尼古丁对PDLFs细胞乙酰胆碱受体(nAChR)表达的影响

目的探讨尼古丁诱导的牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament fibroblasts,PDLFs)凋亡的信号转导机制。方法本研究用1μg/ml,10μg/ml和100μg/ml不同浓度的尼古丁干预PDLFs细胞24h后,采用RT-PCR方法检测尼古丁乙酰胆碱受体(nAChR)的表达变化。结果不同浓度的尼古丁试验组(1μg/ml、10μg/ml和100μg/ml)作用于PDLFs细胞24h后,nAChR的mRNA表达水平显著增加,与正常对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05),且随着尼古丁剂量的增加,nAChR的基因表达水平随之增高(r=0.948,F=254.231,P=0.000)。结论尼古丁致PDLFs细胞凋亡可能是通过nAChR起作用的。

富血小板血浆用于牙周组织再生的研究 Ⅰ、PRP的提取及对PDLFs增殖的影响

目的 :建立富血小板血浆 (PRP)提取的方法 ,以探讨作为自身复合生长因子来源的可行性 ,并研究其对牙周膜成纤维细胞 (PDLFs)增殖的影响。方法 :利用二次离心 ( 10 0 0rpm× 15min ;3 0 0 0rpm× 8min)分离全血 ,获得PRP。将PRP设 5个浓度组 ( 5 % ,10 % ,2 0 % ,3 0 % ,5 0 % ) ,与对照组 (不含PRP)比较 ,观察它们对PDLFs增殖的影响。结果 :所获得的血小板浓度均超过全血的 4倍 ,实验组各浓度的PRP均可促进PDLFs增殖 ,实验组间及与对照组相比差异均具有显著性 (p <0 .0 1)。当PRP浓度在 5 %～ 3 0 %时促增殖作用呈剂量依赖性。结论 :二次离心法是一种简单易行的提取PRP的方法。PRP可促进PDLFs的增殖。

静态拉伸应变对人牙周膜成纤维细胞的影响

目的 :研究人牙周膜成纤维细胞 (PDLF)在机械拉伸应变作用下 ,细胞和细胞核投影面积及其细胞骨架的改变情况 ,探讨PDLF的形态、功能和应变之间的关系。方法 :采用自制的细胞体外静态机械加载装置用不同的拉伸应变量加力于细胞上 ,通过激光扫描共聚焦显微镜观察细胞骨架的形态及其改变情况 ,并进行统计分析。结果 :在 8%、12 %、16%力值组 ,细胞和细胞核投影面积随着加力时间和力值的增加而每天递增 ,肌动蛋白纤维也随之逐渐增粗 ,排列更有规律 ;而在 2 0 %力值组 ,其结果则反之。结论

人牙周膜成纤维细胞的细胞培养技术

目的人牙周膜成纤维细胞的细胞培养技术两种方法的比较。方法采用组织块法和酶消化法进行人牙周膜成纤维细胞的原代培养,绘制PDLFs的生长曲线。用Envision免疫组化方法进行细胞来源的鉴定。结论组织块培养方法更适合PDLFs的原代培养。

应用Label-free技术研究人牙囊细胞和牙周膜成纤维细胞的差异蛋白质

目的:应用Label-free蛋白定量技术研究牙囊细胞(h DFCs)和牙周膜成纤维细胞(h PDLFs)差异表达蛋白质,为发现h DFCs向h PDLFs转化过程中的重要蛋白质提供参考。方法:应用Label-free蛋白定量技术,结合ultramate 3000 nano-UPLC软件,对h DFCs和h PDLFs总蛋白提取液进行蛋白定性定量检测。然后分别对蛋白质的鉴定结果行重复性、关联性、蛋白相对含量和差异表达蛋白等进行分析;对总体蛋白质和差异表达蛋白质行生物信息学GO或KEGG分析。结果:h DFCs和h PDLFs蛋白相对含量及总体蛋白GO分析结果相似。定量分析显示,当h DFCs分化形成h PDLFs后,有22个差异表达蛋白质,其中下调蛋白15个(P<0.05,FC>2),上调蛋白7个(P<0.05,FC>2)。结论:h DFCs和h PDLFs蛋白质表达谱相似;22个差异表达蛋白质为研究h DFCs向h PDLFs的转化机制提供了方向。

