低氧下LDLR与PDGFR-β在牦牛肾细胞中的表达

为探究牦牛肾脏高原低氧适应性特点,比较低氧培养下牦牛肾细胞内LDLR基因和PDGFR-β基因与常氧培养下的表达差异,本试验以牦牛肾细胞作为研究对象,分别进行常氧(21%)和低氧(1%)处理,通过实时荧光定量PCR法检测细胞内LDLR基因和PDGFR-β基因的m RNA表达变化。结果显示:在低氧培养下,PDGFR-β和LDLR基因与常氧处理相比表达量显著下调(P<0.05),但PDGFR-β基因随时间增长而恢复正常水平,LDLR基因则一直处于低表达状态。此现象可能是牦牛肾脏能够适应低氧环境的主要原因之一,可为揭示牦牛低氧环境适应机制提供一定理论依据。

PDGF-D/PDGFR-β在胃癌中的表达及与血管形成的关系

为了探讨PDGF-D及其受体PDGFR-β在胃癌组织中的表达及其与血管生成的关系.采用免疫组织化学法检测88例胃癌手术切除标本中癌组织、癌旁组织及正常胃粘膜中PDGF-D/PDGFR-β的表达,采用CD34标记的微血管内皮细胞,计算微血管密度(MVD).分析PDGF-D/PDGFR-β的表达与胃癌临床病例特征及MVD的关系.研究发现胃癌组织中的PDGF-D/PDGFR-β的表达及MVD显著高于癌旁组织及正常胃粘膜(P<0.05).PDGF-D/PDGFR-β的表达及MVD的值与胃癌的TNM分期、浸润深度及局部淋巴结转移有关(P<0.05);MVD还与胃癌的直径有关(P<0.05),PDGF-D/PDGFR-β两者的表达呈正相关性(r=0.647,P<0.05).PDGF-D/PDGFR-β阳性组的MVD平均值高于PDGF-D/PDGFR-β阴性组(P<0.05).结果提示,PDGF-D及其受体PDGFR-β在胃癌组织中呈特异性的高表达,并与胃癌的MVD有关,可能参与胃癌的血管形成,在胃癌的进展过程中起着重要作用.

PDGFR-β在大鼠闭合性脑损伤中的表达

目的 观察液压冲击脑损伤后血小板衍生生长因子受体(PDGFR-β)的表达变化。方法 复制大鼠闭合性脑损伤模型,应用免疫组化和图像分析技术观察并分析大鼠脑损伤后不同时间PDGFR-β的表达情况。结果 脑损伤后1h即见PDGFR-β的表达上调,于4d达到高峰,14d时接近但仍高于对照组。结论 液压冲击脑损伤后PDGFR-β表达上调及其变化,与脑损伤后经过时间有关。

VEGFR-2、PDGFR-β和c-MET在肝细胞癌中的表达及预后分析

目的探讨血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)、血小板衍生生长因子受体β(PDGFR-β)和c-MET在肝细胞癌(HCC)中表达的临床意义及对预后的影响。方法应用免疫组织化学法检测93例HCC组织中VEGFR-2、PDGFR-β和c-MET的表达,分析其与临床病理特征和预后的关系。结果 VEGFR-2、PDGFR-β和c-MET在HCC组织中的高表达率分别为86.0%、19.4%和80.6%。VEGFR-2表达与性别、HBsAg状态、分化程度、肝硬化有关(P<0.05),PDGFR-β表达与AFP、肿瘤数目、肝硬化有关(P<0.05),c-MET表达与临床病理特征无关。Cox多因素回归分析显示,65例服用索拉非尼患者的无进展生存期(PFS)与年龄(P=0.047)有关,总生存期(OS)与HBsAg(P=0.037)、AFP(P=0.015)和肿瘤大小(P=0.003)有关;PDGFR-β表达水平与OS相关(P=0.046),c-MET与PFS相关(P=0.01)。结论 VEGFR-2在HCC合并肝硬化的患者中存在高表达,PDGFR-β高表达是HCC的预后不良指标,c-MET可能是HCC患者服用索拉非尼疗效的一个预测指标。

