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miR-106a通过调控PI3K/PDK1/AKT蛋白通路调节胃癌细胞生物学行为的研究
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作者 李琦 黄广智 +3 位作者 李亚军 武斌虎 肖茜 阮彩莲 《解剖学研究》 CAS 2024年第2期132-138,共7页
目的探讨miR-106a对胃癌细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法选取AGS人胃癌细胞系,经培养后分为27个样本。所有样本随机分为miR-106a inhibitor、miR-mimic、miR-NC共计3组,分别给予miR-106a抑制剂、miR-106a模拟物及安慰剂干预。... 目的探讨miR-106a对胃癌细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法选取AGS人胃癌细胞系,经培养后分为27个样本。所有样本随机分为miR-106a inhibitor、miR-mimic、miR-NC共计3组,分别给予miR-106a抑制剂、miR-106a模拟物及安慰剂干预。观察各组细胞存活率、细胞周期、细胞侵袭、迁移及caspase活性、Bax、Bcl-2、Casepase-3蛋白相对表达量、p85β、p-PDK1、p-AKT蛋白相对表达量。结果与miR-NC组比较,miR-106a inhibitor组AGS细胞活性降低[(分别为15.01±0.97)、(69.82±2.31)%](P<0.01);miR-106a mimics组AGS细胞G0/G1期细胞比例降低(P<0.05)(分别为17.33±1.04、58.24±0.82),G2/M和S期细胞比例升高(分别为50.11±1.12、35.64±1.07和31.56±0.92、9.24±0.25);miR-106a inhibitor组AGS细胞G0/G1期细胞比例升高(分别为78.43±1.12、58.24±0.82)(P<0.05),G2/M和S期细胞比例降低(分别为33.65±0.99、35.64±1.07和19.78±0.84、9.24±0.25)(P<0.01)。与miR-NC相比,miR-106a mimics组AGS细胞的迁移、侵袭能力增强,miR-106a inhibitor组AGS细胞的迁移、侵袭能力减弱(P<0.01);与miR-NC相比,miR-106a mimics组AGS细胞caspase-3、caspase-8、caspase-9活性降低,miR-106a inhibitor组AGS细胞caspase-3、caspase-8、caspase-9活性升高(P<0.05);miR-NC相比,miR-106a mimics组AGS细胞Bax(分别为0.69±0.07、1.48±0.15)、Casepase-3蛋白(分别为0.37±0.04、0.91±0.09)相对表达量降低,Bcl-2蛋白相对表达量升高(分别为1.53±0.12、0.94±0.09),miR-106a inhibitor组AGS细胞Bax(分别为2.07±0.21、1.48±0.15)、Casepase-3蛋白(分别为1.23±0.12、0.91±0.09)相对表达量升高,Bcl-2蛋白相对表达量降低(P<0.05)(分别为0.65±0.07、0.94±0.09);与miR-NC相比,miR-106a mimics组AGS细胞p85β(分别为1.24±0.12、0.94±0.09)、p-PDK1(分别为2.13±0.23、1.01±0.10)、p-AKT蛋白(分别为1.14±0.11、0.72±0.06)相对表达量升高,miR-106a inhibitor组AGS细胞p85β(分别为0.69±0.07、0.94±0.09)、p-PDK1(分别为0.75±0.07、1.01±0.10)、p-AKT(分别为0.53±0.05、0.72±0.06)相对表达量降低(P<0.05)。结论miRNA-106a表达能通过调控宫颈癌细胞PI3K/PDK1/AKT蛋白通路调控其细胞生物学行为,包括降低癌细胞活力、迁移和侵袭,诱导癌细胞细胞周期停滞,抑制miRNA-106a表达可能是胃癌患者治疗的新靶点之一。 展开更多
关键词 AGS人胃癌细胞系 miR-106a 磷脂酰肌醇激酶 磷酸肌醇依赖性蛋白激酶-1 蛋白激酶B 癌细胞生物学行为
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芹菜素通过PDK1/AKT信号通路抑制小鼠肝纤维化 被引量:5