碱性成纤维细胞生长因子对牙周细胞生物学活性的影响

目的 观察基因重组人碱性成纤维细胞生长因子 (rh bFGF)对人牙龈成纤维细胞 (GF)、人牙周韧带成纤维细胞 (PDLF)及人牙槽骨细胞 (ABC)的增殖、碱性磷酸酶活性、总蛋白含量及对 3种细胞矿化结节形成能力的影响。方法 采用细胞培养、MTT比色测定、碱性磷酸酶测定法、考马斯亮蓝法及茜素红染色法。结果 bFGF能促进 3种细胞的增殖 ,但对PDLF和ABC的ALP活性 ,蛋白含量及矿化结节的形成有抑制作用。结论 bFGF可促进细胞的增殖 ,抑制细胞的分化成熟 ,从而促进牙周再生。

人牙周膜成纤维细胞与牙龈成纤维细胞差异表达一条新基因的克隆

目的 :克隆人牙周膜成纤维细胞 (periodontalligamentfibroblast,PDLF)与牙龈成纤维细胞 (gin givalfibroblast,GF)差异表达的新基因。方法 :采用基于PCR和消减杂交的基因克隆技术构建体外培养的人PDLF与GF差异表达基因的扣除文库 ,采用酶切和反向杂交的方法筛选目的克隆 ,并进行测序和计算机分析。结果 :从构建的人PDLF与GF细胞差异表达基因的扣除文库中筛选到 818bp新基因。结论

幽门螺杆菌空泡毒素对人牙周膜成纤维细胞的增殖和凋亡的影响

目的:观察幽门螺杆菌空泡毒素(HP Vac A)对人牙周膜成纤维细胞(h PDLFs)增殖和凋亡的影响。方法:人牙周膜成纤维细胞株(h PDLFs100),分别与不同浓度的HP Vac A(0.1、0.2、0.3 mg/m L)共培养,CCK-8方法检测细胞的增殖情况;倒置显微镜观察细胞的形态变化;流式细胞仪检测细胞的凋亡情况;透射电镜观察细胞超微结构的改变。结果:随着HP Vac A浓度的增大和培养时间的延长,h PDLFs的增殖明显受到抑制;贴壁的PDLFs数量递减,细胞由长梭形逐渐变为圆形,折光性不断减弱,悬浮细胞和凋亡细胞增多;胞浆内大量空泡形成,细胞染色体聚集于核膜,呈块状、浓集和边缘化,表现出典型的凋亡特征。结论:HP Vac A对PDLFs有明显的细胞毒作用,能抑制细胞增殖,并引起细胞凋亡。

人牙周膜成纤维细胞与牙龈成纤维细胞差异表达基因的批量克隆及其特征分析

目的 :克隆人牙周膜成纤维细胞 (periodontalligamentfibroblast,PDLF)与牙龈成纤维细胞 (gin givalfibroblast,GF)差异表达基因并初步分析其中已知基因的功能特征。方法 :采用基于PCR和消减杂交的基因克隆技术构建人PDLF与GF差异表达基因的扣除文库 ,克隆人PDLF与GF差异表达基因 ,对已知基因的功能特征进行分析。结果 :成功克隆到 14个人PDLF与GF细胞差异表达基因 ,其中 10个为已知基因。已知基因的功能多与细胞分化和细胞外基质的合成、分泌有关。结论

胰岛素样生长因子-Ⅱ对培养人牙周膜成纤维细胞生物学活性的影响

目的 :研究IGF -Ⅱ对培养人牙周膜成纤维细胞 (PDLF)生物学活性的影响。方法 :接种一定量培养至第 5代的人PDLF ,用MTT法和碱性磷酸酶比色法观察IGF -Ⅱ作用下 ,PDLF的增殖和碱性磷酸酶活性的变化。结果 :IGF -Ⅱ在实验浓度范围内 ,对PDLF有较明显的促增殖作用 ,对PDLF的ALP活性具有较强的促进作用。结论 :IGF -Ⅱ对PDLF的生物学活性有一定的影响 。

FN对牙龈和牙周膜成纤维细胞生物学活性的影响

目的 :观察纤维结合蛋白 (FN)对牙龈成纤维细胞 (GF)、牙周膜成纤维细胞 (PDLF)的影响。方法 :采用细胞培养、MTT比色测定、碱性磷酸酶 (ALP)测定法、考马斯亮蓝法和茜素红染色法。结果 :FN能促进两种细胞的增殖 ,对PDLF的碱性磷酸酶活性和蛋白合成也有促进作用 ,但对其矿化结节形成能力无显著影响。结论 :FN能促进牙龈和牙周膜成纤维细胞的增殖及蛋白合成 ,但其促进细胞分化的能力有限 。

