真核表达载体pIRES2-EGFP-PDLIM2的构建及在EJ细胞中的表达

背景:核因子κB在肿瘤生成过程中起重要作用,PDLIM2基因可以介导终止核因子κB的活性,解除核因子κB对肿瘤细胞的凋亡抑制作用。目的:克隆人PDLIM2全长基因,构建pIRES2-EGFP-PDLIM2真核表达载体。方法:采用反转录-聚合酶链反应从新鲜膀胱组织总RNA中克隆PDLIM2全长基因,与经BamHI、XhoⅠ相同双酶切的pIRES2-EGFP质粒载体连接,构建重组质粒pIRES2-EGFP-PDLIM2,经酶切及测序鉴定重组质粒中PDLIM2基因的完整性和忠实性。荧光显微镜下观察重组质粒转染的EJ细胞GFP报告基因表达强度,并对转染细胞PDLIM2的表达进行RT-PCR检测。结果与结论:经酶切和测序证实重组质粒构建正确,并在转染的EJ细胞中获得PDLIM2的高效表达。表明用反转录-聚合酶链反应方法成功从膀胱组织中克隆出PDLIM2全长基因,成功构建pIRES2-EGFP-PDLIM2真核表达载体。

PDLIM2对前列腺癌预后影响的生物信息学分析

目的应用生物信息学技术分析PDLIM2对前列腺癌(PCa)预后的影响,并深度挖掘其基因功能。方法利用UCSC Xena数据库下载癌症基因组图谱PCa数据,分析并验证PCa组织与癌旁正常组织中PDLIM2表达差异,比较PDLIM高、低表达组患者总生存期(OS)和无进展生存期(PFS)。利用Linked Omics数据库对PDLIM2共表达基因进行基因本体富集分析,利用相关数据库基因模块分析PDLIM2与肿瘤免疫细胞浸润程度、肿瘤突变负荷(TMB)、微卫星不稳定性(MSI)、免疫检查点(ICP)基因表达及肿瘤干性评分的相关性。结果与癌旁正常组织相比,PCa组织中PDLIM2 mRNA表达水平较低(P<0.05),而PDLIM2启动子区域甲基化水平较高(P<0.05);且PCa组织中PDLIM2 mRNA表达水平与Gleason评分、分子分型均有关(均P<0.05)。生存分析显示,PDLIM2高表达者PFS明显短于PDLIM2低表达者(P<0.05);而PDLIM2高、低表达者OS比较,差异无统计学意义(P>0.05)。PDLIM2 mRNA表达与TSPAN4、LGALS1、GAS6、GYPC、LYL1等12198个基因均呈正相关(均P<0.05),与SMARCC1、HOOK1、ZNF24、DNAJC16、FOXA1等7852个基因均呈负相关(均P<0.05)。与PDLIM2相关的基因主要富集在胶原代谢过程、整合素介导的信号通路、体液免疫反应、白细胞迁移、IFN-γ产生、急性炎症反应、血管生成等生物学过程。PCa组织中PDLIM2 mRNA表达水平与肿瘤免疫细胞浸润程度、TMB、MSI、38个ICP基因表达及肿瘤干性评分均呈正相关(均P<0.05)。结论PDLIM2可能成为评估PCa预后的生物学标志物和肿瘤免疫治疗的新靶点。

