皇竹草原生质体分离及瞬时表达系统的建立

[目的]建立皇竹草高效原生质体分离体系和瞬时表达系统。[方法]通过CRISPR-Cpf1系统构建了针对皇竹草PsC3H53基因的pCAMBIA1304-LbCas12a-PsC3H53cr表达载体,对纤维素酶R-10的酶解液质量分数设置了4组处理(1.5%、2.0%、2.5%、3.0%)和7组处理的酶解时间(3、4、5、6、7、8、9 h),并采用聚乙二醇(PEG)介导原生质体转化。[结果]酶解7 h,2.5%纤维素酶、0.5%果胶酶与0.4%离析酶组合的酶解条件最佳,原生质体的产量可达1.712×10^(6) cell/(g·FW),PEG法可成功介导质粒转化皇竹草原生质体并在荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白。[结论]在皇竹草中成功建立瞬时表达系统和遗传转化体系,经优化最佳酶解组合和时间后即能通过PEG介导实现皇竹草原生质体的瞬时转化,为后续皇竹草的再生及品种培育奠定了基础。