PDGF-D抗体对体外破骨前体细胞分化过程影响的相关研究

目的:用外源性血小板衍生生长因子-D抗体(Platelet-derived growth factor D antibody,PDGF-DAb)体外刺激外周血单核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),观察其对破骨前体细胞分化过程的影响。方法:采集血并分离单个核细胞,将所得细胞分为三组:诱导组(PDGF-D+PBMCs)、阻断组(PDGF-D+PDGF-D Ab)和对照组(细胞培养基+PBMCs)。于第15天应用抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色和骨吸收实验观察破骨样细胞(Osteoclastlike cells,OLCs)的分化及活性;Real-time PCR检测OLCs标志基因TRAP、Cathepsin K、MMP-9(Matrix metalloproteinases 9)mR-NA的表达;Western blot检测各组细胞中Cathepsin K蛋白的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞上清液中MMP-9的表达。结果:TRAP染色和骨吸收实验见诱导组有大量具有骨吸收功能的OLCs,而阻断组和对照组均未见。阻断组和对照组TRAP、Cathepsin K、MMP-9 mRNA的相对表达量均显著低于诱导组(P<0.05),且二组间无显著差异(P>0.05)。对照组和阻断组中Cathepsin K蛋白(Western blot检测)和MMP-9(ELISA检测)表达均低于诱导组(P<0.05),且两组间无显著差异(P>0.05)。结论:外源性PDGF-D抗体可阻断由PDGF-D诱导的PBMCs向OLCs分化过程。

Gli1和PDGF-D在结直肠癌中的表达及其临床意义

目的:探讨Gli1和PDGF-D在结直肠癌中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组织化学S-P法、Western blot法分别定性、定量检测54例结直肠癌组织及其对应30例癌旁正常组织中Gli1和PDGF-D蛋白表达情况并结合临床病例资料进行分析。结果:免疫组织化学结果显示Gli1和PDGF-D在结直肠癌中的阳性表达率分别为(72.22%、74.07%),与正常组织的阳性表达率(6.67%、33.33%)相比显著增高,差异具有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测Gli1和PDGF-D在癌组织中相对表达量分别为0.731±0.238和0.817±0.288,与正常组织0.196±0.041和0.236±0.060相比,两者表达也显著增高,差异具有统计学意义(P<0.05);Gli1和PDGF-D的表达与肿瘤的分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05),PDGF-D还与肿瘤分期有关(P<0.05);两者表达与患者的年龄、性别、肿瘤大小、侵袭深度均无明显相关性(P>0.05);Gli1和PDGF-D在结直肠癌中的表达呈正相关(P<0.05)。结论:Gli1和PDGF-D在结直肠癌中异常高表达,可能共同参与并促进结直肠癌的恶性进程。

PDGF-C、PDGF-D在大鼠肾间质纤维化过程中的作用

目的探讨血小板源性生长因子-C(PDGF-C)、血小板源性生长因子-D(PDGF-D)在大鼠肾间质纤维化模型中的表达及意义。方法将28只SD大鼠按照单侧输尿管梗阻(UUO)的方法建模,分别于造模后的3 d、1周、2周、3周分别将7只大鼠处死,取出两侧肾脏(未行手术侧的肾脏设为对照组)制作石蜡切片在光镜下观察。应用免疫组化(SABC)法检测模型大鼠肾组织中PDGF-C、PDGF-D的表达情况。结果对照组中PDGFC在肾小动脉的血管平滑肌细胞和肾小管上皮细胞中少量表达,PDGF-D主要在血管平滑肌细胞和肾小球系膜细胞表达。而模型组肾脏中PDGF-C、PDGF-D的表达显著上调,与对照组相比差异有统计学意义(P均<0.05),且肾间质及肾小管中PDGF-C、PDGF-D的表达强度与肾间质纤维化程度呈正相关(r=0.73,P<0.05;r=0.67,P<0.05)。结论 PDGF-C、PDGF-D均参与肾间质纤维化过程,并可能发挥着重要作用。

