸为目标产物来说,这会导致碳代谢流和辅助因子的损失。通过敲除PDC1和ADH1两个关键基因可同时弱化Pdc和Adh的活性,但导致菌体生长较弱。在最佳的培养基组成和培养条件下,双基因突变株的最大生物量与野生型菌株接近,发酵48 h时,最大乙醇产量为2.1 g/L,较野生型菌株最大乙醇产量下降了63.8%,此时,丙酮酸产量为2.0 g/L,而野生型菌株几乎不产丙酮酸。通过弱化乙醇途径关键酶活性可以有效减少乙醇形成,为解决利用酿酒酵母生产C4二元羧酸及其它有机酸中副产物问题提供了一个可供选择的策略。 展开更多
关键词 乙醇 丙酮酸发酵 酿酒酵母 pdc1 ADH1 代谢工程
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金龙油田防斜打快研究与应用
5
作者 马振旭 付仕 +1 位作者 马振源 张志强 《西部探矿工程》 CAS 2022年第8期79-82,共4页
克拉玛依油田金龙油田金龙2井区位于准噶尔盆地西部隆起中拐凸起东斜坡带,该区块地层剖面岩性为非均质发育,砾石夹层多,砂砾岩地层厚,可钻性差,地层倾角大,使用常规的钟摆钻具和满眼钻具,虽能起到很好的防斜作用,但降低了钻井速度。主... 克拉玛依油田金龙油田金龙2井区位于准噶尔盆地西部隆起中拐凸起东斜坡带,该区块地层剖面岩性为非均质发育,砾石夹层多,砂砾岩地层厚,可钻性差,地层倾角大,使用常规的钟摆钻具和满眼钻具,虽能起到很好的防斜作用,但降低了钻井速度。主要介绍使用“PDC钻头+无扶螺杆(1°)+扶正器”+MWD复合钻井技术,大大提高了机械钻速和井身质量。 展开更多
关键词 金龙油田金龙2井区 防斜打快 PDC钻头+无扶螺杆(1°)+扶正器 复合钻井
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pDC_1抑制T细胞增殖的实验研究 被引量:2
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作者 张临友 张学峰 +3 位作者 郭晓彤 王俊峰 夏求明 杨宝峰 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期1372-1373,共2页
目的 研究 pDC1体外对T细胞增殖的抑制作用。方法 采集健康恒河猴外周血 ,用Ficoll Hypaque梯度离心法和三色流式细胞仪分离 pDC1,经混合淋巴细胞培养 (MLR)研究其免疫调整功能。结果 新鲜分离的 pDC1具有较弱的刺激T细胞增殖能力 ;... 目的 研究 pDC1体外对T细胞增殖的抑制作用。方法 采集健康恒河猴外周血 ,用Ficoll Hypaque梯度离心法和三色流式细胞仪分离 pDC1,经混合淋巴细胞培养 (MLR)研究其免疫调整功能。结果 新鲜分离的 pDC1具有较弱的刺激T细胞增殖能力 ;在经CD40L培养后 pDC1即成熟DC1成为有效的T细胞刺激增殖者。结论 本实验用MLR方法成功地研究了恒河猴外周血pDC1体外抑制T细胞增殖的作用 ,为阐明pDC1诱导免疫耐受的作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 pdc1 T细胞 细胞增殖 恒河猴 细胞培养 免疫耐受
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Flt3L免疫扩增恒河猴外周血树突状细胞前体(pDC_1/pDC_2)的研究
7
作者 张临友 张学峰 +3 位作者 马北北 郭晓彤 王俊峰 夏求明 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第11期1005-1006,共2页
目的 探讨Flt3L对恒河猴外周血树突状细胞前体 (pDC1和pDC2 )的免疫扩增作用。方法 健康猴艾滋病毒SIV阴性的恒河猴每日给予rhFlt3L 10 0 μg/kg体重皮下注射 ,于第 11天在氯胺硐全麻下采集静脉血 ,用Ficoll Hypaque梯度离心法提取外... 目的 探讨Flt3L对恒河猴外周血树突状细胞前体 (pDC1和pDC2 )的免疫扩增作用。方法 健康猴艾滋病毒SIV阴性的恒河猴每日给予rhFlt3L 10 0 μg/kg体重皮下注射 ,于第 11天在氯胺硐全麻下采集静脉血 ,用Ficoll Hypaque梯度离心法提取外周血单核细胞 ,利用与恒河猴有交叉反应的人单克隆抗体以及三色流式细胞仪分离 pDC1和 pDC2 ,并与未经Flt3L作用的 pDC1和pDC2 在数量和细胞表现型上进行对比。结果 经Flt3L扩增的恒河猴外周血 pDC1和 pDC2 数量分别增加 7倍和 4倍 ,且细胞表现型和形态不发生改变。结论 Flt3L对恒河猴外周血pDC1和pDC2 具有免疫扩增作用。 展开更多
关键词 FLT3L 免疫扩增 恒河猴 外周血 树突状细胞前体 pdc1 pDC2
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恒河猴外周血pDC_1/pDC_2的分离和细胞表现型的研究
8
作者 张临友 张学峰 夏求明 《中华器官移植杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期102-104,共3页
目的 研究恒河猴外周血树突状细胞 (DC)的亚群 pDC1和pDC2 的分离方法 ,并探讨其细胞表现型。方法 采集健康、SIV阴性的恒河猴外周血 ,用Ficoll Hypaque梯度离心法提取外周血单核细胞 (PBMC) ,利用与恒河猴有交叉反应的人单克隆抗体... 目的 研究恒河猴外周血树突状细胞 (DC)的亚群 pDC1和pDC2 的分离方法 ,并探讨其细胞表现型。方法 采集健康、SIV阴性的恒河猴外周血 ,用Ficoll Hypaque梯度离心法提取外周血单核细胞 (PBMC) ,利用与恒河猴有交叉反应的人单克隆抗体以及三色流式细胞仪分离 pDC1和pDC2 ,并对其进行细胞表现型的鉴定。结果 首次分离出恒河猴 pDC1和 pDC2 细胞 ;并保持其活性。pDC1细胞表现型为Lineage-,HLA DR+和BDCA1+;pDC2 的细胞表现型为Lineage-,HLA DR+和IL 3Rα+。结论 成功分离和鉴定了与人相似的恒河猴pDC1和pDC2 细胞 ,对今后异种移植排斥反应的研究具有一定的意义。 展开更多
关键词 恒河猴 外周血 pdc1/pDC2 分离 细胞表现型 研究 树突状细胞 抗原递呈细胞
