PEG介导细胞融合的最适条件探究

采用PEG介导血细胞融合的方法,用PEG浓度与反应时间两种梯度变量,从细胞融合率的变化来比较融合的反应条件.结果表明,细胞融合率随PEG浓度降低而升高,随反应时间加长而增高,但后者的影响较小;选用25%PEG浓度与反应时间为40 min,能够达到较高的细胞融合率.

PEG诱导鸡红细胞融合影响因素探讨

细胞融合技术是近年来迅速发展起来的一项新兴细胞工程技术,本研究以鸡红细胞为材料,以PEG(Mw=4000)为诱导剂,研究不同的PEG体积分数(0%、25%、50%、75%、100%),不同的融合时间(5 min1、0 min、15 min2、0 min2、5 min),不同的融合温度(20℃、30℃、35℃、38℃、40℃)对鸡红细胞融合率的影响.结果显示:PEG的体积分数为50%,融合时间为15 min,温度为38℃时融合的效果最好.

PEG诱导鸡血细胞融合实验方法比较

细胞融合技术是细胞生物学的一项核心技术,在科学研究、医药开发、农业育种等方面有着广泛应用。PEG法诱导鸡血细胞融合实验也被作为细胞生物学本科实验的一项重要内容,但在实验课程中的融合效果不佳。笔者查阅相关细胞生物学实验指导教材和文献,发现存在两种截然不同的PEG法诱导鸡血细胞融合操作方法。因此,本文对两种方法进行了比较,并进一步讨论了影响PEG法诱导鸡血细胞融合效率的重要因素和改进方法。

提高PEG诱导鸡血细胞融合率的方法研究

细胞融合是细胞工程的一项核心技术,聚乙二醇(PEG)介导的细胞融合法是最经济、简单的细胞融合技术。但在本科生实验教学过程中,实验效果并不理想。为了获得高效稳定的细胞融合率,试验通过改变细胞悬液制备方法和pH对细胞融合率的影响进行研究,结果表明利用肝素钠抗凝的血细胞保存168 h,pH为8时细胞融合率最高,可达30.88。

优化PEG诱导鸡血细胞融合条件的研究

为了解决聚乙二醇(PEG)诱导细胞融合效果较低的问题,试验以鸡血细胞为材料,通过优化PEG诱导鸡血细胞融合的条件来提高细胞融合率,即在融合温度为38℃和融合时间为10 min的条件下,采用双因素设计研究PEG相对分子质量(2 000,4 000,6 000)和浓度(25%、50%、65%、80%)及其互作对血细胞融合率的影响;确定最佳PEG相对分子质量和浓度后,采用相同试验设计研究融合温度(35℃、38℃、41℃)和时间(5,10,20 min)对血细胞融合率的影响。结果表明:PEG相对分子质量(F=5.36,P=0.009 2)和浓度(F=28.46,P<0.000 1)对血细胞融合率均有显著影响,且相对分子质量为4 000、浓度为50%时血细胞融合率最高;PEG相对分子质量与浓度的互作对血细胞融合率的影响不显著(F=2.42,P=0.054 7)。融合温度对血细胞融合率有显著影响(F=6.56,P=0.004 8),38℃时血细胞细胞融合率最高;但融合时间(F=0.34,P=0.720 0)及其与温度的互作(F=0.58,P=0.680 0)对血细胞融合率均无显著影响。说明PEG分子质量、浓度和融合温度是影响鸡血细胞融合率的关键因素。

人参与胡萝卜原生质体PEG融合和电融合研究的比较

由于人参与胡萝卜的双亲的核基因和胞质基因都可能参与融合事件,发生核基因和胞质基因重组,产生大量多样化的遗传变异个体,以期获得新的种质资源。以人参和胡萝卜原生质体为实验材料,筛选出适宜人参胡萝卜悬浮细胞原生质体PEG融合的PEG质量分数为50%,CaCl2.2H2O浓度为2mmol/L,PH值为10。适合人参与胡萝卜叶肉原生质体融合的电融合参数为AC强度40/cm、AC作用时间为40s,DC强度为1000V、作用时间50μs,脉冲4次,循环2次。

新型双功能融合蛋白GAD的PEG-马来酰亚胺修饰及其性质研究

为了解决新型双功能融合蛋白GAD复性困难、具有免疫原性等问题,采用PEG-马来酰亚胺修饰变性后的GAD包涵体。通过圆二色谱、色氨酸荧光分析等方法对比修饰前后GAD构象变化,并采用OGTT、脂清除实验验证其生物学活性。研究结果表明,PEG-马来酰亚胺能够完成变性条件下GAD的定点修饰,提高其复性效率,且修饰产物二、三级结构与修饰前一致;PEG-GAD的免疫原性降低(P<0.01),具有显著的降糖降脂作用(P<0.001),且体内药效时间延长。此方法可为强疏水性多肽类药物的开发提供有效策略。

