犬红细胞膜仿生纳米载体的制备和体外毒性及靶向初探

为了提高纳米颗粒的安全性和靶向性,试验采用低渗处理法制备犬红细胞膜(RBCM),双乳法制备聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米颗粒(BLANK-PLGA),并用脂质体挤出器挤出法制备犬红细胞膜囊泡(RBCM-NVE)和犬红细胞膜仿生纳米载体(PLGA-RBCM);采用透射电镜、动态光散射技术对不同纳米颗粒的结构、大小和电位进行表征鉴定;通过稳定性试验考察不同纳米颗粒的粒径及聚集性变化;采用SDS-PAGE和Western-blot法验证挤出前后细胞CD47膜蛋白表达情况;通过犬乳腺肿瘤细胞(CIPp)摄取BLANK-PLGA和PLGA-RBCM研究纳米颗粒的同源靶向性;通过体外试验探究BLANK-PLGA和RBCM-NVE纳米颗粒的细胞毒性。结果表明:BLANK-PLGA呈球形结构,RBCM-NVE呈杯状囊泡结构,PLGA-RBCM呈明显的“核-壳”结构;BLANK-PLGA平均粒径为(305.17±2.59)nm,聚合物分散性指数(polymer dispersity index, PDI)为0.10±0.01,平均电位为(-3.86±0.59)mV;RBCM-NVE平均粒径为(200.50±0.26)nm, PDI为0.22±0.02,平均电位为(-9.60±0.88)mV;PLGA-RBCM平均粒径为(274.16±2.11)nm, PDI为0.18±0.03,平均电位为(-6.03±0.64)mV;第0~25天,在PBS中PLGA-RBCM粒径保持在300 nm以下,PDI为0.2左右,随着时间推移,BLANK-PLGA的粒径与PDI均明显增大,粒径大小不均;BLANK-PLGA和PLGA-RBCM在胎牛血清中4 h内吸光度没有较大变化;RBCM在通过脂质体挤出器挤出前后均保持相同的蛋白条带并且均表达CD47膜蛋白;CIPp细胞对PLGA-RBCM的摄取量极显著多于对BLANK-PLGA(P<0.01);BLANK-PLGA和RBCM-NVE与CIPp细胞共孵育6,12,24 h后细胞活力差异不显著(P>0.05)。说明成功制备的PLGA-RBCM具有良好的稳定性、安全性及对同源细胞的靶向性。

mPEG-PLGA-mPEG纳米粒的体外降解规律的研究

通过开环共聚方法合成了具有不同组份的丙交酯 /乙交酯 /聚乙二醇 (LA/GA/PEG)共聚物 (PLGA PEG ,PELGA) ,并进一步偶联制得三嵌段共聚物 (mPEG PLGA mPEG ,简称PELGE)。采用超声乳化—溶剂蒸发法 (O/W )制备PELGE纳米粒 ,用紫外分光光度法测定乳酸含量的方法研究了PELGA、PELGE纳米粒体外降解规律 ,体外降解实验表明 :共聚物分子量增加 ,降解减慢 ;共聚物中GA含量增加 ,即LA/GA比例减小 ,降解加快 ;PEG含量增加 ,降解加快 ;LA/GA和PEG含量相同的PELGE比PELGA的降解速度快。证明了可通过改变LA/GA的比例或PEG的含量来调节聚合物的降解速率。

