一种快速简便的CaCl_2质粒转化方法

介绍一种质粒DNA快速转化方法.质粒DNA加入感受态细胞,冰浴3～10min,涂布预热至37℃的平板,即可获得与常规转化方法相当的转化效率.操作步骤由5步减至2步,时间由2h减至3～10min.同时探讨了Ca2+浓度。

利用高效CaCl_2转化法实现质粒的共转化

为了提高共转化的效率 ,对《分子克隆》中感受态制备和CaCl2 转化法加以改良 ,发展了CaCl2 和MgCl2 介导的高效的感受态制备和转化方法 ,转化效率高达 10 8- 10 9转化子 /μgDNA ,完全可以满足各种转化实验 (包括共转化 )的要求。使用该法 ,我们成功地将一个受体质粒和供体质粒共转化入Cre菌株中 ,酶切结果证明供体质粒上的hIGF - 1(人胰岛素样生长因子 - 1)基因已经通过Cre酶介导的位点特异性重组连接到受体质粒的特定位点上。

PEGCaCl_2和维生素C对大白菜种子活力的影响

应用PEG,CaCl2,VitC处理老化的大白菜种子,可以提高种子活力。但活力提高的效应,在种子老化程度、基因型和处理间有显著差异。其中,老化4天的种子处理后,活力指数明显提高。在3种处理中,15%PEG在15℃下处理2d效果最佳。

CaCl_2对PEG胁迫下抗旱性不同苜蓿品种叶片解剖结构的影响

为了探讨CaCl_2缓解聚乙二醇(PEG)胁迫下2种抗旱性不同品种苜蓿幼苗叶片解剖结构的变化,试验采用石蜡切片方法,对2种苜蓿叶片解剖结构进行观察和比较。结果表明:在PEG胁迫后苜蓿叶片厚度、上下表皮厚度、栅栏组织和海绵组织厚度、中脉厚度、栅海比值、叶片栅栏组织结构紧密度(CTR值)和叶片海绵组织结构疏松度(SR值)均有降低趋势;经CaCl_2缓解后这些数据有升高趋势,其中叶片厚度、上下表皮厚度、栅栏组织和海绵组织厚度、中脉厚度等指标差异较大,栅栏组织厚度/海绵组织厚度(栅海比)、CTR值和SR值差别较小;抗旱性强的草原1号苜蓿叶片的栅栏组织较厚,叶片组织紧密度大、疏松度小,栅海比较高,中脉厚度比较大。

TSS及CaCl_2转化方法的比较

目的 :比较 TSS及 Ca Cl2 二种转化方法的转化效率。方法 :用 TSS及 Ca Cl2 方法转化质粒 p QE,并比较二者的转化效率及简便性。结果 :Ca Cl2 方法的转化效率为 5 .6× 10 6转化子 / μg DNA,TSS方法转化效率为 8.2× 10 7转化子 / μg DNA;TSS转化方法不需要 42℃热休克。结论 :TSS转化方法优于 Ca Cl2 转化方法。

PEG6000、PP_(333)和CaCl_2预吸胀处理对水稻种子耐铝性的影响

以铝敏感水稻品种湘中籼2号为材料,探讨了PEG 6000、PP333和CaC l2预吸胀处理对其耐铝性的影响。结果表明:适宜浓度的PEG 6000、PP333和CaC l2预吸胀处理后,可促进湘中籼2号的初生根伸长生长,显著提高其耐铝性,最适处理浓度分别为20%、50μmol/L和30 mmol/L。

一种简单的哺乳动物细胞附着体质粒CaCl_2转化方法

目的:建立一种简单经济的哺乳动物细胞附着体质粒还原实验方法。方法:构建附着体载体,转染中国卵巢仓鼠(CHO)细胞和小鼠脑神经瘤细胞Neuro-2a,利用改良的赫特裂解法提取附着体质粒,CaCl2法转化附着质粒至宿主菌大肠杆菌DH5α,再次从DH5α中提取质粒,将转染前后质粒用KpnⅠ/BamHⅠ双酶切和BamHⅠ单酶切,并将转染前后的质粒进行DNA测序分析。结果:与最初转染的质粒相比,还原质粒双酶切和单酶切后的条带大小一致;DNA测序分析表明,转染前后质粒中的插入序列相同。结论:建立了可用于质粒还原实验的简单的CaCl2转化方法。

天青石中添加CaCl_2生产SrCO_3的试验研究

报导了添加剂CaCl2 在天青石还原焙烧中的反应行为 ;并从试验中寻找出了使用该添加剂的最佳反应条件 .实验结果表明 :CaCl2 用量为 0 .5 %～ 1% ,反应温度为 115 0～ 12 0 0℃ ,反应时间为 30min ,矿∶煤为 1∶0 .6 ,矿、煤粒度为 2 0～ 40目时 ,可使SrCO3 生产的转化率最高 .