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作者 陈鑫栋 仲威龙 +5 位作者 闫佩瑶 匡佳妮 乔锴亮 孙涛 黄飚 秦源 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期1010-1016,共7页
目的评价芹菜素对肝纤维化的治疗效果及其药理机制。方法建立四氯化碳(CCl_(4))诱导的肝纤维化小鼠模型,分别设置对照组、模型组、水飞蓟宾组(55 mg·kg^(-1)·d^(-1)),芹菜素低(15 mg·kg^(-1)·d^(-1))、中(30 mg... 目的评价芹菜素对肝纤维化的治疗效果及其药理机制。方法建立四氯化碳(CCl_(4))诱导的肝纤维化小鼠模型,分别设置对照组、模型组、水飞蓟宾组(55 mg·kg^(-1)·d^(-1)),芹菜素低(15 mg·kg^(-1)·d^(-1))、中(30 mg·kg^(-1)·d^(-1))、高剂量(60 mg·kg^(-1)·d^(-1))组,评价芹菜素对疾病小鼠一般生活状态、体重、肝脏系数等影响,利用HE、Masson染色、免疫组化,Western blot检测芹菜素对各组小鼠肝脏病理变化、肝脏细胞上皮间充质转化相关标志物和信号通路的影响。结果中、高剂量芹菜素可以显著改善CCl4诱导的肝纤维化小鼠的一般生活状态、增加体质量、降低肝系数,并显著改善肝脏的病变。中、高剂量芹菜素可以显著提高模型小鼠肝脏组织中上皮标志蛋白E-cadherin的表达,显著降低间充质标志蛋白Vimentin的表达。进一步结果显示,中、高剂量芹菜素可以抑制肝纤维化小鼠肝组织磷酸化PDK1和磷酸化AKT蛋白的表达。结论芹菜素可以通过抑制PDK1/AKT信号通路抑制肝组织细胞EMT,发挥抗肝纤维化的作用。芹菜素具有进一步研发为保肝护肝、治疗肝纤维化药物的潜力。 展开更多
关键词 芹菜素 肝纤维化 上皮间充质转化 pdk1/akt信号通路 黄酮 水飞蓟宾
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补阳还五汤对脑缺血再灌注大鼠血小板PDK1/Akt Thr308通路的影响 被引量:7
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作者 郑丽娴 朱原 +3 位作者 徐愉林 秦莎莎 姚晖 张继平 《中药药理与临床》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期1-4,共4页
目的:研究补阳还五汤预处理对急性脑缺血再灌注损伤大鼠血小板蛋白PDK1、Akt Thr308的影响,初步探讨补阳还五汤抗血小板活化作用与PDK1/Akt Thr308信号通路的关系。方法:用不同剂量补阳还五汤(29.69、14.84、7.42 g/kg)及硫酸氢氯吡格雷... 目的:研究补阳还五汤预处理对急性脑缺血再灌注损伤大鼠血小板蛋白PDK1、Akt Thr308的影响,初步探讨补阳还五汤抗血小板活化作用与PDK1/Akt Thr308信号通路的关系。方法:用不同剂量补阳还五汤(29.69、14.84、7.42 g/kg)及硫酸氢氯吡格雷(7.81×10^(-3)mg/kg)分别ig预处理大鼠,模型组、假手术组及空白组给予蒸馏水ig,1天/次,连续14天。14天后采用线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)再灌注损伤模型,缺血2h再灌注6h后进行神经功能缺损评分及脑组织TTC染色,流式细胞术(FCM)检测全血中血小板CD62P含量,Western blot检测富血小板血浆(PRP)中PDK1、Akt Thr308蛋白磷酸化水平。结果:与假手术组比较,模型组血小板CD62P显著增高;与模型组比较,补阳还五汤组(29.69、14.84、7.42 g/kg)及硫酸氢氯吡格雷组(7.81×10^(-3)mg/kg)均明显降低血小板CD62P的表达;与假手术组比较,模型组PDK1、Akt Thr308蛋白磷酸化水平显著升高,而补阳还五汤组(29.69、14.84、7.42 g/kg)及硫酸氢氯吡格雷组(7.81×10^(-3)mg/kg)PDK1、Akt Thr308蛋白磷酸化水平明显低于模型组。结论:补阳还五汤预处理可降低急性脑缺血再灌注损伤大鼠血小板CD62P含量,并降低PDK1、Akt Thr308蛋白磷酸化水平,提示补阳还五汤可能通过抑制PDK1/Akt Thr308信号通路发挥抗血小板活化作用。 展开更多
关键词 补阳还五汤 急性脑缺血再灌注损伤 抗血小板活化 CD62P pdk1/akt Thr308
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miR-1271-5p靶向PDK1促进胃癌细胞凋亡
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作者 李丽坤 邸雅南 +1 位作者 陈帝 张晶 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2023年第2期128-135,共8页
