PEG-EPO在大鼠体内的药代动力学研究

目的:探讨聚乙二醇化促红细胞生成素(PEG-EPO)在大鼠体内的药代动力学。方法:采用放射性核素125I对PEG-EPO进行标记,测定高、中、低(27,9,3μg·kg-1)3个剂量组大鼠静脉注射125I-PEG-EPO后不同时间血浆中药物的放射性浓度,用DAS软件拟合放射性浓度-时间曲线,并计算药代动力学参数。结果:低、中、高3个剂量组给药后0.017h(1min)血药浓度分别为(24.800±3.535),(80.971±16.368),(269.620±26.360)ng·mL-1,与剂量呈正相关,r=0.9998;血中药物消除半衰期T1/2β分别为(27.22±3.67),(28.40±1.61),(33.12±1.83)h,随剂量的增加无显著变化;AUC0-120h分别为(69.22±7.13),(218.77±34.57),(470.42±65.88)ng·h·mL-1,与剂量呈正相关,r=0.9909。结论:PEG-EPO在大鼠体内的代谢过程呈线性动力学特征,符合二室开放模型。

HPLC法测定PEG-EPO中丁二酰亚胺的残留量

目的：建立聚乙二醇重组人促红素（ PEG-EPO）中丁二酰亚胺残留量测定的高效液相色谱法。方法使用高效液相色谱法，色谱柱为Shiseido Capcell PAK C18 AQ（4.6 mm ×250 mm，5μm），流动相为0.02 mol·L-1 KH2PO4（pH 6.5），检测波长为210 nm，流速为0.7 mL·min-1。结果线性范围为0.08~0.8μg（r＝1），6次重复进样峰面积响应值的RSD为0.61％，平均加样回收率为100.96％。结论建立的高效液相色谱法简单、精密度良好、准确度良好，可用于PEG-EPO中丁二酰亚胺残留量检测。

PEG-EPO中残余聚乙二醇的碘染色法

目的:建立检测聚乙二醇化促红细胞生成素(PEG-EPO)产品中残余聚乙二醇(mPEG_2-COOH)含量的方法。方法:样品经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)后,采用碘染色法进行染色,根据染色带深浅分析样品中 mPEG_2-COOH 的含量。结果:确定了测量 PEG-EPO 中检测 mPEG_2-COOH 含量的实验条件,在本实验条件下 mPEG_2-COOH 的检测下限约为5μg·mL^(-1)。结论:本法便捷、重复性好,适合该 mPEG_2-COOH 含量的检测要求。同时可运用于相关的聚乙二醇修饰蛋白质。

PEG-EPO中游离PEG的示差折光率检测

目的 建立完善折光率检测PEG-EPO中游离PEG.方法 色谱柱为Tosohaas TSK SP-5PW（7.5 mm×75 mm,10 μm）和TSK G3000 SWxl（7.8 mm×300 mm,5 μm）,流动相为0.01 mol·L-1柠檬酸,pH 3.0,流速1 mL·min-1,柱温35 ℃,应用Waters 2414示差折光率检测器检测.结果 游离PEG溶液在5.0～80 μg·mL-1范围内有良好的线性关系,r=1;重复性试验峰面积的RSD值为0.46%,主峰保留时间的RSD值为0.23%;平均回收率为101.6%（n=9,RSD为1.92%）.结论 该方法操作简便,快速准确,可以很好地用于PEG-EPO中游离PEG的检测,经过适当调整,同样可用于其它其他PEG化蛋白药物中游离PEG的检测.

RP-HPLC法测定聚乙二醇重组人促红素成品中甲硫氨酸的含量

目的 建立聚乙二醇重组人促红素（PEG-EPO）成品中甲硫氨酸含量测定的方法.方法采用反相高效液相色谱法,色谱柱为Waters Symmetry C18（4.6 mm×250 mm,5 μm）,流动相A为注射用水,B为乙腈.检测波长为210 nm,流速为1.0 mL·min-1.结果 甲硫氨酸进样量在11.19~33.57 μg范围内,线性关系良好（r=0.999 5）;该方法的平均回收率为100.38%,RSD为0.95%（n=5）.结论 所建立的方法简单、精密度、准确度良好,可用于PEG-EPO成品中甲硫氨酸含量测定.

生物仿制药研发的风险控制

根据风险管理理论,研究了PEG-EPO生物仿制药研发项目的风险控制,建立了风险管理模型,对其它生物仿制药的研发有一定借鉴意义。首先概述了生物仿制药发展的现状和前景以及研发特点。其次根据风险控制和管理理论,结合项目实际,依次进行了项目风险的识别,风险的评估分析以及风险控制。并根据项目进度,持续进行风险的评价和监控,确保项目顺利开展。

聚乙二醇化促红细胞生成素在猕猴体内的药代动力学分析

目的分析聚乙二醇(相对分子质量40000)化促红细胞生成素(PEG-EPO)在猕猴体内的药代动力学特征。方法建立检测PEG-EPO的双抗体夹心ELISA方法,并进行验证。用1、3和9mg/kg3个剂量的PEG-EPO经静脉注射猕猴,给药后各时间点检测猕猴体内的血药浓度,用DAS软件获取各剂量组药代动力学参数。结果PEG-EPO在猕猴体内的代谢过程符合二室开放模型,1、3和9mg/kg3个剂量的PEG-EPO的消除半衰期(t1/2β)分别为(51.89300±5.39558)、(42.48550±3.01606)和(56.46130±6.81932)h;AUC0～144分别为(109.32±9.82)、(236.23±36.16)和(722.55±84.31)mg/L·h。结论相对分子质量为40000的PEG修饰的EPO能显著延长其在猕猴体内的半衰期。