CaCl_2对干旱胁迫下苜蓿幼苗营养器官离子含量的影响

为了研究CaCl_2对干旱胁迫下苜蓿幼苗根、茎和叶离子含量的变化,试验采用水培方法测定了CaCl_2缓解聚乙二醇(PEG)胁迫下草原1号苜蓿幼苗不同营养器官中Na^+、K^+、Ca^(2+)、Mg^(2+)含量。结果表明:在20%PEG胁迫下,苜蓿幼苗根、茎、叶中Na^+含量增加,K^+、Ca^(2+)、Mg^(2+)含量减少。随着CaCl_2浓度的升高,Na+含量出现先降低后升高的变化趋势,K^+、Ca^(2+)(除根外)和Mg^(2+)含量均出现先增加后降低的变化趋势。根、茎、叶中Na+含量在CaCl_2浓度为10 mmol/L时最低,K^+、Ca^(2+)(除根外)和Mg^(2+)含量均在CaCl_2浓度为10 mmol/L最高。说明Ca^(2+)可改善苜蓿幼苗体内的离子平衡,缓解干旱胁迫造成的伤害,CaCl_2浓度为10 mmol/L时表现出对PEG渗透胁迫的较好缓解效应。

PEG和钙对栀子花粉萌发的影响

以栀子(Gardenia jasminoides Ellis)花粉为试验材料,采用花粉人工培养法研究了培养基中PEG和钙对栀子花粉萌发的影响。结果表明,不同分子量的PEG对栀子花粉离体萌发率的影响不同,PEG-6000较其他3种分子量的PEG促进花粉萌发的效果要好;PEG4种分子量的最适浓度不同,其中PEG-4000和PEG-6000促进栀子花粉萌发的最佳浓度为15 g/L,而PEG-2000和PEG-10000促进栀子花粉萌发的最佳浓度分别为20g/L和10g/L。以0.8%的琼脂+30 mg/L蔗糖+15 mg/L硼酸+15 g/L PEG-6000为基本培养基组分,分别添加不同浓度的CaCl_2,发现适宜浓度的钙有利于栀子花粉萌发,但钙浓度过高抑制萌发,栀子花粉萌发的最适Ca^(2+)浓度为2.0 mmol/L。

外源钙对PEG渗透胁迫下苜蓿叶片POD和CAT同工酶的影响

为研究外源钙对干旱胁迫下苜蓿幼苗过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)同工酶的影响,试验以两种抗旱性不同的苜蓿幼苗为研究对象,在20%聚乙二醇(PEG)模拟干旱胁迫条件下,通过对两种苜蓿幼苗施加不同浓度的CaCl2,采用聚丙烯凝胶电泳技术对POD、CAT同工酶进行电泳分析。结果表明:不同浓度的氯化钙对两种同工酶酶谱和酶活均产生一定的影响;POD同工酶出现总带数为65条,酶带最多有8条,最少有4条;CAT同工酶出现总带数为84条,酶带最多有9条,最少有5条;供试12份材料的POD和CAT同工酶酶谱在A区的酶带无变化、活性较强,在B区和C区出现新酶带,活性较弱。

一种改进大肠杆菌DH5α转化效率的方法

[目的]提高大肠杆菌DH5α转化效率。[方法]在其他条件一致的情况下,将5μl的质粒或连接产物加入含有100μl的感受态0.2 ml PCR管和1.5 ml的离心管中,0.2 ml PCR管设置热休克时间梯度和1.5 ml的离心管热休克时间90 s,对大肠杆菌DH5α转化效率进行了比较。[结果]0.2 ml PCR管转化效率高于1.5 ml的离心管,且0.2 ml PCR管热休克30 s时最高。[结论]采用此方法提高了大肠杆菌DH5α的转化效率。