目的探讨miR-1271-5p在胃癌的作用和可能的作用机制。方法RT-qPCR和原位杂交法检测胃癌组织和胃癌细胞株中miR-1271-5p的表达。Lipofectamine 2000转染miR-1271-5p mimics后,噻唑蓝(MTT)法和台盼蓝染色法检测SGC-790细胞的活性,Annexin ... 目的探讨miR-1271-5p在胃癌的作用和可能的作用机制。方法RT-qPCR和原位杂交法检测胃癌组织和胃癌细胞株中miR-1271-5p的表达。Lipofectamine 2000转染miR-1271-5p mimics后,噻唑蓝(MTT)法和台盼蓝染色法检测SGC-790细胞的活性,Annexin V/PI染色检测细胞凋亡,JC-1探针检测线粒体膜电位,Western blot检测PDK1/Akt/凋亡信号相关蛋白的表达。荧光素酶法以及功能修复实验评估miR-1271-5p与PDK1的靶向关系。结果胃癌组织和细胞中miR-1271-5p的表达降低。转染miR-1271-5p mimics后,SGC-790细胞的存活率下降,凋亡率上升,线粒体膜电位以及Bcl-2和p-AKT表达降低,Bax和Cleaved caspase-3表达增高。PDK1为miR-1271-5p的靶基因,过表达PDK1能逆转miR-1271-5p对胃癌细胞的促凋亡作用。结论过表达miR-1271-5p可促进胃癌细胞凋亡,其机制可能与其靶向PDK1进而抑制AKT信号活性有关。 展开更多
关键词 胃癌 miR-1271-5p 凋亡 pdk1/akt信号
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基于PI3K/PDK1/AKT信号通路探究电针对荨麻疹大鼠皮肤肥大细胞脱颗粒的影响 被引量:8
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作者 刘白雪 李记泉 +4 位作者 李思佳 王列 韩易言 刘思佳 马铁明 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期2866-2870,共5页
目的:研究电针预处理血海、曲池穴对荨麻疹大鼠模型PI3K/PDK1/AKT通路相关蛋白表达的影响。方法:32只健康SD大鼠随机分为空白组、模型组、电针组、西药组,每组8只。电针组采用电针双侧血海、曲池穴,电流1 mA、疏密波、频率2 Hz,留针20 m... 目的:研究电针预处理血海、曲池穴对荨麻疹大鼠模型PI3K/PDK1/AKT通路相关蛋白表达的影响。方法:32只健康SD大鼠随机分为空白组、模型组、电针组、西药组,每组8只。电针组采用电针双侧血海、曲池穴,电流1 mA、疏密波、频率2 Hz,留针20 min,1次/d;西药组采用氯雷他定稀释液(1 mg/kg)灌胃,1次/d;空白组、模型组给予同等剂量的0.9%氯化钠溶液(1 mg/kg)灌胃,1次/d。另取3只健康SD大鼠,采用鸡卵白蛋白与免疫佐剂(卡介苗)联合注射法制备同种异体大鼠抗卵白蛋白血清。除空白组外,其余组均建立荨麻疹大鼠模型。直尺测量大鼠皮肤蓝斑直径,甲苯胺蓝染色法检测皮肤肥大细胞脱颗粒形态及数目,HE染色观察皮肤病理变化,ELISA法检测血清白细胞介素-4(IL-4)表达,免疫组织化学法检测皮下组织IgE、组胺以及皮肤组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸肌醇依赖性激酶1(PDK1)、蛋白激酶B(AKT)表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠皮肤蓝斑直径、皮肤组织炎症细胞浸润、肥大细胞脱颗粒率、皮下组织IgE和组胺,以及皮肤肥大细胞PI3K、PDK1、AKT和血清IL-4显著增多(P<0.01);与模型组比较,电针组、西药组大鼠以上指标显著减少(P<0.05,P<0.01)。结论:电针预处理血海穴、曲池穴可减小荨麻疹动物模型蓝斑直径,改善皮肤炎症反应,减少肥大细胞脱颗粒,且该效应与调控IgE介导的PI3K/PDK1/AKT信号通路激活和组胺、IL-4表达有关。 展开更多
关键词 针刺 荨麻疹 肥大细胞 脱颗粒 PI3K/pdk1/akt信号通路 血海 曲池
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LDHB调控PDK1/Akt/GSK3β信号通路促进脑胶质瘤细胞生长的研究 被引量:3
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作者 韩秀 陈曦 +6 位作者 唐宇 程洁 刘菲 许婧 彭琬昕 杜凤移 龚爱华 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2018年第4期551-559,共9页