负载紫杉醇和JAK2-STAT3抑制剂纳米载药系统对胃癌细胞生物活性的影响机制研究

目的研讨负载紫杉醇和JAK2-STAT3抑制剂纳米载药系统对胃癌细胞生物活性的抑制作用。方法选取胃癌细胞GBC-SD为研究对象,构建PLGA(TAXOL+AZD1480)纳米粒子,确定粒子的稳定性及释放药物速率稳定性;比较对照组、PLGA组、TAXOL+AZD1480组、PLGA(TAXOL+AZD1480组)各组胃癌细胞JAK2-STAT3信号通路活性、增殖、凋亡、迁移、侵袭能力。结果PLGA(TAXOL+AZD1480)纳米粒子120 h内呈现出缓慢、稳定释放;TAXOL+AZD1480组及PLGA(TAXOL+AZD1480)组JAK2、STAT3磷酸化蛋白水平均降低(P<0.05);与PLGA组相比,TAXOL组、AZD1480组均可以下调胃癌细胞增殖、迁移、侵袭能力,上调细胞凋亡能力,Cyclin D1、MMP-9蛋白表达受到抑制,Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达提升(P<0.05);与TAXOL组、AZD1480组相比,TAXOL+AZD1480组、PLGA(TAXOL+AZD1480)组进一步下调胃癌细胞增殖、迁移、侵袭能力,上调凋亡能力(P<0.05);TAXOL+AZD1480组、PLGA(TAXOL+AZD1480)组两组癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭活性相近(P>0.05)。结论本研究成功构建了共载TAXOL和AZD1480的PLGA(TAXOL+AZD1480)载药传递系统,该纳米体系具有药物缓释以及抑制胃癌的作用,药效确切,值得在临床进一步推广。

以纳米颗粒为载体转染基因的发展概况

目的综述以纳米颗粒作为基因载体进行基因治疗的发展概况。方法依据国内外刊物公开发表的文献,对有关以纳米颗粒作为基因递送载体进行基因治疗的研究进行分类、归纳与整理。结果纳米颗粒转运系统能够保护被转运的基因,有较高的转染效率,具有良好的靶向性,并且提高了药物的生物利用度,显示出一定的缓控释作用。结论纳米颗粒作为基因递送载体具有广阔的发展前景。

阳离子PLGA载基因纳米粒的初步研究

目的制备并评价阳离子PLGA载基因纳米粒(pDNA-CTAB-NPs)。方法纳米沉淀法制备空白阳离子PLGA纳米粒(CTAB-NPs),与报告基因pEGFP复合,考察其理化性质、抗核酸酶降解能力、体外释药特性、细胞毒性及其在A549细胞中的转染情况。结果pDNA-CTAB-NPs呈球形或类球形,平均粒径175.5 nm,Zeta电位+12.54mV,pDNA结合充分(>95%),抗核酸酶降解能力强,具有缓释效果,符合Higuchi释放动力学方程(r=0.997 7),细胞毒性较低,能在A549细胞中表达。结论pDNA-CTAB-NPs是一种制备工艺简单,性能良好,极富潜力的非病毒纳米基因载体。

PEG可脱除材料修饰miRNA纳米粒的制备以及体内外性质的考察

制备PEG可脱除材料修饰miR NA纳米粒,考察其细胞摄取以及体内分布情况。采用酰胺键缩合的方法合成可被β-环糊精包合的金刚烷修饰的PEG材料,通过静电作用与miR-34a复合制得纳米粒,加入与β-环糊精亲和力更高的布洛芬后可置换脱除纳米粒的PEG壳,测定该PEG可脱除纳米粒的粒径和Zeta电位;考察其在4T1细胞上的摄取能力以及在荷有4T1细胞的BALB/c小鼠体内的分布情况。结果显示,可被β-环糊精包合的金刚烷修饰的PEG材料合成成功;通过静电作用与miR-34a复合后制得的PEG可脱除纳米粒,粒径为107.7 nm,Zeta电位为15.8 mV;相比于PEG未脱除的纳米粒,被4T1细胞摄取的能力与在小鼠体内肿瘤部位的浓度都有显著提高,该体系在肿瘤治疗领域的应用具有很大的潜力。

