PEA15与KCNJ10基因两个单核苷酸位点在2型糖尿病家系成员中的多态性研究

我国中部地区55个T2DM家系的265名成员,检测其PEA15基因(位点rs8175359)和KCNJ10基因(位点rs2486253)的单核苷酸多态性。受检位点的基因型和等位基因频率分布,在T2DM组和家系成员组之间不存在显著差异,提示该多态性不与T2DM相关。

miRNA-4497靶向PEA15对视网膜母细胞瘤细胞增殖及药物敏感性研究

目的探讨miRNA-4497通过靶向PEA15对视网膜母细胞瘤(Rb)Y79细胞株增殖及对奥沙利铂药物敏感性的影响。方法收集2017年1月—2019年12月病理确诊的Rb患者27例,取其肿瘤组织及瘤旁组织,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miRNA-4497表达。使用慢病毒感染的方法构建过表达组及阴性对照组Y79细胞。RT-qPCR检测感染效果。CCK8法检测2组细胞的增殖能力及对奥沙利铂的药物敏感性。荧光素酶报告基因验证miRNA-4497的潜在靶点。RT-qPCR和Western blot检测2组细胞中靶基因的表达水平。结果(1)miRNA-4497表达:在Rb组织中表达升高,差异有统计学意义(t=14.590,P=0.000)。miRNA-4497在过表达组细胞中的表达水平显著高于阴性对照组(t=16.150,P=0.000)。(2)对Y79细胞增殖的影响:相对于阴性对照组,miRNA-4497过表达组细胞增殖速度从第3 d开始明显增高,2组细胞增殖速度的差异具有统计学意义(t_(3 d)=6.500,t_(4 d)=7.691,均P=0.000)。(3)药物敏感性:奥沙利铂浓度为0.125μM时,2组细胞生长抑制率的差异无统计学意义(P>0.05),在浓度为0.25、0.5、1、2μM时,过表达组细胞的生长抑制率比对照组低,且差异具有统计学意义(t_(0.25μM)=4.277,t_(0.5μM)=7.547,t_(1μM)=8.302,t_(2μM)=8.302;均P=0.000)。(4)荧光素酶活性检测:双荧光素酶报告基因显示miRNA-4497能够与PEA15靶向结合,与阴性对照组比较有统计学意义(t=5.514,P=0.000)。(5)PEA15的蛋白及mRNA表达:与阴性对照组相比,miRNA-4497过表达组细胞中PEA15 mRNA表达水平显著降低(t=77.856,P=0.000),PEA15蛋白水平明显降低。结论miRNA-4497可通过靶向PEA15促进人Rb细胞株Y79的增殖水平,降低对奥沙利铂的药物敏感性。

结直肠癌组织PEA15、MSI-2的表达与肝转移及预后的关系

目的分析星形胶质细胞磷酸化蛋白15(PEA15)、MSI-2在结直肠癌组织中的表达及其与结直肠癌肝转移及预后的关系。方法选取2015年1月—2017年12月江苏省泰州市人民医院/南通大学第五附属医院消化内科收治结直肠癌患者180例,应用免疫组织化学染色法检测并比较结直肠癌组织及其癌旁组织中PEA15、MSI-2表达差异。比较结肠癌组织中PEA15、MSI-2在不同临床病理特征中的表达差异。对患者随访3年,分析不同PEA15、MSI-2表达与患者预后的关系。结果结直肠癌组织PEA15、MSI-2阳性表达率显著高于癌旁组织(χ^(2)/P=96.288/0.000、118.063/0.000)。中低分化、原发癌灶浸润深度T3~T4、淋巴结转移患者结直肠癌组织中PEA15、MSI-2阳性表达率显著高于高分化、原发癌灶浸润深度T1~T2、无淋巴结转移患者(PEA15:χ^(2)/P=39.470/0.000、6.668/0.010、19.256/0.000;MSI-2:χ^(2)/P=33.846/0.000、8.638/0.003、27.262/0.000)。肝转移患者PEA15、MSI-2阳性表达率显著高于无肝转移患者(χ^(2)/P=18.299/0.000、16.166/0.000)。结直肠癌患者癌组织中PEA15表达与MSI-2表达呈正相关(r/P=0.575/0.000)。结直肠癌组织PEA15阴性、MSI-2阴性患者生存曲线显著优于PEA15阳性、MSI-2阳性患者(χ^(2)/P=26.436/0.000、22.896/0.000)。结论PEA15、MSI-2高表达与结直肠癌发生发展及肝转移有密切关系,且两者表达呈正相关,PEA15、MSI-2阳性表达患者总体预后较PEA15、MSI-2阴性表达患者差。

2型糖尿病家系人群两种基因多态性分布

目的检测中国常州汉族2型糖尿病家系人群中PEA 15基因与KCNJ 10基因中2个单核苷酸位点多态性分布情况,探讨该遗传标记与2型糖尿病的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性酶切片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对该地区55个2型糖尿病高发家系265名成员的PEA 15基因(rs8175359)及KCNJ 10基因(rs2486253)2个单核苷酸多态性位点(SNPs)进行分析。结果在2型糖尿家系人群中,rs8175359位点基因型频率为:病例组中GG、GA分别为98.6%,1.4%;在未患病亲属组中为GG 99.2%,GA 0.8%,未发现AA纯合子。rs2486253位点基因型频率为:病例组中GG、GT分别为92.9%,7.1%;在未患病亲属组中为GG 91.1%,GT 8.9%。2组间基因型频率、等位基因频率的差异均无统计学意义。按性别等因素分层分析显示,rs2486253位点基因型频率构成比差异均无统计学意义。结论该两位点是否可作为2型糖尿的相关遗传标记需进一步在大样本人群研究中重复验证。

黄芩苷抑制人结肠黏膜上皮细胞的凋亡机制

[目的]探讨黄芩苷抑制人结肠黏膜上皮细胞凋亡的机制。[方法]黄芩苷处理人结肠黏膜上皮细胞,检测其凋亡水平与miRNA水平的变化。敲低筛选出的miRNA后,检测其凋亡水平与潜在靶标mRNA水平的变化。荧光素酶报告系统检测miRNA与潜在靶标的结合。[结果]黄芩苷处理人结肠黏膜上皮细胞后,人结肠黏膜上皮细胞的凋亡水平显著下降(0.35±0.11 vs 0.06±0.02,P<0.05)。黄芩苷处理人结肠黏膜上皮细胞后,miR-642a-3p、miR-484的表达水平显著下降(2.35±0.75 vs 0.51±0.18,1.94±0.63 vs 0.60±0.20,P<0.05)。敲低miR-484后,人结肠黏膜上皮细胞的凋亡水平显著降低(0.35±0.11 vs 0.07±0.02,P<0.05),PEA15和UAP1L1的水平显著升高(1.23±0.41 vs 2.45±0.64,0.65±0.23 vs 1.95±0.61,P<0.05)。敲低PEA15后,人结肠黏膜上皮细胞的凋亡水平显著升高(0.35±0.11 vs 0.67±0.020,P<0.05)。过表达PEA15后,人结肠黏膜上皮细胞的凋亡水平显著下降(0.35±0.10 vs 0.06±0.01,P<0.05)。miR-484靶向PEA15的3'端非编码区。[结论]黄芩苷处理人结肠黏膜上皮细胞后降低miR-484的表达、提高PEA15的表达,最终抑制了人结肠黏膜上皮细胞凋亡。