该研究旨在探讨乳酸脱氢酶B(lactate dehydrogenase B,LDHB)基因对胶质瘤细胞生长的影响。用sh-LDHB或sh-EGFP质粒转染胶质瘤细胞,q RT-PCR和Western blot分别检测m RNA和蛋白质水平,CCK-8法和克隆形成实验分析细胞增殖能力,流式细胞术... 该研究旨在探讨乳酸脱氢酶B(lactate dehydrogenase B,LDHB)基因对胶质瘤细胞生长的影响。用sh-LDHB或sh-EGFP质粒转染胶质瘤细胞,q RT-PCR和Western blot分别检测m RNA和蛋白质水平,CCK-8法和克隆形成实验分析细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况。结果表明,转染sh-LDHB质粒后,脑胶质瘤细胞中LDHB的m RNA和蛋白质水平显著降低。敲低LDHB基因后,脑胶质瘤细胞的增殖能力明显降低,出现细胞凋亡峰(sub-G1),细胞增殖相关基因c-Myc和Cylin D1表达水平降低,同时,PDK1、Akt和GSK3β的磷酸化水平降低。研究结果表明,LDHB基因可以通过激活PDK1/Akt/GSK3β信号通路促进脑胶质瘤细胞的生长。 展开更多
关键词 脑胶质瘤 乳酸脱氢酶B pdk1/akt/GSK3β 肿瘤代谢
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基于PI3K/PDK1/Akt信号通路研究丹参-红花药对对寒凝血瘀型心肌缺血大鼠的保护作用及机制 被引量:7
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作者 王小平 薛志鹏 +6 位作者 杜少兵 周慧慧 白吉庆 李菁 王鹏飞 谢李红 陈妮 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2022年第16期5085-5092,共8页
目的 研究丹参-红花药对对异丙肾上腺素(isoprenaline hydrochloride,ISO)诱导的心肌缺血大鼠的保护作用及其机制。方法 大鼠随机分为对照组、模型组、复方丹参滴丸(73 mg/kg)组和丹参-红花低、中、高剂量(4、8、16 g/kg)组,给予相应药... 目的 研究丹参-红花药对对异丙肾上腺素(isoprenaline hydrochloride,ISO)诱导的心肌缺血大鼠的保护作用及其机制。方法 大鼠随机分为对照组、模型组、复方丹参滴丸(73 mg/kg)组和丹参-红花低、中、高剂量(4、8、16 g/kg)组,给予相应药物干预7 d。于第6天开始ig药物1 h后,大鼠于0℃的冰浴中寒冷刺激4 min,sc ISO(85 mg/kg),连续2 d。采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色法测定各组大鼠心肌梗死面积;采用TUNEL法检测各组大鼠心肌细胞凋亡情况;采用苏木素-伊红(HE)染色法观察各组大鼠心肌组织病理变化;采用ELISA法检测各组大鼠血浆中肌酸激酶同工酶(creatine kinase,CK)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、CK-肌红蛋白(myoglobin,MB)活性及心肌肌钙蛋白-Ⅰ(cardiac troponin-Ⅰ,CTn-Ⅰ)、CTn-T、C反应蛋白(C-reaction protein,CRP)、MB、N末端利钠肽前体(N-terminal pro-brain natriuretic peptide,NT-proBNP)和B型脑利钠肽(B-brainnatriureticpeptides,BNP)水平;采用Westernblotting检测各组大鼠心肌组织中磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、磷酸化PI3K(phosphorylated PI3K,p-PI3K)、磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(pyruvate dehydrogenase kinase isozyme 1,PDK1)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、p-Akt、内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,e NOS)、p-eNOS、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、核因子-κB p65(nuclear factor-κB p65,NF-κB p65)、p-NF-κB p65、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cystein-asparate protease-3,Caspase-3)和Caspase-9蛋白表达。