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pET15b-pep-1-p27mt的构建、表达及意义
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作者 王立林 严世荣 +2 位作者 汪炳华 王家宁 黄永章 《药物生物技术》 CAS CSCD 2005年第5期285-290,共6页
构建细胞穿膜肽(cell-penetrating peptides,CPPs)PEP-1和细胞周期抑制蛋白p27mt的重组体,并在大肠杆菌中表达。将已构建的表达细胞周期抑制蛋白p27mt的基因,克隆入pET15b-pep-1原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)LysS内,以IPTG诱导融合... 构建细胞穿膜肽(cell-penetrating peptides,CPPs)PEP-1和细胞周期抑制蛋白p27mt的重组体,并在大肠杆菌中表达。将已构建的表达细胞周期抑制蛋白p27mt的基因,克隆入pET15b-pep-1原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)LysS内,以IPTG诱导融合蛋白表达。表达产物用SDS-PAGE及Western blot分析鉴定。结果:成功地构建PEP-1-p27mt融合蛋白原核表达载体,并在IPTG诱导下获得特异性的表达。PEP-1-p27mt融合蛋白表达载体的构建,为体内应用细胞周期抑制蛋白诱导肿瘤细胞凋亡提供了理论基础。 展开更多
关键词 细胞穿膜肽 pep-1 pep-1-p27mt融合蛋白 pET15b-pep-1-p27mt 重组表达子 抑癌基因
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基于主题意义探究的小学英语故事教学——以PEP《英语》三年级下册Unit 5 Do you like pears?中的Story time为例
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作者 丁亚芬 《教学月刊(小学版)(综合)》 2023年第12期18-21,共4页
Story time是PEP教材的重要组成部分,蕴含着深刻的主题内涵,具有学科育人价值。挖掘主题意义,沿主题进行教学能最大程度地发挥故事教学的价值。教师应“深入研读语篇,确立主题意义;设计梯度活动,探究主题意义;推动实践体验,内化主题意义... Story time是PEP教材的重要组成部分,蕴含着深刻的主题内涵,具有学科育人价值。挖掘主题意义,沿主题进行教学能最大程度地发挥故事教学的价值。教师应“深入研读语篇,确立主题意义;设计梯度活动,探究主题意义;推动实践体验,内化主题意义;有效实施评价,升华主题意义”,使学生深化故事内涵,形成正确的文化认知,作出正确的行为选择。 展开更多
关键词 故事教学 主题意义 小学英语 pep教材
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PEP-PCR法及其在法医学中应用的可行性研究 被引量:3
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作者 郑秀芬 叶健 +2 位作者 吉冈尚文 季安全 进藤祥子 《中国法医学杂志》 CSCD 2000年第1期18-21,共4页
提高微量检材的利用率 ,建立PEP方法并对其法医学应用进行可行性研究。用 15个随机寡核苷酸的序列作为引物 ,低特异性下扩增出微量DNA ,以此扩增物作为模扳 ,进行特异基因座扩增。经PMCT118,GABAR ,DYS19,D18S849,D3S1744,D12S10 90 ,D8... 提高微量检材的利用率 ,建立PEP方法并对其法医学应用进行可行性研究。用 15个随机寡核苷酸的序列作为引物 ,低特异性下扩增出微量DNA ,以此扩增物作为模扳 ,进行特异基因座扩增。经PMCT118,GABAR ,DYS19,D18S849,D3S1744,D12S10 90 ,D8S1179,D2 1S11,D18S5 1,D5S818,D13S3 17,D7S82 0 ,D3S13 5 8,vWA ,FGA ,TH0 1,CSF1PO ,TPOX ,D16S5 3 9及Amelogene等 2 0个基因座的PEP PCR与直接的PCR分析比较 ,二者分型结果一致 ,即使 1ngDNA也能得到正确分型。PEP方法可用于法医学检验 ,有利于微量物证的利用 。 展开更多
关键词 pep pep-PCR 法医学 应用
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PEPS车型无法启动故障排查分析
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作者 夏乾熔 巫昭阳 +1 位作者 朱洪亮 何方 《汽车电器》 2023年第8期91-93,共3页