HEK293F细胞瞬时表达PDGFR-β/Fc蛋白的条件优化

为优化HEK293F细胞瞬时转染条件,提高PDGFR-β的蛋白表达量,采用聚乙烯亚胺(Polyetherimide,PEI)为转染试剂,将质粒p XLG-PDGFR-β/Fc与PEI混匀聚合后加入到细胞悬液,37℃,φ=6%CO2,180 r/min悬浮振荡培养,培养7 d后收集样品,ELISA检测PDGFR-β蛋白的浓度。对细胞密度、DNA浓度和m(DNA):m(PEI)、聚合时间以及添加物(丙戊酸钠、葡萄糖和蛋白胨)进行优化。结果显示,HEK293F细胞瞬时转染的最佳条件为:细胞密度4×106cells/m L、DNA浓度2.0μg/106cells、m(DNA):m(PEI)为1:2、聚合时间5 min。同时,48 h内添加3 mmol/L丙戊酸钠,第3天补加葡萄糖和1 g/L的蛋白胨TN1可使PDGFR-β/Fc的蛋白表达量明显提高。实验表明,经过对HEK293F细胞瞬时表达PDGFR-β的转染条件的优化,蛋白表达量可达55 mg/L,为更大规模瞬时转染生产PDGFR-β/Fc蛋白奠定了基础。

脑慢性低灌注大鼠脑周细胞RGS5和PDGFR-β蛋白的表达及意义

目的:探讨脑慢性低灌注白质损伤后大鼠脑周细胞RGS5(Regulators of G protein signaling 5,RGS5)、PDGFR-β(Platelet-derived growth factor receptor-beta,PDGFR-β)的表达。方法:采用蛋白免疫印迹法检测脑慢性低灌注白质损伤大鼠脑周细胞RGS5、PDGFR-β在不同时间段(术后第7、14、30、60d)表达变化。结果:(1)RGS5蛋白在对照组中有稳定的表达,与对照组相比,模型组在术后第14d明显下调(P<0.05),第30d表达增强明显(P<0.05),第60d达到高峰(P<0.05);(2)PDGFR-β蛋白在对照组中也有稳定的表达,与对照组相比,模型组在术后第30d表达至高峰(P<0.01),第60d有所下降,但仍高于正常(P<0.05)。结论:正常生理条件下,脑周细胞中有一定量的RGS5和PDGFR-β表达;脑慢性低灌注白质损伤后期阶段,脑周细胞中RGS5和PDGFR-β蛋白表达增强,且PDGFR-β先于RGS5达到表达高峰,两者表达存在时相关系。

老年宫颈鳞癌患者HPV16/18感染与癌组织PDGFR-α和PDGFR-β蛋白表达的关系

目的:在老年宫颈鳞癌患者中探索HPV16/18感染与癌组织血小板衍生生长因子受体α(platelet-derived growth factor receptor-alpha,PDGFR-α)和血小板衍生生长因子受体β(platelet-derived growth factor receptor-alpha,PDGFR-β)蛋白表达的关系以及三者之间的相互关系。方法:选取老年宫颈鳞癌患者75例、正常子宫颈组织32例,分别采用原位杂交技术检测HPV16/18感染,用免疫组织化学染色检测PDGFR-α和PDGFR-β蛋白。结果:老年宫颈鳞癌患者中HPV16/18感染率高达69.33%(52/75),而正常对照组为18.75%(6/32),老年宫颈鳞癌患者HPV16/18的感染率均显著高于对照组(P<0.05)。在对照组中检测到1例PDGFR-α蛋白的表达,表达阳性率3.13%,而老年宫颈鳞癌患者组织中检测到59例PDGFR-α蛋白的阳性表达,表达阳性率78.67%,差异有统计学意义(P <0.05);PDGFR-α蛋白的阳性表达率与宫颈鳞癌患者临床分期有关(P <0.05);在对照组中PDGFR-β蛋白阳性表达率较低为6.25%,而宫颈鳞癌患者组织中PDGFR-β蛋白表达率较高为62.67%,差异有统计学意义(P<0.05); PDGFR-β蛋白表达量与宫颈鳞临床分期(P<0.05);在72例宫颈鳞癌组织中,HPV16/18感染阳性患者共有47例,表达阳性率62.67%,其中PDGFR-α蛋白阳性有45例,表达阳性率95.74%,PDGFR-β蛋白阳性有40例,表达阳性率85.11%,显著高于未感染HPV16/18的宫颈鳞癌患者,差异有统计学意义(P<0.05),Spearman相关性分析发现PDGFR-α与PDGFR-β蛋白的表达与宫颈癌患者HPV16/18感染呈显著正相关(rs=0.428,P <0.05; rs=0.562,P <0.05);此外,在宫颈癌患者中,PDGFR-α与PDGFR-β蛋白表达水平也呈显著正相关(rs=0.639,P <0.05)。结论:老年宫颈鳞癌的发生与HPV16/18感染关系密切,在HPV16/18感染的宫颈鳞癌组织中PDGFR-α与PDGFR-β蛋白表达水平显著增高,并且在宫颈鳞癌发生、发展中起着协同作用,共同促进宫颈鳞癌的发展。