结果 丹参-红花药对显著抑制ISO诱导的心肌缺血模型大鼠的心肌梗死面积(P<0.01);改善心肌组织病理变化;显著抑制心肌细胞的凋亡(P<0.05、0.01);显著降低血浆中心肌酶活性以及心肌蛋白水平(P<0.05、0.01);显著上调心肌组织中Bcl-2、PDK1、p-eNOS、p-PI3K和pAkt蛋白表达水平(P<0.05、0.01),降低Bax、Cyt C、剪切型Caspase-3(cleaved Caspase-3)、cleaved Caspase-9和p-NF-κB p65蛋白表达水平(P<0.05、0.01)。结论 丹参-红花药对能够通过调控PI3K/PDK1/Akt信号通路,从而发挥对ISO诱导的心肌缺血的保护作用。 展开更多
关键词 丹参-红花药对 心肌缺血 磷脂酰肌醇3-激酶/磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1/蛋白激酶B信号通路 心肌酶 心肌蛋白 丹参素 羟基红花黄色素A 迷迭香酸 紫草酸 丹酚酸B
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基于PI3K/Akt信号通路研究积雪草中微量皂苷(CA-1)的神经保护作用 被引量:2
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作者 谢元 胡烨烨 +4 位作者 李甫 胡卫成 张迹 杨晓君 杨猛 《现代食品科技》 CAS 北大核心 2022年第10期62-70,共9页
利用6-羟基多巴胺(6-Hydroxydopamine,6-OHDA)诱导分化型PC12细胞构建的帕金森病(Parkinson’s Disease,PD)体外细胞模型,研究了从积雪草中提取的微量皂苷(Centella Asiatica Saponins-1,CA-1)的神经保护作用。通过高分辨二级质谱鉴定... 利用6-羟基多巴胺(6-Hydroxydopamine,6-OHDA)诱导分化型PC12细胞构建的帕金森病(Parkinson’s Disease,PD)体外细胞模型,研究了从积雪草中提取的微量皂苷(Centella Asiatica Saponins-1,CA-1)的神经保护作用。通过高分辨二级质谱鉴定化学结构、分析了积雪草中常用皂苷和CA-1对PC12细胞存活率的影响,进一步通过半定量和实时定量聚合酶链式反应、蛋白印迹等技术检测PC12细胞中相关基因和蛋白表达。结果表明在该模型中100μmol/L CA-1、积雪草苷(Asiaticoside,AS)、羟基积雪草苷(Madecassoside,MA)分别将细胞存活率提高了28.63%、16.69%、17.54%,CA-1的神经保护作用强于AS和MA(p<0.05)。与模型组相比,CA-1剂量依赖性地提高了6-OHDA诱导PC12细胞的存活率且在CA-1浓度为25μmol/L与模型组有显著差异(p<0.05),降低了细胞内活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)的水平,上调了Sod1、Cat、Bcl2基因表达。蛋白印迹法(Western Blot,WB)显示,CA-1提高了p85、PDK1、Akt的蛋白表达水平。在该研究中明确了CA-1的神经保护作用揭示了其作用可能通过PI3K/Akt信号通路。 展开更多
关键词 积雪草 皂苷 神经保护 PI3K/akt信号通路
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Akt在非小细胞肺癌中作用的研究现状 被引量:2
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作者 陈勃江 李为民 《中国肺癌杂志》 CAS 2010年第11期1059-1063,共5页
肺癌是目前世界上最常见的恶性肿瘤之一,但其发病机制尚不完全清楚。Akt是一种重要的信号通路关键蛋白,广泛参与肿瘤细胞的生长、增殖、凋亡及侵袭等过程。本文就Akt及其重要的上下游调节分子之——PDK1、Raf-1和p70S6K在非小细胞肺癌... 肺癌是目前世界上最常见的恶性肿瘤之一,但其发病机制尚不完全清楚。Akt是一种重要的信号通路关键蛋白,广泛参与肿瘤细胞的生长、增殖、凋亡及侵袭等过程。本文就Akt及其重要的上下游调节分子之——PDK1、Raf-1和p70S6K在非小细胞肺癌中的作用研究现状做一综述,以期为阐明非小细胞肺癌的发病机制提供新的依据。 展开更多