本文主要讲述被动进入与被动启动(Passive Entry&Passive Start,PEPS)系统车型突然发生无法上电启动故障,从PEPS系统工作原理进行梳理可能原因,借助CANOE/PICO等设备逐一排查,分析相关疑点,最终锁定故障点,并制定相关更改措施,解决... 本文主要讲述被动进入与被动启动(Passive Entry&Passive Start,PEPS)系统车型突然发生无法上电启动故障,从PEPS系统工作原理进行梳理可能原因,借助CANOE/PICO等设备逐一排查,分析相关疑点,最终锁定故障点,并制定相关更改措施,解决该问题。 展开更多
关键词 pepS系统 电子转向柱锁 K线通信 启动故障
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基于PEP中小学英语教材的英语绘本分级阅读策略
5
作者 贺中华 哈建民 《今天》 2023年第16期0169-0170,共2页
英语绘本是学习英语的重要资源之一,它不仅可以帮助学生提高英语阅读能力,还可以帮助学生学习英语语法和词汇。然而,由于英语绘本的内容和难度各不相同,对于学生来说,选择适合自己的绘本阅读是非常重要的。PEP 中小学英语教材是国内中... 英语绘本是学习英语的重要资源之一,它不仅可以帮助学生提高英语阅读能力,还可以帮助学生学习英语语法和词汇。然而,由于英语绘本的内容和难度各不相同,对于学生来说,选择适合自己的绘本阅读是非常重要的。PEP 中小学英语教材是国内中小学英语教学的主要教材之一,其教学内容和难度适合学生的年龄和英语水平。基于 PEP 中小学英语教材的英语绘本分级阅读策略,可以帮助学生选择适合自己英语水平和阅读能力的绘本,并逐步提高阅读能力和英语水平。因此,本文将着力探究基于 PEP 中小学英语教材的英语绘本分级阅读策略,为提高中小学学生的英语水平提供可行性建议。 展开更多
关键词 pep英语教材 中小学 绘本分级 阅读策略
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PEP小学英语教材中“Story time”与“五育”融合的教学案例分析
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作者 迟明峰 《课堂内外(小学教研)》 2023年第7期130-133,共4页
PEP小学英语教材中设置“Story time”这一板块,其目的是帮助学生学习英语语言知识,培养学生听、说、读、表演以及学以致用的技能,提高其语言运用能力,促进其思维发展和综合素养的提高。作为基础学段的英语教师,应积极探索出一条通过激... PEP小学英语教材中设置“Story time”这一板块,其目的是帮助学生学习英语语言知识,培养学生听、说、读、表演以及学以致用的技能,提高其语言运用能力,促进其思维发展和综合素养的提高。作为基础学段的英语教师,应积极探索出一条通过激励学生阅读来提高其思辨能力的教学策略,以提升学生的英语学科素养,促进学生英语综合能力的发展。学生的发展应该是全面的,因此课堂教学也应与促进学生的德育、智育、体育、美育、劳动教育(统称“五育”)相融合,培养德智体美劳全面发展的社会主义建设者和接班人。文章以PEP小学英语教材为例,对“Story time”与德育、智育、体育、美育、劳动教育相融合进行案例分析。 展开更多
关键词 pep小学英语教材 五育 教育案例
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Pep-1引导的基聚多巴胺载药替莫唑胺纳米颗粒用于胶质母细胞瘤化疗及光热双重治疗 被引量:1
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作者 吴浩 刘琦 +3 位作者 魏民 马强 李育平 张恒柱 《现代肿瘤医学》 CAS 北大核心 2023年第15期2789-2798,共10页
目的:构建由Pep-1引导的基聚多巴胺(PDA)载药替莫唑胺(TMZ)的纳米颗粒(NPs)用于胶质母细胞瘤的化疗及光热的双重治疗。方法:利用PDA的邻苯二酚、氨基、羧基等活性基团及超强的黏附性与TMZ和Pep-1的羰基、氨基及巯基发生席夫碱反应及自组... 目的:构建由Pep-1引导的基聚多巴胺(PDA)载药替莫唑胺(TMZ)的纳米颗粒(NPs)用于胶质母细胞瘤的化疗及光热的双重治疗。方法:利用PDA的邻苯二酚、氨基、羧基等活性基团及超强的黏附性与TMZ和Pep-1的羰基、氨基及巯基发生席夫碱反应及自组装,得到Pep-1@PDA-TMZ NPs;使用动态光散射及透射电子显微镜对其尺寸、电荷及形貌进行表征;采用傅里叶红外光谱及紫外光谱对其药物的负载及组装进行分析;使用水、胎牛血清对其稳定性进行考察;采用近红外热成像仪验证其光热转换效能;并考察TMZ的释放情况。通过细胞实验验证Pep-1@PDA NPs的生物相容性、细胞摄取情况及Pep-1@PDA-TMZ NPs对于U87和C6细胞的抑制率。结果:制备的Pep-1@PDA-TMZ NPs形态较规则,呈球形,尺寸约140 nm,载药量约50%;细胞内吞成像表明U87和C6细胞对Pep-1@PDA-TMZ NPs的吞噬量高于PDA-TMZ NPs;在808 nm激光的照射下,Pep-1@PDA-TMZ NPs对U87和C6细胞的抑制率分别为90.81%和82.29%(P<0.05)。结论:纳米递药系统Pep-1@PDA-TMZ NPs的载药率较高、穿透力较强、生物相容性及靶向性较好,能够提供化疗和光疗为一体的双重治疗作用。 展开更多