玻璃体内注射载HIF-1α shRNA质粒的PLGA纳米粒眼部转染效率

目的观察携带载缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)短发卡式小干扰RNA(shRNA)质粒(pshHIF-1α)的纳米粒转染眼部组织的可行性。方法应用聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)包载绿色荧光蛋白(GFP)表达的pshHIF-1α,制备纳米粒,检测其粒径、包封率、载药量及体外释放情况;将48只大鼠分为4组,每组12只(12只眼),分别向玻璃体内注入10μL磷酸盐缓冲液(PBS)、空白纳米粒(1.89mg/mL)、裸质粒pshHIF-1α(0.02mg/mL)和pshHIF-1α纳米粒(1.89mg/mL)。分别在注药后3、7、14、28d观察纳米粒的眼内穿透性和基因转染情况。通过组织病理学检查,观察注射后第3天眼内组织结构的改变。结果纳米粒的载药率和包封率分别为1.06%和60.2%,平均粒径为284nm,体外释药达4周。体内实验显示,载pshHIF-1α纳米粒定向聚集于视网膜色素上皮(RPE)层,GFP表达时间持续达28d。组织病理学检查眼内未见明显炎性细胞浸润。结论纳米粒可向眼底递送质粒形式的DNA,是眼部基因治疗安全、有效的载体之一。

应用由乳化-扩散方法制备的功能PLGA纳米颗粒的药物发送系统(英文)

运用功能纳米颗粒的药物发送系统是一种具有发展前景的途径,因为它减少了副反应并减轻病痛 Poly(D,L lactide co glycolide)(PLGA)纳米颗粒的尺寸是80nm,它的制备是通过乳化扩散方法,并应用Poloxamer188作为稳定剂 所制备的纳米颗粒具有疏水核作为药物的载体,而其冠状亲水表面可避免形成网状内皮系统(RES) 作为生物医学应用的第一个例子是PLAG纳米颗粒包含雌激素,它对于受到意外伤害而抑制不安情绪具有局限性 研究指出:局部地发送具有雌激素的PLGA纳米颗粒将激烈减少新内膜的形成程度 其次是应用经过修改的PLAG纳米颗粒发送系统专用于骨治疗的药已经实现,它与骨有高度的相似 已经证明:与双磷酸(bisphosphonate)相结合的PLGA纳米颗粒,参入到鼠的静脉内之后。

生物降解高分子纳米球的制备

利用丙交酯的开环聚合反应合成了一系列聚乳酸（ＰＬＡ）／ 聚乙二醇（ＰＥＧ）／ 聚乳酸（ＰＬＡ）三嵌段共聚物，采用１ Ｈ ＮＭＲ 分析和测定了共聚物的组成和分子量． 研究表明，当共聚物中ＰＬＡ链段分子量相同时，共聚物薄膜的吸水量随着ＰＥＧ 链段分子量和ＰＥＧ 含量的增大而提高；在３７ ℃、ｐＨ＝ ７－４ 的磷酸缓冲溶液中，共聚物在６０ ｄ 内可基本降解完全． 采用乳化溶剂蒸发技术制备了ＰＬＡ／ＰＥＧ／ＰＬＡ 三嵌段共聚物纳米球，其粒径受ＰＬＡ 链段及ＰＥＧ 链段分子量的影响，在１０３－６ ～１４１－６ ｎｍ 范围内，且大小均一，皆呈球形．

包裹姜根油的多种纳米颗粒的制备及质量评价

以大豆磷脂、聚乙交酯丙交酯(PLGA)和聚乙二醇(PEG)3种原料成功制备了包裹难溶于水的植物提取物姜根油(GRO)的纳米脂质体、PLGA纳米颗粒和PEG纳米颗粒,并对3种不同载体制备的纳米制剂的形貌、大小、Zeta电位,包封率及物理稳定性等进行了考察.研究结果表明3种纳米颗粒各有优缺点,可以根据不同的条件和不同的需要制备不同的颗粒,为开发新型的难溶药用植物提取物的理想药剂提供了实验依据.

