PDK1抑制剂GSK2334470的抗真菌活性研究

侵袭性真菌感染严重威胁人类生命健康.白念珠菌是临床侵袭性真菌感染中较为常见的菌种之一.耐药性的产生和生物被膜的形成是其临床治疗失败的主要原因.因此,亟需开发抗耐药菌和生物被膜的新型药物.课题组通过药敏筛选实验发现化合物GSK2334470(J1)单用时对耐药白念珠菌表现一定的抑制活性(MIC值范围为32~>128μg/mL),且在较高浓度时(64~256μg/mL)能明显抑制生物被膜的形成及损伤成熟生物被膜.进一步,通过棋盘式微量液基稀释法、生长实验、存活实验、纸片扩散实验、生物被膜实验等证实J1与氟康唑合用后对耐药白念珠菌和热带念珠菌均表现较好的协同抗菌作用,它们能协同抑制耐药白念珠菌的生长以及生物被膜的形成.初步的机制研究发现J1能增加耐药白念珠菌的细胞壁厚度,并且还能抑制其药物的外排.因此,进一步对化合物J1深入研究,有望发现新型抗耐药真菌先导化合物或候选药物.

PDK1抑制剂对烟熏诱导的慢性阻塞性肺疾病小鼠模型体内PGE2表达的干预作用

目的探讨3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶-1(3-phosphoinositede dependent protein kinase-1,PDK1)抑制剂对烟熏诱导的慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)模型小鼠体内前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)的干预作用。方法将50只C57BL/6雄性小鼠随机分为正常对照组、熏烟组、熏烟+低剂量PDK1抑制剂组、熏烟+中剂量PDK1抑制剂组、熏烟+高剂量PDK1抑制剂组,每组10只。PDK1抑制剂选择OSU-03012。正常对照组小鼠每日雾化吸入磷酸盐缓冲液2次,持续12周;熏烟组小鼠熏烟每日2次,持续12周;其余三组小鼠每日熏烟方法与时间同熏烟组,但在熏烟前分别腹腔注射低剂量PDK1抑制剂(0.25 mg/kg)、中剂量PDK1抑制剂(0.5 mg/kg)和高剂量PDK1抑制剂(1.0 mg/kg)。熏烟结束后,测试肺功能,小鼠支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)行细胞计数,用酶联免疫吸附试验测定小鼠血清与BALF中的PGE2,小鼠肺组织进行苏木素–伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色,显微镜下观察病理改变。结果各熏烟组小鼠肺功能指标FEV100/FVC和FEV200/FVC与正常对照组相比均有明显下降(P<0.05);熏烟组小鼠BALF中细胞数增加,与正常对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。熏烟+低剂量PDK1抑制剂组的BALF细胞总数、中性粒细胞和巨噬细胞比例与熏烟组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。而熏烟+中剂量PDK1抑制剂组和熏烟+高剂量PDK1抑制剂组BALF细胞总数和中性粒细胞比例逐渐降低,而巨噬细胞比例逐渐升高,与熏烟组相比,差异有统计学意义(P<0.05);与正常对照组相比,熏烟组和熏烟+PDK1抑制剂组中小鼠的血清及BALF的PGE2浓度均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与熏烟组相比,熏烟+中剂量与高剂量的PDK1抑制剂组小鼠的血清及BALF的PGE2浓度均有所下降,差异有统计学意义(P<0.05)。肺组织HE染色可见,熏烟组呈现炎症细胞浸润、肺泡腔扩张、肺大泡形成等病理改变,均符合慢阻肺的病理改变,而熏烟+中剂量PDK1抑制剂组与熏烟+高剂量PDK1抑制剂组均可见炎性细胞浸润减少,肺泡壁变薄和肺泡扩张等情况好转,其中熏烟+高剂量PDK1抑制剂组改善情况更加明显。结论烟熏慢阻肺小鼠模型肺功能下降,气道炎症明显,同时PGE2分泌也增多,而使用PDK1抑制剂能够降低PGE2的分泌,同时减轻气道炎症及病理改变,改善肺功能,且呈现剂量相关性。