关键词 替莫唑胺 聚多巴胺 细胞穿膜肽-1 胶质母细胞瘤 纳米递药系统 联合治疗
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PEP羧化酶及其催化PEP羧化反应的机理
8
作者 白宝璋 谭桂茹 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 1991年第4期87-91,共5页
本文综述了有关植物PEP羧化酶(磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶)及其催化PEP(磷酸烯醇式丙酮酸)羧化反应机理的文献资料。同时,还讨论了PEP羧化酶催化PEP羧化反应的机理,即PEP的羧化过程可能经过活化与羧化两个阶段。
关键词 植物 pep pep羧化酶 羧化反应
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油菜农杆菌转基因体系的建立及转PEP反义基因油菜的获得 被引量:43
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作者 郎春秀 胡张华 +2 位作者 刘智宏 黄锐之 陈锦清 《浙江农业学报》 CSCD 1999年第2期55-58,共4页
本研究建立了油菜农杆菌转基因技术体系,用根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)共培养法将PEP反义基因导入甘蓝型油菜(BrasicanapusL.)主栽品种浙油758和浙优油1号,获得高含油量... 本研究建立了油菜农杆菌转基因技术体系,用根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)共培养法将PEP反义基因导入甘蓝型油菜(BrasicanapusL.)主栽品种浙油758和浙优油1号,获得高含油量的油菜植株。实验所用外植体为培养8~10d的无菌苗下胚轴;农杆菌为EHA101(含AntiPEP/PIG121),外植体经农杆菌感染后共培养2d,转入含500mg/L羧青霉素的MS培养基上,1周后转入含羧青霉素及潮霉素的培养基上,以后每2周继代一次至出现抗性芽,转化频率为275%(浙优油1号);分化的茎芽在含相同抗生素的生根培养基中生根并长成完整小植株,转入土壤成为正常植株。经GUS组织化学染色及PCR扩增检测,证明外源基因已插入油菜基因组并得到表达。 展开更多
关键词 根癌农杆菌 油菜 转基因 pep反义基因
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Study on the Penetrability of PEP-1-P27mt for Cell Membranes in Vitro
10
作者 严世荣 朱明磊 +2 位作者 邱方城 王立林 屈伸 《Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences)》 SCIE CAS 2007年第3期225-229,共5页
Double-stranded oligomeric nucleotide encoding PEP-1 peptides was synthesized, pro- karyotic expression pET15b-pep-1-p27mt recombinant constructed, E. coli BL21 (DE3)pLysS trans- formed and induced with IPTG to highly... Double-stranded oligomeric nucleotide encoding PEP-1 peptides was synthesized, pro- karyotic expression pET15b-pep-1-p27mt recombinant constructed, E. coli BL21 (DE3)pLysS trans- formed and induced with IPTG to highly express fusion protein PEP-1-P27mt. Fusion protein with an N-terminal His-tag could be purified by Ni2+-resin affinity chromatography and identified by SDS-PAGE