不同链长聚乙二醇修饰的香豆素6脂质纳米粒对口服吸收的影响

通过制备不同链长聚乙二醇(PEG)修饰的纳米脂质载体(NLCs)考察PEG链长对其口服吸收的影响。使用聚乙二醇(100)单硬脂酸酯(S100)、聚乙二醇(55)单硬脂酸酯(S55)、聚乙二醇(40)单硬脂酸酯(S40)3种不同链长的PEG通过薄膜分散法制备NLCs,以香豆素6(coumarin 6)作为荧光探针,对修饰不同链长PEG的NLCs进行理化性质表征。考察了不同链长PEG修饰的NLCs在模拟缓冲液中的稳定性以及体外释药行为。同时对NLCs的细胞毒性、细胞摄取动力学以及摄取机制进行了考察。结果表明,随着PEG链段长度的增加,其水化层厚度不断增大。与其他NLCs相比,S100修饰的NLCs(pNLC-EG100)具有更好的细胞摄取效率,证明S100的链段长度是用于口服NLCs给药的最佳长度。

细胞膜仿生纳米粒的研究与应用

现今临床使用的药物绝大多数没有靶向性而且生物利用度较低,因此造成了许多药物的非特异性毒性甚至产生其他严重的副作用。现代药物制剂专家们致力于开发可靶向性递送药物至病灶部位的药物递送载体,以期实现药物的定时、定位、定量释放目的。目前已开发的药物递送载体材料通常为人工合成高分子化合物,

载基因/化疗药物双层纳米粒的制备及其体内外抗乳腺癌效应初步研究

目的以血管生成为靶点治疗肿瘤的假说验证后,抗肿瘤血管生成基因治疗因其明显的优势而受到关注,与化疗联合,既抑制肿瘤血管内皮细胞,亦杀灭肿瘤细胞,协同增强抗肿瘤效应。文中探讨了共载血管内皮生长因子(VEGF)的小型干扰RNA(siRNA)与化疗药物(EPI)的双层纳米粒的负载基因能力和体内外抑制乳腺癌初步效应。方法将合成的mPEG-g-CS与PLGA纳米粒通过超声透析法制备成双层纳米粒(DL NPs),外层为mPEG-g-CS,负载siRNA,内层为PLGA纳米粒,包载化疗药物EPI,研究双层纳米粒的理化性质,基因负载能力。将裸鼠随机数字表法分成4组,每组6只,重复3次:等渗盐水组,游离EPI组、mPEG-g-CS-siRNA NPs组以及DL NPs-siRNA组,EPI给药剂量为25 mg EPI/kg,mPEG-g-CS-siRNA以及DL-siRNA NPs给药剂量为65μg siRNA/kg,开始进行治疗。定期测量肿瘤长宽,22 d时处死裸鼠,取出肿瘤组织、称重。结果琼脂糖凝胶电泳阻滞实验表明mPEG-g-CS能有效地与pDNA结合形成稳定的复合物,且对细胞活性影响小,证明其可作为基因载体。siRNA浓度为100 nmol/L为最佳负载浓度。当N/P比例为5时,mPEG-g-CS-siRNA的粒径最小[(-12.70±0.42)nm],而对DL NPs-siRNA而言,当N/P比例为20时其粒径最小[(153.82±30.15)nm]。当N/P比例为0.1时,可以看到有少量的pDNA迁移,此时mPEG-g-CS不能完全缩合pDNA;当N/P比例为0.4及之上,pDNA完全被mPEG-g-CS阻滞,此时mPEG-g-CS已经完全缩合pDNA。以聚乙烯亚胺(PEI)为阳性对照,MCF-7细胞、HUVEC细胞与纳米粒共孵育24、48、72 h后,mPEG-g-CS-p DNA NPs都显示出较低的毒性。但是随着培养时间的延长,mPEG-g-CS-p DNA NPs的毒性增加。siRNA浓度为100 nmol/L时,MCF-7细胞存活率为78.66%,HUVEC的细胞存活率为85.69%,毒性更大。在孵育24 h时,DL NPs-siRNA浓度为0.5、50和500μg/mL时MCF-7细胞的平均存活率分别是92.4%、78.1%和51.4%,并且,随着孵育时间的延长,各组细胞存活率均降低。治疗22 d后,游离EPI组的肿瘤抑制率约为22.36%,mPEG-g-CS-siRNA组的肿瘤抑制率约为85.01%,相比之下,DL NPs-siRNA组肿瘤抑制率高达99.90%。22 d后,解剖小鼠,取出肿瘤组织,对照组的肿瘤体积和质量最大,DL NPs-siRNA组最小,肿瘤几乎完全消失。结论DL NPs可用于负载siRNA及化疗药物,有望成为一种新的抗肿瘤药物输送体系。