PDGF-D/PDGFR-β在胃癌中的表达及与血管形成的关系

为了探讨PDGF-D及其受体PDGFR-β在胃癌组织中的表达及其与血管生成的关系.采用免疫组织化学法检测88例胃癌手术切除标本中癌组织、癌旁组织及正常胃粘膜中PDGF-D/PDGFR-β的表达,采用CD34标记的微血管内皮细胞,计算微血管密度(MVD).分析PDGF-D/PDGFR-β的表达与胃癌临床病例特征及MVD的关系.研究发现胃癌组织中的PDGF-D/PDGFR-β的表达及MVD显著高于癌旁组织及正常胃粘膜(P<0.05).PDGF-D/PDGFR-β的表达及MVD的值与胃癌的TNM分期、浸润深度及局部淋巴结转移有关(P<0.05);MVD还与胃癌的直径有关(P<0.05),PDGF-D/PDGFR-β两者的表达呈正相关性(r=0.647,P<0.05).PDGF-D/PDGFR-β阳性组的MVD平均值高于PDGF-D/PDGFR-β阴性组(P<0.05).结果提示,PDGF-D及其受体PDGFR-β在胃癌组织中呈特异性的高表达,并与胃癌的MVD有关,可能参与胃癌的血管形成,在胃癌的进展过程中起着重要作用.

PDGF-D与MPO在大肠癌组织中的表达及临床意义

目的探讨血小板源性生长因子D(PDGF-D)与髓过氧化物酶(MPO)在大肠癌组织和大肠腺瘤组织中的表达及其临床意义。方法通过免疫组织化学染色法检测大肠癌组织及大肠腺瘤组织中PDGF-D与MPO的表达及其相关性。采用免疫组化染色方法检测88例大肠癌石蜡包埋组织、72例大肠腺瘤组织中PDGF-D与MPO的表达,并分析MPO和PDGF-D的表达与大肠癌临床病理特征的关系。结果大肠癌组织中PDGF-D与MPO阳性表达率分别为85.23%、63.64%,均显著高于大肠腺瘤组织(34.72%、27.78%),差异有统计学意义(P<0.01)。PDGF-D与MPO在大肠癌组织中的表达呈正相关(r=0.29,P<0.05)。结论 PDGF-D与MPO可能参与了大肠癌的启动及发生过程,在大肠癌的发生、发展和转移过程中起着重要作用。

PDGF-D表达与大肠癌血管形成的关系

近年来,血管生成在肿瘤发生、发展中作用的研究备受关注。研究表明,血管生成是肿瘤生长的先决条件,它为肿瘤组织提供营养物质,新生血管形成后,肿瘤细胞会呈指数增长,不仅使肿瘤生长加速、侵袭性增强,而且增加其血行转移的机会。

外源性PDGF-DD蛋白对肝癌细胞株BEL-7402的体外作用

目的:探讨外源性PDGF-DD蛋白对PDGF-D和β-PDGFR阳性表达的人肝癌细胞株BEL-7402增殖和转移相关基因VEGF及CXCR4表达的影响。方法:浓度为0～100pg/mL PDGF-DD蛋白作用于肝癌细胞株BEL-740248h,MTT检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞周期;RT-PCR检测VEGFmRNA和CXCR4 mRNA表达。结果:外源性PDGF-DD蛋白干预细胞后,可促进细胞增殖,且在0～100pg/mL范围内呈剂量依赖性;周期分布显示G0/G1期细胞比例下降,S期细胞比例增多;且上调VEGFmRNA和CXCR4 mRNA的表达。结论:外源性PDGF-DD能促进BEL-7402细胞增殖,上调VEGF、CXCR4 mRNA的表达。提示PDGF-D及其信号传导系统在肝癌的发生、发展及转移中可能发挥重要的作用,可作为肝癌预后预测指标和治疗靶点。