富血小板血浆对牙周膜成纤维细胞损伤模型影响的研究

目的:探讨应用富血小板血浆(PRP)对狗牙周膜成纤维细胞(PDLFs)损伤模型的愈合有无影响。方法:采用组织块法培养狗牙周膜成纤维细胞,取第四代细胞接种于12孔板,待细胞融合后制作直径约8 mm的损伤模型。用含1%PRP和10%PRP的培养液继续培养,于损伤后第1、4、7、9、11天分别检测各组细胞数量及细胞覆盖损伤区的情况。结果:1%PRP和10%PRP均可促进损伤PDLFs的移行和增殖。结论:1%PRP和10%PRP均可促进牙周膜成纤维细胞损伤模型的愈合。

富血小板血浆对牙周韧带成纤维细胞在牙骨质表面附着及增殖的影响

目的探讨应用富血小板血浆(PRP)对人牙周韧带成纤维细胞(PDLFs)在健康牙和牙周病患牙牙骨质表面附着和增殖情况的影响。方法采用组织块法培养人牙周膜成纤维细胞,取第四代细胞用于实验。分别制备健康牙和牙周病患牙牙骨质块置于96孔板,附着实验在接种细胞后加入含10%PRP和不含PRP的培养液,4小时后MTT法检测附着细胞数量;增殖实验在接种细胞常规培养24小时,而后加入不含血清的培养液培养48小时,更换为含10%PRP和不含PRP的培养液,24小时后MTT法检测细胞数量;并以扫描电镜观察细胞在牙骨质表面的情况。结果附着实验中10%PRP组附着细胞数量较不含PRP组明显增多;增殖实验中10%PRP组和不含PRP组细胞数量无明显差异。结论10%PRP可促进人PDLFs在健康牙和牙周病患牙牙骨质块上的附着,但对细胞在牙骨质块上的增殖无明显影响。

苯妥英钠对内毒素作用下人牙周膜成纤维细胞增殖和表达TNF-α的影响

目的:观察苯妥英钠(PHT)对内毒素(LPS)作用下人牙周膜成纤维细胞(h PDLFs)增殖和表达肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。方法:原代培养h PDLFs,分别与100 mg/L LPS、不同浓度PHT(5、20 mg/L)以及100 mg/L LPS+不同浓度PHT共同培养24 h后,采用甲基噻唑基四唑(MTT)法观察不同浓度PHT对LPS作用下h PDLFs增殖活性的影响;采用免疫细胞化学SP法检测PHT对LPS作用下h PDLFs内TNF-α的表达情况。结果:100 mg/L的LPS可明显抑制h PDLFs的增殖活性、刺激h PDLFs表达TNF-α(P<0.05);20 mg/L PHT可明显促进h PDLFs的增殖(P<0.05),并可明显抑制h PDLFs表达TNF-α(P<0.05);将20 mg/L PHT与100 mg/L LPS联合作用于h PDLFs时,可明显逆转LPS对h PDLFs增殖(P<0.05),明显拮抗LPS介导h PDLFs表达TNF-α(P<0.05)。结论:20 mg/L PHT对LPS作用下的h PDLFs具有保护作用。

尼古丁对人牙周韧带成纤维细胞增殖和细胞周期的影响

目的:研究尼古丁(n icotine)对人牙周韧带成纤维细胞(periodontal ligam ent fibrob lasts,PDLFs)增殖和细胞周期的影响。方法:用不同浓度尼古丁分别在不同时间作用于PDLFs,用MTT比色法及流式细胞仪(flow cytom e-try,FCM)检测细胞增殖和细胞周期。结果:尼古丁能明显抑制PDLFs增殖,呈剂量依赖性和时间依赖性;FCM结果表明,经尼古丁作用后,PDLFsG0-G1期细胞百分比显著增加(P<0.01),G2-M期细胞、S期细胞百分比显著下降(P<0.01),反映细胞增殖和性的增殖指数PI值(S+G2M)随着浓度的递增而下降。结论:尼古丁可抑制PDLFs增殖并减少细胞DNA合成。