关键词 akt pdk1 RAF-1 肺肿瘤
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PI3K/AKT/GSK-3β信号在脑缺血预处理中的作用及对海马细胞凋亡的影响 被引量:17
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作者 张慧 姜咏梅 尹琳 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期408-412,428,共6页
目的研究脑缺血预处理(CIPC)中PI3K/AKT/GSK-3β信号通路调节变化及对海马细胞凋亡的影响。方法制作脑缺血、CIPC及LY294002干预模型。进行神经功能缺损评分;TTC染色计算脑梗死体积;TUNEL法检测海马细胞凋亡;Western blot检测p-PDK1、AK... 目的研究脑缺血预处理(CIPC)中PI3K/AKT/GSK-3β信号通路调节变化及对海马细胞凋亡的影响。方法制作脑缺血、CIPC及LY294002干预模型。进行神经功能缺损评分;TTC染色计算脑梗死体积;TUNEL法检测海马细胞凋亡;Western blot检测p-PDK1、AKT、p-AKT、GSK-3β、p-GSK-3β(ser9)、Mc-l1的蛋白表达,RT-PCR检测GSK-3β的转录。结果①与脑缺血组比较,CIPC组在神经功能缺损评分、脑梗死体积、细胞凋亡、GSK-3β蛋白表达及转录水平均降低(均P<0.05),但脑缺血组与LY294002组比较,上述各检测值差异均无统计学意义(均P>0.05);②与脑缺血组比较,CIPC组的p-PDK1、p-AKT、p-GSK-3β(ser9)、Mc-l1的蛋白表达均增高,LY294002组各蛋白表达较CIPC组均降低(均P<0.05),LY294002组与脑缺血组比较各蛋白表达差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论脑缺血预处理降低GSK-3β的转录和蛋白表达,增加p-PDK1、p-AKT、p-GSK-3β(ser9)、Mc-l1的表达,减少神经元凋亡。LY294002可抵消脑缺血预处理的保护作用。 展开更多
关键词 脑缺血预处理 磷脂酰肌醇激酶-3/丝苏氨酸蛋白激酶通路 糖原合成酶激酶-3Β 髓细胞淋巴瘤-1 3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶-1
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土木香内酯对人胶质瘤U251细胞增殖、凋亡的影响
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作者 张旭 田召辉 +1 位作者 郭琳 娄永利 《中国临床神经外科杂志》 2020年第1期32-35,共4页
目的探讨土木香内酯对人胶质瘤U251细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法体外培养人胶质瘤U251细胞,取对数期生长的U251细胞分为空白对照组和土木香内酯(浓度分别为2.5、5.0、10.0μmol/L)组,每组各10个复孔。使用MTT法检测U251细胞... 目的探讨土木香内酯对人胶质瘤U251细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法体外培养人胶质瘤U251细胞,取对数期生长的U251细胞分为空白对照组和土木香内酯(浓度分别为2.5、5.0、10.0μmol/L)组,每组各10个复孔。使用MTT法检测U251细胞的增殖抑制率,采用流式细胞术检测U251细胞的凋亡率,免疫印迹法检测PDK1/Akt/GSK3β蛋白表达,使用RTPCR检测c-Myc, Cyclin D1 mRNA的表达水平。结果随土木香内酯浓度增加,U251细胞增殖抑制率明显增高(P<0.05),细胞调亡率明显增高(P<0.05)。与空白对照组相比,木香内酯组U251细胞PDK1、Akt和GSK3β蛋白表达水平均无明显差异(P>0.05),但PDK1、Akt和GSK3β蛋白的磷酸化水平均显著降低(P<0.05)。随着土木香内酯浓度的增加,U251细胞c-Myc、CyclinD1mRNA的表达水平明显降低(P<0.05)。结论土木香内酯抑制人胶质瘤U251细胞的增殖并促进其凋亡,其作用机制可能是通过调节PDK1/Akt/GSK3β信号通路有关,且在一定范围内呈浓度依赖性。 展开更多
关键词 胶质瘤 U251细胞 细胞增殖 细胞凋亡 土木香内酯 pdk1/akt/GSK3β通路 C-MYC Cyclin D1
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PDK1-Akt信号通路干预对心肌细胞HCN4离子通道的影响 被引量:2