PDGF-D在宫颈癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨PDGF-D在宫颈癌组织中的表达。方法:应用免疫组化SP法检测caspase-9在30例宫颈鳞癌、90例宫颈上皮内瘤样变(CIN)及30例正常宫颈组织中的表达。结果:PDGF-D在五种组织中的表达逐渐增强。其中,正常宫颈组与CIN之间表达差异无统计学意义(P>0.05),与宫颈癌组表达差异有统计学意义(P<0.05);CINⅢ级和宫颈癌组之间表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:PDGF-D在宫颈癌的发生、发展起一定作用,提示新生血管的形成与宫颈癌的发生紧密相关。

血小板衍生生长因子D(PDGF-D)转基因鼠模型的鉴定

目的 :通过SouthernBlot的方法鉴定PDGF D转基因鼠。方法 :显微注射Alpha MyHC PDGF D质粒后 ,产生的PDGF D转基因c5 7小鼠养至 4～ 6周。取 0 5～ 1 0cm的小鼠尾巴 ,蛋白酶K消化过夜 ,提取基因组DNA。PCR方法初步筛选 ,阳性鼠进行进一步的SouthernBlot验证。紫外分光光度法定量基因组DNA ,EcoRI酶切过夜 ,酶切产物经纯化后 ,电泳 ,转膜。PCR方法制备Alpha MyHC PDGF D载体上特异的hGHPolyA探针 ,然后由32 P dCTP标记探针 ,与转好的膜相互杂交 ,- 70摄氏度在X光片上曝光约 1个月 ,得到转基因鼠鉴定的结果。结果 :SouthernBlot显示 4笼共 2 0只PDGF

绵羊PDGF-D基因多态性与尾型的关联

旨在研究血小板源性生长因子-D(platelet-derived growth factor-D, PDGF-D)与绵羊尾型的关系,寻找可用的分子标记,同时对前期的研究结果进行验证。本研究在533只绵羊(湖羊、藏羊、杜泊×湖羊杂交羊)试验群体中,选取藏羊、湖羊两个品种各30个个体的血液样本,等量混合分别构建两个DNA混池,对PDGF-D基因的外显子及其上下游1 000 bp扩增,目的片段测序分析后,采用飞行质谱方法对检测到的SNP位点进行基因分型,Haploview4.1软件对突变位点进行连锁不平衡分析,使用SPSS19.0软件对PDGF-D基因SNP位点与尾型性状进行关联分析。结果显示,在PDGF-D基因及其上下游1 000 bp共找到6个突变位点,其中rs5、rs27、rs28与尾长、尾宽及尾周长均相关,rs6、rs19仅与尾长相关,rs13与尾宽、尾周长均显著相关(P<0.05)。连锁不平衡分析结果表明,rs6～rs13之间存在强连锁;组合基因型与尾型关联分析结果显示,CCGG型个体无论是在尾长、尾宽还是在尾周长上,其平均值均显著(P<0.05)或者极显著(P<0.01)低于其他组合基因型,但在群体中的数量较少。结果表明,PDGF-D基因对绵羊的尾型有着较为显著的影响,其SNP位点作为分子标记对于绵羊尾型选育工作有着一定的指导意义,可考虑将CCGG型作为筛选小尾绵羊的潜在分子标记,但是该基因型个体在群体中所占的比重较小,可适当增强人工选育以扩大数目。

HIF-1α及PDGF-D与前列腺癌相关性的研究进展

低氧环境是恶性肿瘤快速生长与侵袭、转移的重要因素之一,肿瘤的发生及侵袭还依赖于充足的微血管形成和血液供应。其中,缺氧诱导因子1α(HIF-1α)在调节细胞内氧代谢的过程中起着重要的作用,同时,血小板源性生长因子D(PDGF-D)是重要的血管生长因子和强有力的促细胞分裂原。本文对HIF-1α和PDGF-D在前列腺癌中的最新研究进展进行综述。