and Western blotting. Cultured EC9706 cells treated with PEP-1-P27mt revealed that PEP-1-P27mt was transduced into cells after 15 min and reached maximal intracellular concentra- tions in 2 h. PEP-1-P27mt of 1 μmol/L final concentration could most strongly suppress the growth. It was suggested that PEP-1 can carry P27mt across membrane, which provides a new biological pro- tocol for using cyclin dependent kinase inhibitors p27mt in suppressing the growth of tumor cells. 展开更多
关键词 cell-penetrating pepTIDES pep-1 p27mt pET15b-pep-1-p27mt RECOMBINANT
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获得转反义PEP基因超高油大豆新材料 被引量:29
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作者 赵桂兰 陈锦清 +3 位作者 尹爱萍 胡张华 钱雪燕 郭东全 《分子植物育种》 CAS CSCD 2005年第6期792-796,共5页
利用基因工程技术进行植物高油育种,是当前国际上植物基因工程研究的热点之一。大豆是世界上植物油和植物蛋白质最重要的来源,随着人们生活水平的不断提高和养殖业的迅速发展,我国高油大豆需求量急剧增加。在不增加大豆面积的前提下,提... 利用基因工程技术进行植物高油育种,是当前国际上植物基因工程研究的热点之一。大豆是世界上植物油和植物蛋白质最重要的来源,随着人们生活水平的不断提高和养殖业的迅速发展,我国高油大豆需求量急剧增加。在不增加大豆面积的前提下,提高单位面积含油量的重要手段之一就是培育栽培高油大豆品种。由此,从2000年作者利用农杆菌介导法将反义PEP基因导入大豆的基因组,相继获得了转基因大豆植株,经多代连续筛选、鉴定,获得了稳定的超高油(脂肪25%)大豆品系。本研究首次报道利用基因工程手段大幅度提高大豆含油量。 展开更多
关键词 大豆 反义pep基因 超高油含量
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应用反义PEP基因表达技术提高稻米脂肪含量 被引量:20
12
作者 吴关庭 郎春秀 +4 位作者 胡张华 陈笑芸 王伏林 金卫 陈锦清 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期339-344,共6页
以成熟种子为来源的胚性愈伤组织为受体材料,采用根癌农杆菌介导方法将反义磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(phosphoenolpyruvatecarboxylase,PEPCase)基因导入粳稻品种秀水11,获得一批转基因植株,并通过GUS组织化学染色、PCR检测和Southern杂... 以成熟种子为来源的胚性愈伤组织为受体材料,采用根癌农杆菌介导方法将反义磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(phosphoenolpyruvatecarboxylase,PEPCase)基因导入粳稻品种秀水11,获得一批转基因植株,并通过GUS组织化学染色、PCR检测和Southern杂交分析等方法进行了验证。对T1代的检测结果表明,所转基因已遗传给后代,且大多数株系的分离比符合3:1。T2代测定结果显示,转基因水稻株系的稻米脂肪含量比对照高出0.37±0.12个百分点,其差异大部分达到极显著水平。 展开更多
关键词 水稻 根癌农杆菌 遗传转化 反义pep基因 脂肪含量
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利用花粉管导入法获得转反义PEP基因大豆植株 被引量:14
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作者 胡张华 黄锐之 +2 位作者 刘智宏 郎春秀 陈锦清 《浙江农业学报》 CSCD 1999年第2期99-100,共2页
近年来,大豆遗传转化技术发展非常迅速,用农杆菌介导法[1]将新霉素磷酸转移酶Ⅱ(NPTⅡ)、GUS等报告基因玉米转座子AC,DC因子[4]及抗除草剂基因导入大豆细胞。此外,虽然可以采用电击法[2]、PEG法[3]、基... 近年来,大豆遗传转化技术发展非常迅速,用农杆菌介导法[1]将新霉素磷酸转移酶Ⅱ(NPTⅡ)、GUS等报告基因玉米转座子AC,DC因子[4]及抗除草剂基因导入大豆细胞。此外,虽然可以采用电击法[2]、PEG法[3]、基因枪法[4]进行大豆遗传转化研究,... 展开更多