索拉非尼对Hela细胞增殖及VEGFR-3和PDGFR-β表达的影响

目的:研究索拉非尼能否抑制宫颈癌Hela细胞增殖、抑制Hela细胞中VEGFR-3和PDGFR-β的表达。方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)快速比色法检测索拉非尼作用于Hela细胞24h、48h、72h后细胞增殖率,Hoechst荧光染色观察药物作用(1mg/L)48h后的凋亡细胞,细胞免疫荧光法和Western blot检测不同浓度的索拉非尼(1mg/L、0.1mg/L、0.01mg/L)作用Hela细胞VEGFR-3和PDGFR-β表达情况。结果:不同浓度的索拉非尼作用Hela细胞后,Hela细胞的增殖率下降,呈浓度依赖性(P<0.05),随着药物浓度的增加Hela细胞的增殖率不断下降。药物作用后能观察到凋亡的Hela细胞,细胞核变小、固缩,荧光明显增强。正常Hela细胞中有VEGFR-3和PDGFR-β表达,索拉非尼作用后,Hela细胞绿色荧光明显减弱,VEGFR-3和PDGFR-β表达明显降低,呈浓度依赖性。结论:索拉非尼能够诱导Hela细胞的凋亡,抑制其增殖且呈浓度依赖性。索拉非尼能够抑制Hela细胞VEGFR-3和PDGFR-β表达,可能降低Hela细胞侵袭转移的能力。

PDGFR-β在不同年龄牦牛肺中分布和表达的研究

旨在研究血小板源性生长因子受体-β(PDGFR-β)在牦牛肺中的分布和表达,探讨牦牛肺对高原低氧环境的适应机制。采用免疫组织化学、Western-blot技术和qRT-PCR检测方法对新生、1岁、3岁及6岁牦牛肺中PDGFR-β的准确分布位置及表达量进行研究。结果显示:PDGFR-β主要分布在肺内支气管及其分支的上皮细胞、肺动脉血管内皮细胞及管壁平滑肌细胞中,其表达较强;少量分布在支气管管壁平滑肌细胞与肺泡隔细胞中,其表达较弱。在不同年龄段牦牛肺中PDGFR-β蛋白和mRNA也有不同程度的表达。在蛋白水平上,新生组极显著高于其他3组(P<0.01);1岁组、3岁组、6岁组两两相比较,差异性不显著(P>0.05)。在mRNA表达水平上,以新生组的表达最强,与其他3组相比较,差异性极显著(P<0.01);1岁组表达量极显著高于3岁组、6岁组(P<0.01);6岁组显著高于3岁组(P<0.05)。试验表明,PDGFR-β在不同年龄牦牛气道和肺动脉发育及适应性结构的形成过程中均发挥作用,以新生到1岁龄之间的表现最为明显。

PDGF-BB/PDGFR-β与肿瘤发生发展的研究进展

血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)是一类重要的促血管生成因子,是多种细胞的促有丝分裂剂和趋化因子,血小板衍生生长因子受体(platelet-derived growth factor receptor,PDGFR)是络氨酸蛋白激酶家族成员,能促进细胞的趋化增殖,PDGF和PDGFR在肿瘤发生发展中起着重要作用,以PDGF/PDGFR为靶点作为肿瘤靶向治疗的研究也有了较大的进展。