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酿酒酵母产苹果酸的还原TCA路径构建及发酵调控 被引量:5
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作者 闫道江 王彩霞 +3 位作者 周杰民 刘谊兰 杨茂华 邢建民 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1484-1493,共10页
苹果酸广泛应用于食品、化工行业。文中通过在酿酒酵母内敲除丙酮酸脱羧酶PDC1,并通过构建胞质内还原TCA的路径,即超表达丙酮酸羧化酶和苹果酸脱氢酶,成功地实现了苹果酸的生产。在野生型菌株中基本检测不到苹果酸的生成,而在工程菌株,... 苹果酸广泛应用于食品、化工行业。文中通过在酿酒酵母内敲除丙酮酸脱羧酶PDC1,并通过构建胞质内还原TCA的路径,即超表达丙酮酸羧化酶和苹果酸脱氢酶,成功地实现了苹果酸的生产。在野生型菌株中基本检测不到苹果酸的生成,而在工程菌株,苹果酸发酵浓度达到了45 mmol/L,同时副产物乙醇的产量也降低了18%。进一步通过发酵调控提高第二信使Ca2+的浓度使苹果酸的产量提高了7%,在此基础上提高丙酮酸羧化酶的辅酶生物素浓度,使苹果酸的产量达到52.5 mmol/L,较原始菌株提高了16%。 展开更多
关键词 酿酒酵母 pdc1 丙酮酸羧化酶 苹果酸脱氢酶 还原TCA途径 发酵调控
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Using transcriptomics to reveal the molecular mechanism of higher alcohol metabolism in Saccharomyces cerevisiae 被引量:1
10
作者 Danyao Cui Ling Liu +8 位作者 Xiaoyuan Zhang Liangcai Lin Xin Li Ting Cheng Chunhui Wei Yu Zhang Zheng Zhou Wei Li Cuiying Zhang 《Food Bioscience》 SCIE 2023年第1期210-219,共10页
High alcohols are important flavor compounds in alcoholic beverages,but high concentration of high alcohols is harmful to human health.Higher alcohol synthesis pathways in brewing microorganisms have been investigated... High alcohols are important flavor compounds in alcoholic beverages,but high concentration of high alcohols is harmful to human health.Higher alcohol synthesis pathways in brewing microorganisms have been investigated,but the interactions between key genes remain to be explored,especially in industrial strains of Saccharomyces cerevisiae.The PDC1 gene was considered to be the main encoding gene ofα-keto acid decarboxylase,and its deletion resulted in a 92.23%increase in isobutanol production and a 14.89%decrease in isoamyl alcohol production.Transcriptome sequencing was used to explore the effects of PDC1 gene deletion on global gene transcription levels,and deletion strategies were utilized to verify the effects of differential genes on higher alcohol production.Deletion of differential gene HMLALPHA2 increased isobutanol production by 26.23%,and decreased isoamyl alcohol and 2-phenylethanol production by 30.31%and 22.35%,respectively.The THI2,THI4,THI20 genes were proved to be related to n-propanol synthesis.In addition,HMRA2 and SIR3 genes were found to influence isoamyl alcohol synthesis pathways,and their deletion increased isoamyl alcohol production by 25.18%and 21.76%.Our discovery of new target genes is useful for elucidating the molecular mechanisms of higher alcohols and the construction of novel low-producing higher alcohol strains. 展开更多
关键词 Saccharomyces cerevisiae Higher alcohol Transcriptomics sequencing Alcoholic beverage α-keto acid decarboxylase pdc1 gene
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