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作者 韩钟霖 吴翔 +4 位作者 刘雪华 陈诤 白剑 陈鑫 徐伟 《中华心血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期954-961,共8页
目的探讨3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1-蛋白激酶B(PDK1-Akt)信号通路干预对心肌细胞超极化激活环核苷酸门控离子通道4(HCN4)转录、表达及功能的影响。方法使用酶解法从健康雄性野生型C57小鼠和心脏特异性敲除PDK1小鼠获得心房肌细胞,分别... 目的探讨3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1-蛋白激酶B(PDK1-Akt)信号通路干预对心肌细胞超极化激活环核苷酸门控离子通道4(HCN4)转录、表达及功能的影响。方法使用酶解法从健康雄性野生型C57小鼠和心脏特异性敲除PDK1小鼠获得心房肌细胞,分别为空白对照组和PDK1-KO组;另外,对急性分离自C57小鼠的心房肌细胞进行培养,将其分为药物对照组[予二甲基亚砜(DMSO)干预)]、PDK1敲低组[予1μg/ml PDK1的短发夹状RNA(shRNA)干扰质粒干预]、SC79组[予Akt激动剂SC79(8μmol/ml)干预]、GSK2334470组[予PDK1抑制剂GSK2334479(10 nmol/ml)干预]和PDK1敲低+SC79组(予8μmol/ml SC79和1μg/ml PDK1的shRNA干扰质粒干预)。为进一步减少药物脱靶的可能,故运用PDK1的shRNA质粒转染培养的心肌细胞,并在此基础上加用SC79干预。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测相应组心房肌细胞PDK1及HCN4的mRNA表达水平,Western blot检测PDK1、Akt及HCN4蛋白表达水平,全细胞膜片钳检测HCN的电流密度,免疫荧光技术检测HCN4蛋白表达情况。结果(1)PDK1-KO组的HCN4的mRNA(1.46±0.03比0.99±0.01,P<0.001)及蛋白(1.14±0.02比1.00±0.06,P=0.017)表达水平高于空白对照组。全细胞膜片钳结果显示,PDK1-KO组的HCN电流密度大于空白对照组[(-17.47±2.00)pA/pF比(-12.15±2.25)pA/pF,P=0.038]。(2)通过比较PDK1敲低组、SC79组和药物对照组细胞,对PDK1 shRNA及Akt特异性激动剂SC79进行功能验证,结果显示PDK1敲低组细胞的PDK1 mRNA及蛋白表达水平低于药物对照组,SC79组细胞的磷酸化-Akt(Thr 308)蛋白表达水平高于药物对照组。(3)GSK2334470组细胞的HCN4 mRNA(3.61±0.46比1.00±0.08,P<0.001)及蛋白(2.33±0.11比1.00±0.05,P<0.001)表达水平高于药物对照组。(4)PDK1敲低组细胞的HCN4 mRNA表达水平高于药物对照组(1.76±0.11比1.00±0.06,P<0.001)及PDK1敲低+SC79组(1.76±0.11比1.33±0.07,P=0.003),PDK1敲低+SC79组的HCN4 mRNA表达水平亦高于药物对照组(1.33±0.07比1.00±0.06,P<0.001)。PDK1敲低组细胞的HCN4蛋白表达水平高于药物对照组(1.15±0.04比1.00±0.05,P=0.003),PDK1敲低+SC79组的HCN4蛋白表达水平与药物对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),但低于PDK1敲低组(0.95±0.01比1.15±0.04,P<0.001)。全细胞膜片钳实验结果示,药物对照组细胞的HCN电流密度为(-13.27±1.28)pA/pF,PDK1敲低组细胞为(-18.76±2.03)pA/pF,PDK1敲低+SC79组细胞为(-13.50±2.58)pA/pF;PDK1敲低组细胞的HCN电流密度大于药物对照组(P<0.001),而PDK1敲低+SC79组与药物对照组比较差异无统计学差异(P>0.05)。(5)免疫荧光检测结果显示PDK1敲低组的绿色荧光较药物对照组增强,提示定位于细胞膜的HCN4表达量增加。而PDK1敲低+SC79组的绿色荧光较PDK1敲低组减弱,提示当敲低PDK1后再进一步激动Akt,定位于细胞膜HCN4表达量下降。结论PDK1-Akt信号通路参与心肌细胞HCN4离子通道转录、表达水平及功能的调控。 展开更多
关键词 肌细胞 心脏 HCN4 pdk1 akt