TNF-α对培养视网膜微血管内皮细胞与周细胞PDGF-B／PDGFR-β表达的作用

目的:研究TNF-α对内皮细胞与周细胞PDGF-B/PDGFR-β表达的作用。方法:常规剂量100μg/L以及大剂量2450μg/LTNF-α作用于培养的视网膜微血管内皮细胞、周细胞,通过免疫组化、Western Blot、RT-PCR检测PDGF-B/PDGFR-β表达。结果:内皮细胞组大剂量TNF-α组,PDGF-B表达显著下调,8h表达开始出现下调,在12h,PDGF-B的表达量为原来的39%;在人视网膜微血管周细胞组,与对照组相比,常规TNF-α剂量组PDGFR-β表达并未出现显著改变;大剂量TNF-α组,与对照组相比,PDGFR-β表达在12h下调为45%。结论:TNF-α可引起内皮细胞与周细胞PDGF-B/PDGFR-β表达降低。

Quercetin对HepG_2细胞的抑制作用及PDGFR-β的表达

目的 探讨植物化学物质槲皮素 (Quercetin)对人类肝癌细胞HepG2 的抑制作用和血小板衍生生长因子 β受体 (PDGFR β)表达的关系。 方法 采用免疫组化SABC法观察Quercetin抑制HepG2 中PDGFR β表达 ,并采用透射电镜观察Quercetin作用后HepG2 细胞的凋亡情况。结果 细胞增殖率检测表明Quercetin可以抑制HepG2 细胞的增殖 ,且呈剂量依赖性 ;Quercetin可以抑制HepG2 细胞PDGFR β的表达 ,且呈剂量依赖性 ;透射电镜下可见凋亡小体。结论 槲皮素对HepG2 细胞增殖有明显抑制作用 ,其机制可能是诱导PDGFR β的增加 ,再通过PDGFR

大鼠液压冲击脑损伤PDGF-B及PDGFR-β的表达

目的 观察液压冲击脑损伤后PDGF-B及PDGFR-β的表达变化情况。方法 应用免疫组化技术观察大鼠脑损伤后不何时间PDGF-B及PDGFR-β的表达情况。并应用图象分析仪进行分析。结果 脑损伤后1h可见PDGF-B及PDGFR-β表达上调，4～7d达高峰，14d时仍高于对照组。结论 液压冲击脑损伤后PDGF-B及PDGFR-β表达均上调，二者具有功能上的协调性。

树舌多糖抑制胃癌MGC-803细胞增生及对PDGFR-β表达的影响

目的研究树舌多糖(ganoderma applanatum polysaccharides,GAPS)对人胃癌MGC-803细胞形态、细胞增生和PDGFR-β表达的影响,探讨树舌多糖抗肿瘤作用机制。方法倒置荧光显微镜观察细胞形态;MTT法检测树舌多糖对胃癌细胞MGC-803增生抑制作用;荧光显微镜和流式细胞仪检测树舌多糖作用后MGC-803细胞的PDGFR-β表达的情况。结果树舌多糖组细胞形状不规则,呈梭形或圆形、细胞间隙增大折光性差,生长状态差。树舌多糖对胃癌MGC-803细胞具有增生抑制作用,且呈时间及浓度依赖性。树舌多糖能下调MGC-803细胞PDGFR-β的表达,荧光显微镜和流式细胞仪检测结果一致,与细胞对照组比较有差异(P<0.05)。结论树舌多糖能抑制胃癌MGC-803细胞的增生,下调PDGFR-β的表达。

C-kit和PDGFR-β在硬纤维瘤中的表达及意义

目的研究C-kit和PDGFR-β在硬纤维瘤中的表达及意义。方法采用免疫组化SP法检测C-kit和PDGFR-β在65例硬纤维瘤及其周围正常肌肉组织中的表达。结果 C-kit在硬纤维瘤和周围正常肌肉组织中阳性表达率分别为16.9%和13.8%,P=0.982;PDGFR-β在硬纤维瘤和周围正常肌肉组织中阳性表达率分别为73.8%和15.4%,P=0.024。结论硬纤维瘤肿瘤组织中PDGFR-β高表达,可作为潜在的靶点接受甲磺酸伊玛替尼试验治疗。

