新型PEI衍生物对基因沉默作用的研究

目的:构建出一种新型的高效的非病毒基因输送材料。方法:利用1,4-丁二醇二氯甲酸酯连接小分子PEI,合成新型的PEI衍生物(dPEI),通过体外COS-7和HSC细胞实验检测其对质粒和siRNA的输送情况。结果;COS-7细胞实验显示,dPEI具有高效输送质粒的能力,其转染效率是对照组PEI25kDa的10倍以上;同时,HSC细胞实验进一步证实dPEI包裹siRNA转染具有一定的基因沉默作用。结论:本研究合成的新型PEI衍生物既可以用于质粒基因的转染,也可用于siRNA的转染,是一种新型的高效的非毒基因输送材料。

新型可降解PEI衍生物的表征及其在Brl-3A细胞中的毒性和转染研究

目的:对新型可降解高分子进行表征,研究其在Brl-3A细胞中的毒性和转染效率,以及连接剂比例对以上方面的影响。方法:通过化学方法合成不同比例PEI-Tr高分子,考察其包裹质粒DNA形成纳米颗粒的粒径和电位,以CCK-8方法考察Brl-3A细胞中的细胞毒性,以荧光素酶质粒为报告基因考察Brl-3A细胞中的转染效率。结果:PEI-Tr材料能形成200 nm以下带20 mV左右正电荷的纳米颗粒,具有较好的细胞内吞能力和溶液稳定性,细胞毒性实验证明,随着浓度增加PEI-Tr材料显示了远低于PEI-25kDa的细胞毒性,细胞转染实验表明其拥有高效输送质粒的能力。结论:PEI-Tr是一种高效低毒的可降解聚阳离子载体,在基因输送领域有很大的潜力;连接剂的比例在聚阳离子功能中起到重要作用。

新型PEI衍生物在COS-7细胞中的转染与毒性研究

目的:寻找一种新型的转染效率高,毒性低的非病毒基因载体。方法:通过化学方法合成Polyimine-MPEI,然后以不同质量比包裹绿色荧光蛋白质粒,检测在COS-7细胞中的转染效率和毒性。结果:在比例从5到100之间,转染效率均比较理想,能达到1.00E+07以上,Polyimine-MPEI的毒性也很小,细胞的生长率均在80%以上,明显高于PEI25KDa对照组。结论:Polyimine-MPEI是一个很有研究前景的聚合物载体,具有高转染效率低毒性的特点,可以通过延长反应时间,增加分子量,增大转染能力。

新型可降解PEI衍生物的体外表征及在HUVEC细胞中的毒性研究

目的:以分支状PEI 1800 Da为基本单元,以化学方法连接咪唑二醛,构建含有可降解亚胺键的新型聚乙烯亚胺衍生物基因载体。对合成的新型基因载体进行体外表征,测定其与p DNA形成的复合物的粒径和zeta电位,研究该复合物在HUVEC细胞中的细胞毒性。方法:通过有机合成方法合成新型聚乙烯亚胺衍生物,考察其与p DNA形成的复合物的粒径和zeta电位,并通过透射电镜考察复合物的形态特征,通过CCK-8方法测定复合物在HUVEC细胞中的毒性。结果:合成的新型基因载体能与p DNA复合形成200 nm左右带20 m V正电荷的纳米颗粒,有利于细胞内吞;形态特征研究表明新型基因载体能将p DNA压缩成类球形的纳米粒,大小与粒径检测结果基本一致。细胞毒性实验表明,合成的新型基因载体材料在相同质量比范围内显示出明显低于PEI25 KDa的细胞毒性。结论:合成的新型基因载体具有较低的细胞毒性,是一种具有良好应用潜力的基因输送载体。

新型聚乙烯亚胺衍生物在COS-7细胞中转染和毒性的研究

目的:研究以乙二醛为连接剂的聚乙烯亚胺(Polyethyleneimine,PEI)衍生物Polyimine-PEI对非洲绿猴肾癌细胞COS-7的转染活性和细胞毒性的影响。方法:以荧光素酶质粒为报告基因,研究高分子与DNA的复合物在COS-7细胞的转染活性,用MTT方法研究高分子对COS-7细胞的毒性。结果:COS-7细胞实验显示,Polyimine-PEI具有很低细胞毒性,其毒性显著低于PEI25kDa,同时也具有高效输送质粒的能力。结论:Polyimine-PEI是一种新型的高效,低毒在基因治疗领域有相当前景的非病毒载体。

PEN载ODN MT01复合物性能检测及其对成骨细胞增殖的影响

目的：检测PEI衍生物PEN装载ODN MT01复合物性能及PEN/ODN MT01复合物转染MG63细胞对细胞增殖影响。方法：以PEN为载体静电装载ODN MT01,Nanodrop测定PEN与ODN MT01不同质量比时装载效率;琼脂糖凝胶电泳检测PEN装载ODN MT01能力;马尔文粒度电位仪检测PEN/ODN MT01复合物粒度及电位;PEN装载ODN MT01-Cy5转染MG63细胞,观察荧光强度及进行FCM检测;MTT检测转染PEN/ODN MT01复合物细胞增殖率。结果：PEN/ODN MT01复合物随质量比增加表面由负电转为正电,粒径大小90-110nm;ODN MT01与PEN质量比为1∶6时,装载率高达77.67%,且转染MG63细胞荧光强度最大;PEN/ODN MT01复合物与对照组相比明显促进MG63细胞增殖。结论：PEN与ODN MT01质量比为1∶6时,可以高效装载ODN MT01,且可以明显促进MG63细胞增殖。

PEN载体传递ODN对人成骨样细胞细胞周期与成骨分化的影响

目的:采用新型载体PEN对ODN进行传递,探讨MT01/PEN复合物对人成骨样细胞(MG63)细胞周期及成骨分化的影响。方法:选取不同装载比例的MT01/PEN复合物,以MT01及S-MT01做对照,分别检测其对MG63细胞周期及成骨分化相关基因ALP活性、BMP2、OCN表达的影响。结果:MT01/PEN组Gl期、G2期细胞百分比降低,S期比例增高(P<0.01),碱性磷酸酶活性增加(P<0.01),OCN、BMP2蛋白表达增高(P<0.05)。结论:以PEN为载体传递MT01能促进MG63的分化。