关键词 大豆 反义pep基因 花粉管途径 遗传
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甘蓝型油菜pep基因片段的克隆和种子特异性反义表达载体的构建 被引量:7
14
作者 张志刚 白德朗 +3 位作者 陈烈臣 熊兴华 李栒 官春云 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期249-252,共4页
丙酮酸羧化酶(PEP)是控制油菜蛋白质/油脂含量比例的一个关键酶,抑制种子中pepc基因的表达,使其底物(丙酮酸)更多地朝生成油脂的方向流动,对提高种子的含油量,增加油菜的经济价值具有重要的意义.利用PCR技术从甘蓝型油菜湘油15号基因组... 丙酮酸羧化酶(PEP)是控制油菜蛋白质/油脂含量比例的一个关键酶,抑制种子中pepc基因的表达,使其底物(丙酮酸)更多地朝生成油脂的方向流动,对提高种子的含油量,增加油菜的经济价值具有重要的意义.利用PCR技术从甘蓝型油菜湘油15号基因组中扩增了PEP基因片段,并将其克隆到pGEM-TEasy载体上进行测序.测序结果表明:扩增片段长576bp,与Yannai报道的PEP基因相应区域的同源性为95%.用扩增引物上设计的BamHI和SacI两位点酶将PEP基因片段切下,反向插入到pBI121.N质粒的Napin启动子之后,构建了种子特异性反义PEP表达载体,并通过农杆菌介导法将反义PEP基因转化到湘油15号中. 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 PCR 反义pep 种子特异性表达载体
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C3植物绿色器官PEP羧化酶活性的比较研究 被引量:23
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作者 郝迺斌 谭克辉 +4 位作者 那松青 贾志旺 戈巧英 张玉竹 杜维广 《Acta Botanica Sinica》 SCIE CAS CSCD 1991年第9期692-697,共6页
本文研究了小麦(Triticum aestivum L.)和大豆(Glycine max L.)的不同光合器官中的PEP羧化酶及其相关的酶类。在这些器官中均含有PEP羧化酶,其中以大豆的荚壳和种皮及小麦的内稃中PEP羧化酶活性最高。不同绿色器官在光下或暗中均能... 本文研究了小麦(Triticum aestivum L.)和大豆(Glycine max L.)的不同光合器官中的PEP羧化酶及其相关的酶类。在这些器官中均含有PEP羧化酶,其中以大豆的荚壳和种皮及小麦的内稃中PEP羧化酶活性最高。不同绿色器官在光下或暗中均能固定CO2,但是在黑暗条件下,小麦的内稃和大豆的荚壳及种皮所固定的CO2远高于叶片。此外,参与暗固定的NAD-苹果酸酶和NAD-苹果酸脱氢酶的活性,在这些器官中也最高,说明这些器官中PEP羧化酶的CO2 β-羧化作用主要在于固定呼吸作用所释放的CO2,只有少量的CO2是通过C4光合途径被固定。 展开更多
关键词 pep羧化酶 小麦 大豆 C3植物
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干旱对玉米幼苗PEP羧化酶活性的影响 被引量:15
16
作者 董永华 史吉平 韩建民 《玉米科学》 CAS CSCD 1995年第2期54-57,共4页
本文研究了土壤干旱过程中及复水后玉米幼苗PEP羧化酶活性的变化。结果表明,当土壤含水量由21.0%降至6.1%时,PEP羧化酶活性由0.352μmolCO2/mg·pro.min降至0.063μmolCO2/mg&... 本文研究了土壤干旱过程中及复水后玉米幼苗PEP羧化酶活性的变化。结果表明,当土壤含水量由21.0%降至6.1%时,PEP羧化酶活性由0.352μmolCO2/mg·pro.min降至0.063μmolCO2/mg·pro·min,复水后其活性恢复很慢,即使叶水势恢复到干旱前水平(-0.3MPa),此酶活性才恢复到0.17μmolCO2/mg·pro·min,仅为干旱前的47.4%。光合速率先升后降,叶绿素含量和叶片水势的变化与PEP羧化酶相似,气孔阻力则随土壤干旱程度的加剧而逐渐升高。说明土壤干旱过程中玉米幼苗PEP羧化酶活性的降低可能是光合作用下降的非气孔因素之一。 展开更多
关键词 玉米 pep羧化酶 光合速率 气孔阻力 土壤干旱
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PEP聚醚型非离子表面活性剂复配体系的研究 被引量:11
17
作者 周莉 郝放琴 刘波 《功能高分子学报》 CAS CSCD 2001年第1期100-104,共5页