细胞杂交的电融合法与PEG融合法的比较研究

采用细胞电融合仪和自制的融合小室，从细胞融合率、细胞存活情况以及直接观察等，比较了细胞杂交技术中的电融合法和PEG促融合剂的化学方法。结果表明，电融合法比PEG促融合法有明显的优点：细胞融合率高（65．54％±7．93），有利于杂交瘤的选择；电脉冲击穿对细胞的损伤小，有利于融合细胞的生长繁殖；可直接观察融合过程，便于有目的地控制选择融合条件。此外，还观察到杂交瘤克隆出现较早，分泌抗体功能较强等。这些优点表明，电融合法可以提高克隆形成率，有利于杂交瘤的选择，在单克隆抗体的制备和研究上有良好的应用价值。

Primary Study on Experiment of Tetraploid Induction in Haliotis discus hannai with PEG

The experiment was performed on induction tetraploid of Haliotis discus hannai at two-cell stage through cell fusion with PEG treatment. In this paper, the orthogonal experiment of three factors and three levels [L9 （3^4）] was used. Three factors and three levels were molecular weight of PEG： 8 000, 6 000, 4 000 mol ·g^-1; PEG concentration： 45%, 50%, 55%; treatment duration time： 1, 2, 3 min, respectively. The results showed that the optimal pattern of three factors and three levels on inducing tetraploid of Haliotis discus hannai at two-cell stage through using PEG treatment were： molecular weight 4 000, concentration 55%, treatment duration time： 2 min. The highest tetraploid induction rate was 10.8% at embryo period. The three factors treatment sequence was treatment duration time→concentration→molecular weight.

蟾蜍红细胞融合条件的正交设计优化

目的:用聚乙二醇法探讨蟾蜍红细胞融合的最佳条件。方法:采用3因素3水平的正交实验法,以蟾蜍红细胞为材料,从聚乙二醇浓度、反应时间、反应温度三方面计算细胞融合率,探讨和比较蟾蜍红细胞融合的最适条件及影响因素。结果:蟾蜍红细胞融合的最佳条件是:选用50%的聚乙二醇,反应温度为37℃,反应时间为15min。

双亲灭活原生质体融合技术在草菇耐低温菌株选育上的应用

为了选育耐低温草菇菌株,以草菇V23、V3552为亲本,采用酶解法制备原生质体,用紫外诱变、化学诱变两种方法对草菇菌株进行诱变,筛选到耐低温的突变株;然后利用紫外灭活(20 W,30 cm,110 s)和热灭活(50℃3 min)的双亲灭活标记法对突变株进行化学融合,结果表明在400 g/L的PEG6000、pH 8.0、融合时间30 min和融合温度32℃的条件下融合率最高,达到0.517%,共获得200个融合子。经过0℃低温筛选,最终获得15株草菇耐低温菌株,菌丝在0℃的耐冻能力提高了4.5倍。经出菇实验证明其子实体与出发菌株相比具有明显的耐低温性,液化现象明显推迟,说明该方法筛选出的菌株具有进一步应用开发的价值。

水飞蓟素(益肝灵)片剂溶出速度的研究——水飞蓟素及其固体分散物片剂溶出考察

实验考察了国产6个厂家益肝灵片剂及德国MADAUS药厂利肝隆片剂的溶出速度,结果表明30min益肝灵溶出均低于30％,利肝隆为50％;120min最大溶出益肝灵不超过43％,利肝隆约55％。表明水飞蓟素片溶出缓慢及生物利用度较差。分别制备水飞蓟素PEG熔融物,PVP共沉淀物及β-CD包合物,溶解度分别提高37、60及27倍,其相应片剂溶出速度T_(50)为14、11及20min,120min最大溶出达80～103％左右。通过uv、IR及TLC鉴定固体分散物中水飞蓟素结构未发生改变,偏光显微照相表明水飞蓟素结晶度下降,分散度增加。

黑色素瘤与活化B淋巴细胞融合株的建立及体内外的生长特性

以５０％ＰＥＧ为融合剂，将Ｃ５７ＢＬ／６来源的Ｂ１６黑色素瘤与ＬＰＳ活化的Ｃ５７ＢＬ／６小鼠Ｂ淋巴细胞进行融合。融合细胞经ＨＡＴ选择性培养基的筛选，用有限稀释法克隆到一表达Ｈ－２Ｋｂ和Ｂ７的融合瘤株。与Ｂ１６相比，该融合瘤株在体外生长缓慢，接种Ｃ５７ＢＬ／６小鼠发现其体内的致瘤性也有下降。实验结果提示：与活化的Ｂ淋巴细胞融合可以改变瘤细胞的免疫生物学特性。

融合条件对小鼠体细胞核移植融合率的影响

目的提高小鼠体细胞核移植过程中融合效率。方法使用CRY-3型和CE-450型细胞融合仪对B6D2F1小鼠去核卵母细胞与该品系小鼠胎儿成纤维细胞构成的重构胚进行融合，通过PEG／DMSO对供核细胞的预处理，比较了不同融合液，不同电极形状融合槽和供核细胞代次对融合率的影响。结果（1）以PEG／DMSO对供核细胞预处理5min的融合率显著高于同条件下未处理组（51．11％vs25．64％）（P〈0．05）；（2）融合液中含0．1g／L聚乙烯醇（PVA）组的融合率高于无PVA组；重构胚在甘露醇浓度为0．32mol／L融合液中的融合率（48．21％）高于其他甘露醇浓度组（27．78％，41．67％和30．11％）；（3）使用针状电极融合槽时的融合率（42．31％，43．13％）高于同条件下平行丝状电极融合槽组（30．43％，33．33％），其中又以在2000V／cm，20μs，2个脉冲时，交流电预处理30S组最高（43．13％）；（4）供核细胞传代一次后融合率随着传代次数的增加而下降。结论通过PEG／DMSO对供核细胞进行预处理，并在融合液中添加PVA时，结合优化的融合条件可以提高小鼠体细胞核移植过程中融合率。