Pdlim2在高脂血症大鼠肾小球足细胞中的表达改变及意义

目的探讨Pdlim2在高脂血症大鼠肾小球足细胞中的表达改变及意义。方法45只雄性sD大鼠按随机数字表法分为3组：正常对照组（n=15）给予普通饲料喂养；高脂饮食组（n=15）给予高脂饲料喂养；辛伐他汀组（n=15）在高脂饲料喂养的基础上给予辛伐他汀10mg·kg-1·d-1水溶液灌胃，分别于实验第4、6、10周时随机取5只大鼠，检测大鼠24h尿蛋白量及血清胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平，电镜观察大鼠肾小球足细胞的损害，免疫荧光染色及Western印迹法检测大鼠肾脏Pdlim2蛋白的表达及分布。结果于实验第4周开始，同一时间点高脂饮食组和辛伐他汀组血清胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平较正常对照组高（P〈0．05），而辛伐他汀组则较高脂饮食组低（P〈0．05）；至实验第10周时高脂饮食组和辛伐他汀组24h尿蛋白量均高于正常对照组，而辛伐他汀组24h尿蛋白量低于同期高脂饮食组，差异有统计学意义（Pc0．05）；电镜下观察发现，高脂饮食组4周时已有足细胞足突融合，且随时间延长而损伤加重，实验第10周时辛伐他汀组足突损伤程度明显轻于高脂饮食组；免疫荧光染色检查发现，Pdlim2蛋白阳性染色主要分布在肾小球内，且实验第10周时高脂饮食组和辛伐他汀组肾小球内Pdlim2蛋白表达低于正常对照组，而辛伐他汀组其表达又高于高脂饮食组；Western印迹检查显示，实验第4周开始，Pdlim2蛋白表达在高脂饮食组低于正常对照组（P〈0．05），10周时在高脂饮食组和辛伐他汀组均显著低于正常对照组（P〈0．05），而辛伐他汀组又高于高脂饮食组（P〈0．05）。结论高脂血症可在实验大鼠蛋白尿发生前导致足细胞损伤，其机制可能与肾小球的细胞骨架调节蛋白Pdlim2表达减少相关，而辛伐他汀可能通过保护肾小球Pdlim2的表达，减轻高脂导致的足细胞足突融合。

PDLIM2基因在膀胱癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨PDLIM2 mRNA在膀胱尿路上皮癌组织与正常膀胱组织中的表达及其临床意义,研究PDLIM2基因在预测膀胱癌术后复发、进展以及预后判断中的价值.方法 应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）技术检测80例膀胱尿路上皮癌组织、10例膀胱黏膜正常组织中PDLIM2 mRNA的表达,并结合临床病理特征进行分析.结果 膀胱癌组织中PDLIM2 mRNA表达量明显低于正常膀胱组织（P＜0.05）,仅是正常组织中表达量的49.8％,其表达水平与膀胱癌的分化程度、病理分期、肿瘤数目、大小相关,随肿瘤分级、分期、数目、直径的增加而减少（P＜0.05）,与性别、年龄无相关（P＞0.05）.单因素分析表明肿瘤分级、分期、数目及PDLIM2 mRNA表达量是膀胱癌患者术后复发或进展的预后因素.Logistic回归分析表明PDLIM2 mRNA表达是评估膀胱癌患者无病生存预后的独立预测因子[相对危险度（RR）=0.982,95％可信区间（CI）=0.967 ～0.997,P＜0.05],PDLIM2表达低的膀胱癌患者较PDLIM2高表达的患者更容易出现复发或进展.多因素分析发现膀胱肿瘤的分级、数目与PDLIM2 mRNA表达明显相关（P＜0.05）.结论 PDLIM2 mRNA的表达与膀胱癌的发生、发展密切相关,可能是预测膀胱癌术后复发或进展的潜在肿瘤标志物.

PDLIM2的PDZ结构域晶体结构及其与2-吗啉乙磺酸的相互作用研究

在之前的研究中曾发现PDLIM2蛋白能够通过其N端的PDZ结构域,与H5N1亚型流感病毒NS1蛋白的ESEV序列相互作用.解析了分辨率0.173 nm的PDLIM2的PDZ结构域晶体结构,发现2-吗啉乙磺酸(MES)分子能够与该PDZ结构域结合,并且占据PDZ结构域中与流感病毒NS1的ESEV序列相互作用的位点.进一步利用体外GST-pulldown实验证明,MES对于NS1与PDLIM2之间的相互作用具有一定的抑制效果.这一发现可能为开发与抗流感病毒相关的药物提供线索.