主要讨论了聚氧丙烯 -聚氧乙烯 -聚氧丙烯 (PEP)嵌段共聚醚型非离子表面活性剂分别与十二烷基硫酸钠 (SDS)、十六烷基三甲基溴化铵 (C16TAB)复配体系的水溶液的表面张力随浓度的变化及其盐效应的影响 ,计算了二元复配体系水溶液的表面... 主要讨论了聚氧丙烯 -聚氧乙烯 -聚氧丙烯 (PEP)嵌段共聚醚型非离子表面活性剂分别与十二烷基硫酸钠 (SDS)、十六烷基三甲基溴化铵 (C16TAB)复配体系的水溶液的表面张力随浓度的变化及其盐效应的影响 ,计算了二元复配体系水溶液的表面吸附层分子相互作用参数 ( βσ)及胶束中分子相互作用参数 ( βm)的值 ,比较了复配体系的协同效应 。 展开更多
关键词 pep型嵌段共聚醚 表面张力 分子相互作用参数 协同效应 盐效应 非离子表面活性剂
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改良的PEP方法在无创性产前基因诊断中的应用 被引量:7
18
作者 王敏 金春莲 +3 位作者 林长坤 王雁 武盈玉 孙开来 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期195-198,共4页
应用显微操作技术获取孕妇外周血中的单个有核红细胞 ,改良的PEP方法扩增单个有核红细胞的全基因组DNA ;在此基础上 ,应用荧光标记聚合酶链反应扩增 9个微卫星片段 ,进行基因型分析判定单个有核红细胞来源。综合性别和DMD基因内的数个ST... 应用显微操作技术获取孕妇外周血中的单个有核红细胞 ,改良的PEP方法扩增单个有核红细胞的全基因组DNA ;在此基础上 ,应用荧光标记聚合酶链反应扩增 9个微卫星片段 ,进行基因型分析判定单个有核红细胞来源。综合性别和DMD基因内的数个STR位点连锁分析进行DMD基因诊断 ,应用PCR -STR连锁分析进行PKU基因诊断。结果显示 ,对 10例DMD高危胎儿中的 6例成功地进行了无创性产前基因诊断。同时对 1例PKU也成功地进行了无创性产前基因诊断。改良的PEP方法扩增单个细胞的全基因组可以满足基因诊断的要求 。 展开更多
关键词 改良pep 无创性产前基因诊断 显微操作技术 应用
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PEP与阴离子表面活性剂复配体系泡沫性能的研究 被引量:15
19
作者 周莉 刘波 《功能高分子学报》 CAS CSCD 2001年第4期461-464,共4页
研究了PEP型非离子表面活性剂分别与十二烷基苯磺酸钠 (DBS) ,十二烷基硫酸钠 (SDS)形成复配体系的泡沫性能 ,讨论了浓度及配比的变化对泡沫性能的影响 ,结果表明起泡性和稳泡性皆随混合表面活性剂的浓度的上升而增强 ;在一定浓度下 ,随... 研究了PEP型非离子表面活性剂分别与十二烷基苯磺酸钠 (DBS) ,十二烷基硫酸钠 (SDS)形成复配体系的泡沫性能 ,讨论了浓度及配比的变化对泡沫性能的影响 ,结果表明起泡性和稳泡性皆随混合表面活性剂的浓度的上升而增强 ;在一定浓度下 ,随着PEP比例下降 ,起泡性和稳泡性也随着增大 ,并达到稳定值。 展开更多
关键词 pep 非离子表面活性剂 十二烷基苯磺酸钠 十二烷基硫酸钠 泡沫性能 起泡性 稳泡性
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PEP-1-SOD1融合蛋白的表达及纯化 被引量:7
20
作者 丁鹏 王家宁 +2 位作者 杨波 黄永章 骆丽娜 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第3期240-243,共4页
目的构建原核表达载体pET15bPEP1SOD1,并进行PEP1SOD1融合蛋白表达和纯化。方法以pBluescriptIISKSOD1质粒为模板,PCR扩增SOD1cDNA。经酶切后,分别构建原核表达载体pET15bSOD1和pET15bPEP1SOD1,经测序证实构建成功后,分别转化E.coliBL21... 目的构建原核表达载体pET15bPEP1SOD1,并进行PEP1SOD1融合蛋白表达和纯化。方法以pBluescriptIISKSOD1质粒为模板,PCR扩增SOD1cDNA。经酶切后,分别构建原核表达载体pET15bSOD1和pET15bPEP1SOD1,经测序证实构建成功后,分别转化E.coliBL21(DE3),表达SOD1和PEP1SOD1融合蛋白,并进行鉴定。结果SDSPAGE和Westernblot分析表明,分别在相对分子质量22000和26000处出现SOD1和PEP1SOD1目标表达条带,目的蛋白占菌体总蛋白的30%,两种表达蛋白以天然的、可溶性的形式存在。结论已成功地制备出SOD1和PEP1SOD1融合蛋白。 展开更多
关键词 锌-超氧化物歧化酶 原核表达 TA克隆 pep-1肽 融合蛋白
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