3种假单胞菌CaCl_2法感受态细胞制备及转化条件

假单胞菌因其生境和代谢类型的多样性,在污染环境修复、生物转化、生物防治等领域具有广阔的应用潜力;外源基因的导入是假单胞菌遗传改造的重要环节,而感受态细胞的制备和转化方法的建立是导入外源基因的重要方法学基础.本研究以从石油污染土壤中分离筛选的假单胞菌属的3个菌株Pseudomonas putida TS11、P.stutzeri DNB、P.mendocina JJ12为对象,通过3因素4水平正交实验设计,研究了不同CaCl2浓度、热激时间及复苏时间对不同假单胞菌感受态细胞制备及转化效率的影响.结果表明:CaCl2浓度是影响假单胞菌转化效率的最主要因素(P<0.05),且在制备感受态细胞之前用无菌蒸馏水多次洗涤菌体细胞,转化率明显提高.3种假单胞菌的CaCl2转化优化条件分别为:100mmol·L-1CaCl2,热激3min,复苏1.5h;50mmol·L-1CaCl2,热激6min,复苏1.5h;75mmol·L-1CaCl2,热激4.5min,复苏0.5h.在上述转化条件下,3种假单胞菌的外源质粒转化效率均达到105个转化子·μg-1DNA水平.

紫外诱变筛选柄篮状菌尿嘧啶缺陷型菌株

柄篮状菌EMM是一株从原始菌OPC4诱变获得的高产纤维素酶菌株。为了获得转化用的宿主菌,通过紫外诱变的方法,在1.5g·mL-1 5-FOA的筛选压力下,从EMM诱变得到一株尿嘧啶营养缺陷型菌株EMU6。从原始菌OPC4的基因组里克隆出2 553bp的pyrF基因,NCBI比对发现,pyrF为编码乳清酸磷酸核糖基转移酶的基因,影响尿嘧啶的合成。测序比对发现,尿嘧啶营养缺陷型菌株EMU6的pyrF基因在1 160bp处有一个核苷酸缺失。柄篮状菌尿嘧啶营养缺陷型菌株的获得使基于pyrF基因转化体系的建立成为可能。

钻井液组分对气体水合物的影响

海洋深水钻井过程中容易遇到气体水合物堵塞井筒、环空、防喷器等钻井事故。用THF/SSW测试法对部分钻井液组分做了评价试验,包括粘土、NaCl、MgCl2、CaCl2、XY-27、FCLS、CMC、PSC、PEG等。结果表明,钻井液无机组分中,粘土对气体水合物的形成起促进作用,而NaCl、MgCl2、CaCl2等无机盐则起抑制作用;大部分有机处理剂对气体水合物的形成起抑制作用。在了解了备组分对气体水合物形成的影响后,可以调节组分的用量,以达到抑制气体水合物形成的最佳状态。

柄蓝状菌原生质体的制备与再生条件优化

为了建立以聚乙二醇/氯化钙(PEG/CaCl2)原生质体介导的柄蓝状菌(Talaromyces Stipitatus)高效的遗传转化系统,分别从材料选择,真菌菌龄,不同的渗透压稳定剂,酶的不同种类配比,酶的浓度,酶解时间及不同再生方式对柄蓝状菌EMM原生质的制备与再生条件进行优化。结果表明:以柄蓝状菌EMM接种生长48 h的菌丝为制备材料,1 mol/L MgSO4作为渗透压稳定剂,菌丝在温度为30℃,浓度为50 mg/mL的裂解酶溶液中酶解3 h,得到的原生质体先用再生培养基孵化培养12 h,然后再与PDA培养基混合铺板,以上组合条件下原生质体的释放量可达8.73×108/mL,再生率可达17.7%。

烧结气化脱磷过程中磷的转化及物相分析

为了探索烧结过程中磷的转化机理,在热力学计算基础上,采用微型烧结试验,对焙烧产物进行成分检测和XRD分析。结果表明,在配碳4%、Si O21.41%、Ca Cl21.36%条件下,脱磷率最高达到20%;添加Si O2时,Ca5(PO4)3F先脱氟转化为Ca3(PO4)2,进而发生脱磷反应;添加Ca Cl2后,焙烧产物中Ca5(PO4)3F衍射峰减弱,Ca SO4衍射峰强度明显增强,同时出现Ca F2相和Ca Si O3相,结合反应式,证明气化脱磷反应发生,脱磷产物为PCl3气体。