聚乙二醇诱导细胞融合影响因素探究

以鸡红血细胞为材料，聚乙二醇（Mr=4000）为诱导剂，研究不同的细胞密度、聚乙二醇体积分数、Ca^2＋浓度等因素对细胞融合率的影响，结果显示：细胞密度为（3．0～4．0）×10^4／mL，聚乙二醇的体积分数为50％，Ca^2＋浓度为50mmol／mL时融合效果最好，融合率高达29．76％．

聚乙二醇法诱导烟草原生质体融合的条件优化

采用聚乙二醇(PEG)法诱导烟草原生质体融合,对融合时PEG的浓度、用量、融合时间及融合温度进行优化,以期得到一种融合率较高的方法。结果表明:以40%的PEG融合的二元融合率最高;PEG与原生质体悬浮液体积比为3∶5,在0.5～0.6 mol/L甘露醇为渗透压时,25～30℃下融合20～25 min的融合效果最佳,融合率始终保持在20%左右,甚至可达25%。

纤维素直接发酵乙醇微生物的选育──Ⅲ.里氏木霉与运动发酵单胞原生质体融合的研究

用聚乙二醇（PEG）作为诱导剂，可使钝化的里氏木霉（Tri－chodermareesei）QM9414的原生质体和运动发酵单胞（Zymomonasmobilis）ATCC29191的原生质球之间可以产生远缘的细胞融合子。融合率可达1．9×10－2融合子能利用羧甲基纤维素为唯一碳源而产生羧甲基纤维素酶和乙醇。羧甲基纤维素酶活性高和乙醇产量高的融合子不稳定。这些融合子的产酶能力很容易大部分丧失，而产乙醇的能力亦很低。而酶活及乙醇产量较低的融合子，可能才是真正的基因重组子。

细胞融合技术及其进展

自1958年Okada首次表明紫外灭活的仙台病毒可以诱导体外培养细胞融合形成多核体以来,细胞融合技术得到了迅速发展和应用。以聚乙二醇(PEG)为代表的化学融合方法在生物、遗传、医药学等研究领域取得了可喜的成绩。自1978年报道电脉冲诱导细胞融合成功以来,Zimmermann及其同事将细胞电介质电泳引入诱导细胞间接触,创立了物理的实用的Zimmermann电融合法。现在,电融合法已由非特异性的细胞电融合发展为特异性电融合法。激光诱导细胞融合技术成为目前的研究热点,但此项技术尚处于发展初期,有待于进一步完善。本文综述了PEG化学融合法,电融合领域的新进展和激光诱导细胞融合技术。

聚乙二醇诱导鸡红细胞融合条件的优化

目的:探讨聚乙二醇诱导鸡红细胞融合最适条件。方法:以鸡红细胞为材料,聚乙二醇为诱导剂,从细胞密度、融合温度、聚乙二醇浓度及反应时间进行单因素实验,并设计3因素3水平的正交实验计算细胞融合率。结果:鸡红细胞融合的最佳条件是:细胞密度为2×106个/ml,聚乙二醇浓度为35%,反应温度为35℃,反应时间40min。结论:在该条件下,细胞融合率最高达33.06%。

紫菜种内原生质体的融合和融合体再生(英文)

利用酶解法分离出野生型叶状体和红色突变体的坛紫菜原生质体以及条斑紫菜野生型叶状体的原生质体 ,再用聚乙二醇 (PEG)法进行种内原生质体融合。当加入原生质体液内的PEG被稀释除去时 ,原生质体发生融合并形成许多杂合体。种内原生质体融合率坛紫菜为 9.7%～ 12 .4% ,条斑紫菜为 10 %～ 11.5 %。PEG分子量在 15 40～ 6 0 0 0之间 ,随着分子量的提高 ,原生质体融合率增高。原生质体融合体被挑出来进行单个培养。经过 30天培养坛紫菜的一个杂合体 (含一个红色原生质体和一个野生型原生质体 )再生成一个呈红色和野生色的相嵌叶状体。而一个含两个红色原生质体的融合体再生成一个在基部和头部均长假根的叶状体。但来自这个再生体的原生质体只长成具一个假根的叶状体。从原生质体融合体的再生体以及它们无性繁殖体的结果来看 ,坛紫菜的种内原生质体融合体可能只发生了细胞质融合 ,而真正的核融合并没有发生。培养 15～ 2 0天 ,条斑紫菜的原生质体融合体先再生成细胞团 ,然后由细胞团释放出许多胞子并萌发成正常野生型叶状体。