CD24mRNA和PDGF-D mRNA在结直肠癌组织中的表达及意义

目的检测CD24mRNA和PDGF-D mRNA在结直肠癌组织及切缘正常组织的表达情况,探讨两者与结直肠癌发生发展的关系。方法收集54例结直肠癌组织及其相应的切缘正常组织,用RT-PCR方法分别检测两种组织中CD24mR-NA和PDGF-D mRNA的表达水平,应用SPSS17.0统计学软件分析它们与临床病理之间的关系。结果 CD24mRNA和PDGF-D mRNA在结直肠癌组织中的表达水平高于切缘正常组织(0.8322±0.0856:0.2065±0.0871,0.8482±0.0692:0.2533±0.0716)。CD24mRNA的表达与结直肠癌的浸润程度有关(P<0.05),与年龄、肿瘤的分化程度、Duke's分期、肿瘤大小等因素无关(P>0.05)。PDGF-D mRNA的表达与年龄、肿瘤的分化程度、Dukes分期有关(P<0.05),与结直肠癌的浸润程度、肿瘤大小因素无关(P>0.05)。相关分析表明CD24mRNA和PDGF-D mRNA在结直肠癌组织中表达呈正相关(rs=0.383,P=0.004)。结论 CD24和PDGF-D在结直肠癌组织中均呈高表达,且与结直肠癌的发生发展密切相关,提示两者可能成为结直肠癌早期诊断和评价预后的新指标,并为结直肠癌的靶向治疗提供新思路。

PDGF-D在肿瘤生长及肿瘤靶向VEGF治疗中的研究现状

恶性肿瘤的发生发展、侵袭、转移均依赖新生血管的生成。血小板源性生长因子-D(Platelet-derived growth factor-D,PDGF-D)是重要的血管生成因子,可通过调节血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达来抵消或加强肿瘤靶向VEGF治疗的有效性,还可通过激活其他非VEGF依赖的血管生成通路,降低肿瘤靶向VEGF治疗的效果。联合PDGF-D、VEGF将为肿瘤的治疗提供新的方向。

PDGF-C和PDGF-D对心血管系统疾病影响的研究进展

心血管系统是发育过程中最早形成的器官之一,对其他器官和组织的形成和功能起着至关重要的作用。心血管系统的功能和稳态受到许多重要分子的精细调控,大量的研究表明血小板源性生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)及其受体是心血管系统的重要调节因子。尽管PDGF-C和PDGF-D是PDGF家族中相对较新的成员,但它们作为血管生成和生存因子在心血管系统中的重要作用已得到充分证明。本文就PDGF-C和PDGF-D对心血管系统疾病的影响作一综述。

Livin、caspase-9、PDGF-D及VEGF与宫颈癌发生发展关系的研究进展

肿瘤的发生、发展不仅和细胞的增殖及凋亡失衡有关,也与血管形成关系密切。宫颈癌是近年来危害女性健康的最常见恶性肿瘤之一,现就近年来与宫颈癌发生发展相关的Livin、caspase-9、PDGF-D及VEGF研究进展综述如下。

川南地区龙马溪组中深层与深层页岩孔隙结构对比研究

页岩气勘探方向已由中深层页岩向深层页岩逐渐转变,但中深层、深层页岩孔隙结构特征差异不清,控制因素不明,制约了对深层页岩气成储成藏机理的认识。为此,基于场发射扫描电镜、高压压汞、氮气吸附实验及有机地球化学参数,对川南长宁、丁山地区的龙马溪组中深层、深层页岩的地质特征、岩石特征和孔隙结构等进行对比研究。研究表明:川南地区中深层和深层页岩样品的碳酸盐岩矿物和石英含量差异较大,黏土矿物含量均较高;长宁地区中深层页岩有机质均匀发育,但孔隙较小,溶蚀孔与粒间孔较发育,而丁山地区深层页岩原生粒间孔与有机质孔较为发育且有机质孔隙较大;长宁地区中深层页岩的孔体积与比表面积主要由微孔贡献,而丁山地区深层页岩的孔体积与比表面积主要由中孔和宏孔贡献;沉积环境不同造成矿物组分的差异是导致2套页岩孔隙结构差异的主要因素之一。研究成果对深化深层页岩成储机制具有重要意义。