PDGFR-β抑制剂细胞筛选模型的构建及应用

目的建立针对以血小板衍生生长因子受体-β(plate-let-derived growth factor receptor-β,PDGFR-β)为靶标的特异及灵敏的细胞模型体系,用于酪氨酸激酶受体(receptor tyro-sine kinase,RTK)抑制剂的筛选和研究。方法构建人的PDGFR-β真核表达载体pcDNA3.1-PDGFR-β,将其转染至NIH 3T3细胞,获得稳定转染的细胞克隆,并对其进行功能学鉴定及应用;应用瞬时转染PDGFR-β的HeLa细胞,建立PDGF依赖性的受体磷酸化细胞模型。结果在无血清培养条件下,稳定转染人PDGFR-β的NIH 3T3细胞获得了PDGF依赖性的细胞增殖特征;HeLa细胞经瞬时转染PDG-FR-β后,可以检测出明显的PDGF依赖性的受体酪氨酸磷酸化。通过应用已知PDGFR-β抑制剂及自行合成化合物,确证了以上细胞模型具有机制针对性特征。结论所构建并确证的细胞模型具有特异性和灵敏性,适用于较高通量的PDGFR-β和其它RTK抑制化合物的体外筛选与研究。

慢性脑低灌注白质损伤后脑周细胞RGS5和PDGFR-β的表达

目的:探讨慢性脑低灌注白质损伤后脑周细胞 RGS5、PDGFR-β的表达情况。方法采用蛋白免疫印迹分析(Western blot)方法检测慢性脑低灌注白质损伤模型大鼠脑周细胞 RGS5、PDGFR-β在不同时间点(术后第7d、14d、30d、60d)表达变化。结果①RGS5蛋白在假手术组中有恒定的表达;模型组 RGS5蛋白相对表达量在术后第30d表达增强明显(P<0.01),第60d达到高峰(P<0.01);②PDGFR-β蛋白在假手术组中也有恒定的表达;模型组术后的PDGFR-β蛋白相对表达量第30d表达至高峰(P<0.01),第60d时有所下降,但仍高于正常(P<0.05)。结论正常生理条件下,脑周细胞中有一定量的RGS5和PDGFR-β表达;慢性脑低灌注白质损伤后期阶段,脑周细胞中 RGS5和 PDGFR-β蛋白表达增强,且 PDGFR-β先于 RGS5达到表达高峰,两者表达存在时相关系。

头穴透刺对脑梗死大鼠PDGFR-β、NO、PKA、Ca^(2+)影响研究

目的观察头穴透刺对脑梗死大鼠NO、PKA、PDGFR-β、Ca^(2+)的影响。方法运用线栓方法制作脑梗死的大鼠模型,对模型大鼠行头穴透刺及一般针刺,药物治疗;14 d后检测大鼠PDGFR-β、PKA及NO、Ca^(2+)的变化。结果头穴透刺明显提升大鼠PDGFR-β、PKA的表达;降低NO含量、升高Ca^(2+)离子含量。头穴透刺组的治疗效果优于其他两组。结论与其他两组比较,头穴透刺明显提升大鼠PDGFR-β、PKA的表达;降低NO含量、升高Ca^(2+)离子含量,对脑保护作用效果显著。

头穴透刺对脑梗死大鼠ET、IP_3、Mg^(2+)、PDGFR-β的影响研究

目的观察头穴透刺对脑梗死大鼠ET、IP_3、Mg^(2+)、PDGFR-β的影响。方法线栓法造模;行头穴透刺,一般针刺,药物注射治疗;2个疗程后检测ET、IP_3、Mg^(2+)、PDGFR-β。结果头穴透刺组明显提升大鼠PDGFR-β表达和降低ET、IP_3、Mg^(2+)的含量,与一般针刺组、药物治疗组对比差异有统计学意义(P<0.01)。结论头穴透刺通过对ET、IP_3、Mg^(2+)、PDGFR-β调节发挥脑保护作用。