新疆某医院侵袭性念珠菌感染的菌种分布、药物敏感性及耐药基因初步分析

目的了解新疆某医院侵袭性念珠菌感染的菌株分布、药敏特征,探讨菌株对唑类抗真菌药的耐药机制。方法对分离自临床诊断深部真菌病患者的125株菌行形态学和分子生物学鉴定,分析念珠菌菌种分布特点、对9种抗真菌药的体外敏感性以及对唑类药物耐药菌株行ERG11和PDR1基因测序分析。结果鉴定成功的111株酵母菌株中,分离率在前三位的菌种次为白念珠菌(50.45%)、光滑念珠菌(18.02%)和热带念珠菌(15.32%)。药敏结果显示多数菌株对两性霉素B、5-氟胞嘧啶和棘白菌素类药物敏感,2株光滑念珠菌菌株对棘白菌素类药物耐药。白念珠菌对唑类药物体外敏感性较好,泊沙康唑和伏立康唑对光滑念珠菌和热带念珠菌的体外抑菌活性较低(<60%)。33株唑类耐药念珠菌(6株白念珠菌、14株光滑念珠菌、11株热带念珠菌、1株克柔念珠菌和1株近平滑念珠菌)中有9株存在ERG11基因错义突变,所有唑类耐药光滑念珠菌均存在PDR1基因错义突变。结论侵袭性念珠菌感染的主要致病菌为白念珠菌;棘白菌素类、两性霉素B、5-氟胞嘧啶对念珠菌整体的体外抑菌活性较好,唑类药物对光滑念珠菌和热带念珠菌的抑菌活性较低;念珠菌ERG11和PDR1基因突变可能与唑类耐药相关。

Pdr1蛋白N端携带Flag标签的光滑假丝酵母的构建

近年来,光滑假丝酵母已成为第二位引起侵袭性真菌感染的病原体。光滑假丝酵母对唑类药物(临床一线抗真菌药物)的敏感性低且易发生耐药,一直是研究的热点。介导光滑假丝酵母对唑类药物耐药的关键基因是转录因子pdr1,其功能性突变会使Pdr1蛋白功能过度活跃,导致下游唑类药物外排泵基因高表达,从而对唑类药物耐药。本研究利用同源重组技术,构建在基因pdr1的5′端定点插入3×Flag标签的重组菌株2a2和2b2,为后续利用免疫染色质共沉淀技术寻找Pdr1直接调控基因奠定基础。结果表明,3×Flag标签添加到Pdr1蛋白N端可成功表达Flag-Pdr1蛋白;与野生型菌株相比,表达Flag-Pdr1的菌株对氟康唑的耐药性增强。此外,与野生型菌株相比,表达Flag-Pdr1的菌株中cdr1和pup1基因表达水平显著上升,提示在Pdr1蛋白N端加Flag标签能使其功能活跃,表明N端对Pdr1蛋白功能具有重要意义。