比格犬骨髓基质细胞和牙周韧带成纤维细胞体外再生组织能力的比较

目的通过比较比格犬牙周韧带成纤维细胞(PDLFs)和骨髓基质细胞(BMSCs)体外促进牙周相关组织再生潜能,为牙周组织的再生治疗提供依据。方法通过体外ELISA、免疫细胞化学染色、Von Kossa染色分别比较BMSCs和PDLFs这两种细胞的碱性磷酸酶(ALP)、骨保护素(OPG)和胶原Ⅻ、形成的钙化结节,用实时定量PCR比较这两种细胞的OPG和胶原Ⅻ基因的表达。结果 Realtime PCR检测和免疫细胞化学染色结果均发现PDLFs中胶原Ⅻ表达量高于BMSCs(P<0.05);而ALP活性检测、OPG染色及Von Kossa染色等结果都表明其成骨能力低于BMSCs(P<0.05)。结论 PDLFs体外成骨能力低于BMSCs,但有较高的牙周韧带形成潜力。

Nd:YAG激光照射对人牙周膜成纤维细胞影响的体外研究

目的研究不同输出功率(w)和照射时间(t)设置下Nd:YAG激光照射对体外培养的人牙周膜成纤维细胞存活率的影响,并分析其相关性。方法将原代培养的人牙周膜成纤维细胞以3×103个/ml接种于96孔板,按不同输出功率和照射时间对细胞进行分组、激光照射,台盼兰染色和细胞存活率计算,采用spss15.0软件包,对实验组和对照组的细胞存活率进行成组设计资料的t检验(Independent Samples Ttest),对输出功率、照射时间和细胞成活率分别进行Pearson线性相关分析,对输出功率、照射时间和细胞成活率相关的显著性进行多元线性回归分析。结果 1w、10s组的细胞存活率与对照组无显著性差异(P>0.05),余实验组与对照组的差异均有统计学意义(P<0.05),且当激光的总能量>40J时,细胞存活率显著下降(P<0.001);照射时间为10s、20s和30s时,细胞存活率与输出功率呈负相关,20s时最为显著(r=-0.99);细胞存活率与照射时间负相关较输出功率显著(rt=-0.996,rW=-0.897)。结论 Nd:YAG激光照射可影响牙周膜成纤维细胞的存活,其中照射时间比输出功率对细胞存活率的影响更大。

基于离线状态观测器的LPV系统预测控制

针对多包描述的约束LPV系统,当系统状态不可观测时,给出一种离线状态观测器的设计方法,通过证明由观测器误差构成的自治系统是鲁棒稳定的,保证了观测器输出将最终收敛于系统状态真实值。基于状态观测器,对于系统的观测状态引入参数Lyapunov函数,通过求解无穷时域min-max优化问题给出鲁棒输出反馈预测控制律,并证明了算法的可行性和系统的闭环稳定性。与传统观测器设计方法相比,离线状态观测器设计方法有效的降低了在线计算量,同时采用参数Lyapunov函数的设计算法,在满足系统约束的情况下及稳定性的条件下减少了设计的保守性,并对不确定参数有更好的鲁棒性。仿真结果验证了算法的有效性。

离散LPV重复过程的鲁棒H_∞状态反馈控制

研究离散线性参数变化(LPV)重复过程的鲁棒H∞状态反馈控制器设计问题。通过引入一个附加矩阵解除了系统矩阵与依赖于参数的李雅普诺夫函数之间的耦合,从而提出依赖于参数的解耦的鲁棒H∞性能判据。进一步,根据参数线性矩阵不等式技术导出鲁棒H∞控制器存在的充分条件,通过利用近似基函数和网格技术把相应的控制器设计问题转换成求解一个有限维参数线性矩阵不等式的凸优化问题。

肿瘤坏死因子对培养人牙周膜成纤维细胞c-fos表达的诱导作用

目的：深入探索肿瘤坏死因子对人牙周膜成纤维细胞的生物学功能影响的机制。方法：将５０００Ｕ／ｍｌ肿瘤坏死因子作用于培养至第三代的人牙周膜细胞３ｈ后，进行ＦＯＳ免疫组化反应。结果：几乎所有的ＰＤＬＦｓ核均染为棕黄色，为ＦＯＳ免疫组化反应阳性，对照组细胞核未见着色。结论：由于ｃ－ｆｏｓ的表达可以提示核内基因的进一步改变。