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PDK1 plays a critical role in regulating cardiac function in mice and human 被引量:7
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作者 DI Ruo-min FENG Qiu-ting +5 位作者 CHANG Zai LUAN Qing ZHANG Yang-yang HUANG Jun LI Xin-li YANG Zhong-zhou 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2010年第17期2358-2363,共6页
Background PDK1 is an essential protein kinase that plays a critical role in mammalian development. Mouse lacking PDK1 leads to multiple abnormalities and embryonic lethality at E9.5. To elucidate the role of PDK1 in ... Background PDK1 is an essential protein kinase that plays a critical role in mammalian development. Mouse lacking PDK1 leads to multiple abnormalities and embryonic lethality at E9.5. To elucidate the role of PDK1 in the heart, we investigated the cardiac phenotype of mice that lack PDK1 in the heart in different growth periods and the alteration of PDK1 signaling in human failing heart.Methods We employed Cre/loxP system to generate PDK1flox/flox: α-MHC-Cre mice, which specifically deleted PDK1 in cardiac muscle at birth, and tamoxifen-inducible heart-specific PDK1 knockout mice (PDK1flox/flox:MerCreMer mice), in which PDK1 was deleted in myocardium in response to the treatment with tamoxifen. Transmural myocardial tissues from human failing hearts and normal hearts were sampled from the left ventricular apex to analyze the activity of PDK1/Akt signaling pathways by Western blotting.Results PDK1flox/flox: α-MHC-Cre mice died of heart failure at 5 and 10 weeks old. PDK1flox/flox-MerCreMer mice died of heart failure from 5 to 21 weeks after the initiation of tamoxifen treatment at 8 weeks old. We found that expression levels of PDK1 in human failing heart tissues were significantly decreased compared with control hearts.Conclusion Our results suggest that PDK1 signaling network takes part in regulating cardiac viability and function in mice, and may be also involved in human heart failure disease. 展开更多
关键词 pdk1 akt heart failure
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