黄瓜抗病基因类似序列(RGA)的同源性分析和Southern鉴定

使用ClustalW和DNAMAN3.0分析了本实验室克隆的15个黄瓜抗病基因类似序列(RGA)之间以及与烟草的N基因、亚麻的L6基因和拟南芥的RPS2基因之间的同源性,并对这些RGA进行了PCR和Southern验证与分析。结果表明:15个黄瓜RGA中,核苷酸序列同源性最高的是CsRGA2、CsR-GA4和CsRGA5,其次是CsRGA6、CsRGA7、CsRGA8和CsRGA9,CsRGA1和CsRGA3也存在较高的同源性;其余的RGA同源性较低。在氨基酸序列上也表现了相同的特征。与N、L6和RPS2等抗病基因的产物之间同源性最高46%,最低22%。根据核苷酸序列设计了15对特异引物,用PCR方法验证了所有黄瓜RGA的存在,其中CsRGA3在黄瓜品种间表现出多态性。利用特异引物PCR方法合成了15个黄瓜RGA的地高辛探针,与EcoRⅤ酶解的黄瓜‘215’、‘129’和‘L18’的基因组DNA进行Southern杂交,证实了各个RGA在基因组上的存在,同时发现,CsRGA9、CsRGA11～CsRGA15都是多拷贝,CsRGA3是单拷贝,其余为双拷贝。

血小板源性生长因子基因多态性与冠状动脉粥样斑块性质的相关性

目的:探讨PDGF-D rs3809021、rs7950273位点基因多态性与冠状动脉粥样硬化斑块性质的相关性。方法 :273例冠心病患者根据冠脉造影及血管内超声检查(IVUS)结果将粥样斑块分为稳定斑块组、易损斑块组、混合斑块组;应用聚合酶链反应(PCR)技术检测PDGF-D rs3809021、rs7950273基因多态性及测序鉴定,并与112例正常者对照。结果:PDGF-D基因rs3809021位点多态性在冠心病组和对照组的分布差异无统计学意义。PDGF-D基因rs7950273位点中,携带C等位基因的基因型(CG+CC)可增加总体冠心病发病风险;易损斑块组患者的C等位基因频率分布最高。结论:PDGF-D rs7950273位点基因多态性与冠状动脉粥样硬化斑块性质相关,C等位基因使易损斑块的发生率增加,rs7950273位点C等位基因可能是冠心病的遗传易感基因。

重组质粒pcDNKCpG在动物体内分布、残留及水平传播检测

通过肌肉注射的途径将重组质粒pcDNKCpG导入到鸡和猪体内，提取不同时间段的动物组织DNA，特异性的PCR扩增结果提示重组质粒pcDNKCpG主要分布在鸡和猪的血液和注射部位肌肉中，残留时间分别不超过16天和8天；凝胶电泳回收的组织DNA经过酶切、电泳和转膜后的Southem检测表明，重组质粒pcDNKCpG没有整合到鸡和猪的任何组织DNA中去；地高辛标记的CpG核酸探针的Southem检测结果显示重组质粒pcDNKCpG没有整合入宿主的基因组中；特异性的PCR扩增结果证实重组质粒pcDNKCpG没有转移到其他的环境微生物中去。因此，重组质粒pcDNKCpG具有良好的生物安全性。

ERIC-PCR鉴别苏云金芽胞杆菌与蜡状芽胞杆菌的研究

利用ERIC-PCR技术对苏云金芽孢杆菌(Bt)、蜡状芽孢杆菌(Bc)和对照菌基因组DNA进行扩增,回收、标记BtPCR扩增片段,分别与各菌株的基因组DNA进行斑点杂交和Southern杂交,筛选Bt标识序列。结果显示:Bt各菌株均可扩增得到250bp的特异片段;Bt和Bc均可得到600bp的共有扩增片段;以筛选得到的569bp片段为探针,可特异性地与Bt基因组DNA杂交;ERIC-PCR技术可以在DNA指纹图谱水平区分鉴别Bt与Bc菌,正确反映出两者的亲缘关系。结果表明ERIC-PCR技术在Bt的检测及在Bt与Bc的鉴定中具有较强的实用性。