人参皂苷Rg3和PEG-PLGA-Rg3纳米微粒抑制肺癌血管新生的体内实验研究

目的:观察人参皂苷Rg3(Rg3)和PEG-PLGA-Rg3纳米微粒(Rg3-N)在体内对肺癌血管生成的影响并比较二者之间的差异。方法:建立小鼠Lewis肺癌动物模型并随机分为5组:正常对照(C)组、0.9%氯化钠溶液(NS)组、PEG-PLGA纳米载体(PEG)组、Rg3单体(Rg3)组和Rg3纳米微粒(Rg3-N)组,比较Rg3和Rg3纳米微粒对MVD的影响,并检测相关血管新生和炎性因子的水平来探讨它们抗血管生成作用的内在分子机制。结果:Rg3组和Rg3-N组的MVD与NS组相比明显下降(P<0.01),但是Rg3组和Rg3-N组之间未见显著性差异。同时,Rg3组和Rg3-N组的血管内皮生长因子(VEGF)mRNA、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)降低;VEGF的蛋白表达及白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)炎性因子的水平显著下降(P<0.05,P<0.01),且Rg3-N组相对于Rg3组有进一步降低的趋势。结论:Rg3和Rg3纳米缓释微粒可在体内抑制肿瘤血管的生成,这种抑制作用可能是通过抑制MMP-9、HIF-1α、VEGF的表达、降低IL-1、IL-6、TNF-α的水平来实现的;PEG-PLGA纳米载体包埋Rg3能提高其在体内抗肿瘤血管生成的能力。

葛根素靶向缓释纳米球的制备及影响因素考查

目的:制备靶向缓释葛根素纳米球,并对其形态、载药量、包封率及药物利用率等纳米球质量进行研究。方法:采用乳化溶剂挥发法制备葛根素-PLGA纳米球,并用透射电镜观察其外观形态,利用HPLC测定药物含量。结果:制得葛根素-PLGA-NS,其平均包封率为81.5%,平均载药量为2.05%,平均粒径为170.5nm。结论:葛根素靶向缓释纳米球基本达到设计要求,该制剂有望成为一种新的药物靶向载体系统。

冰片修饰的丹参酮ⅡA口服脑靶向pNLC的制备及质量评价

目的制备冰片修饰的丹参酮IIA PEG化纳米脂质载体(Bo-TA-pNLC)口服脑靶向给药系统,并对其进行质量评价。方法以Precirol ATO 5(主要成分甘油棕榈酸硬脂酸酯)及中链甘油三酯为固/液脂质材料,聚乙二醇硬脂酸酯15(Solutol HS15)为乳化剂,采用乳化蒸发-低温固化法制备Bo-TApNLC,通过正交试验优化处方,并对最优处方所制备的纳米脂质载体的形态、粒径、Zeta电位、包封率及体外释药行为进行考察。结果最优处方中固/液脂质比为7:1,Bo-TA-pNLC呈较规则的球形,平均粒径为102.49 nm,Zeta电位为-21.11 mV,平均包封率为84.12%,丹参酮IIA体外96 h内累积释放率为48.13%。结论采用乳化蒸发-低温固化法制备的Bo-TA-pNLC粒径分布均匀、包封率较高,且具有明显的体外缓释特征。

基于肿瘤治疗及超声分子成像一体化的靶向诊疗体的研究进展

随着越来越多的研究者注意到靶向纳米或微米载体在荷载药物、改善影像学诊断的质量、增加影像学诊断方式上的独特优势,靶向诊疗体的发展也越来越完善,如果靶向纳米载体同时具有治疗和显像两种功能,则可实现肿瘤靶向性的诊疗一体化,这无疑是未来新的发展方向。其基本结构为有机、无机以及杂化的纳米材料,内部包载化疗药、si RNA、水解酶等,或者修饰金、铂等重金属,表面枝接靶向识别肿瘤细胞或肿瘤新生血管的特异性分子,