含有小鼠CD40、IgG2aFc基因片段腺病毒的构建及检测

目的:构建载有小鼠CD40-IgG2aFc-IRS-GFP融合基因片段的腺病毒载体,并检测其转染293细胞后的融合蛋白表达及出毒情况。方法:提取小鼠CD40、IgG2aFc基因片段构建PDC316-IgG2aFc-IRS-GFP质粒,测序成功后包装构建Ad5-PDC316-CD40-IgG2aFc-IRS-GFP,转染293细胞。出毒后大量复制病毒并纯化,测定病毒滴度,体外感染细胞观察病毒复制及分泌目的蛋白情况并检测目的蛋白表达量。结果:成功构建了质粒及病毒,体外感染显示该病毒能有效地感染细胞并表达蛋白(荧光显示),检测目的蛋白表达量随时间点及浓度增加而增加。当病毒浓度增加到一定程度时目的蛋白表达趋于无明显差异性。结论:构建小鼠融合基因片段并成功转入细胞内、分泌表达目的蛋白是可行的,为进一步研究该病毒在大鼠体内感染及表达CD40Ig、大鼠肝移植模型免疫耐受及其机制的研究奠定基础。

构建含有小鼠CD40-IgG2aFc—IRS—GFP融合基因腺病毒并体外检测

目的构建载有小鼠CD40-IgG2aFc—IRS—GFP融合基因片段的腺病毒载体，并检测其转染293细胞后的融合蛋白表达及出毒情况。方法提取小鼠CD40、IgG2aFc基因片段构建PDC316-IgG2aFc—GFP质粒，测序成功后包装构建AdS—PDC316-CD40-IgG2aFc—GFP，转染293细胞。出毒后大量复制病毒并纯化，测定病毒滴度，体外感染细胞观察病毒复制及分泌目的蛋白情况并检测目的蛋白表达量。结果成功构建了质粒及病毒，体外感染显示该病毒能有效的感染细胞并表达蛋白（荧光显示），检测目的蛋白表达量随时间点及浓度增加而增加。当病毒浓度增加到一定程度时目的蛋白表达趋于无明显差异性。结论构建小鼠融合基因片段并成功转入细胞内，分泌表达目的蛋白是可行的，为进一步研究该病毒在大鼠体内感染及表达CD40Ig、大鼠肝移植模型免疫耐受及其机制的研究奠定了基础。